Genomic integration of the T-DNA re

Genomic integration of the T-DNA regionPutative transgenic pea plants expressing cry 1Ac gene for insect
resistance and bargene as a plant selec table marker gene were developed through Agrobacterium transformation. Selective regeneration and maintenance of the developed putative transgenicshoots were done on medium supplemented with PPT. Based onthe described procedure (Section 2.1), a minimum 7–9 months
were required to get the putative transgenic shoots ready for micrografting .In vitro putative transgenic shoots from more than65 clones out of 2500 explants were recovered by micro-grafting and analyzed using PCR and Southern blotting. PCR analysis wasdone for all recovered putative transgenic shoots while Southernblotting was done for few selected lines.
The results of PCR analysis using cry 1 Ac andbargene specific
primers (Fig. 3a and b) indicated the genomic integration of the T-DNA region and thereby the transgenic nature of the regenerated
in vitro plants. Further PCR analysis of the subsequent generations
(T1–T4) indicated the stable inheritance of the introduced
transgenes to the next generations (Fig. 3c and d). The result of
Southern blot analysis using DIG labeled non-radioactive cry1Ac
probe showed a single copy for two clones (DqR and DN) and five
copies for seven clones (A9R, B3, BR, C1, C4, C5 and CR) (Fig. 3

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รวม genomic พืชถั่วถั่วเหลือง regionPutative T-ดีเอ็นเอที่กำลังร้องไห้ 1Ac ยีนในแมลงต้านทานและ bargene เป็นโรงงานเลือกตารางเครื่องหมายยีนถูกพัฒนาผ่านการแปลงอโกรแบคทีเรียม มาตรการฟื้นฟูและการบำรุงรักษา transgenicshoots putative พัฒนาทำบนสื่อเสริม ด้วย PPT. ตามวิธีอธิบายไว้ (หัวข้อ 2.1), ได้ต่ำสุด 7-9 เดือนถูกต้องเพื่อเตรียมถ่ายภาพถั่วเหลือง putative micrograftingการเพาะเลี้ยงยอดถั่วเหลือง putative จากโคลน than65 เพิ่มเติมจาก 2500 explants ได้กู้ โดย grafting ไมโคร และวิเคราะห์โดยใช้ PCR และ blotting วิธีภาคใต้ Wasdone วิเคราะห์ PCR ทั้งหมดกู้คืนยอด putative ถั่วเหลืองขณะทำ Southernblotting สำหรับไม่กี่ใบผลของการใช้ PCR วิเคราะห์ร้องไห้ 1 Ac andbargene เฉพาะไพรเมอร์ (Fig. 3a และ b) ลักษณะของการ regenerated ถั่วเหลืองรวม genomic T DNA ภาค และจึงระบุการเพาะเลี้ยงพืช วิเคราะห์ PCR ต่อรุ่นต่อมา(T1-T4) ระบุเสถียรภาพที่สืบทอดของการนำtransgenes กับรุ่นถัดไป (Fig. 3c และ d) ผลของการคืนในตาภาคใต้วิเคราะห์ใช้ DIG ป้าย cry1Ac ไม่กัมมันตภาพโพรบพบสำเนาเดียวสำหรับสองโคลน (DqR และ DN) และห้าสำหรับโคลนเจ็ด (A9R, B3, BR, C1, C4, C5 และ CR) (Fig. 3

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บูรณาการจีโนมของ T-DNA regionPutative พืชถั่วพันธุ์แสดงร้องไห้ยีน 1AC สำหรับแมลง
ต้านทานและ bargene เป็น Selec โรงงานยีนเครื่องหมายตารางได้รับการพัฒนาผ่านการเปลี่ยนแปลง Agrobacterium เลือกการฟื้นฟูและการบำรุงรักษา transgenicshoots สมมุติที่พัฒนาได้ทำในอาหารที่เติม PPT ตามขั้นตอนที่อธิบาย onthe (มาตรา 2.1) ขั้นต่ำ 7-9 เดือนที่
จะต้องได้รับการดัดแปรพันธุกรรมสมมุติยิงพร้อมสำหรับ micrografting ในปีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อหน่อพันธุ์สมมุติจาก than65 โคลนออกจาก 2500 ชิ้นหายโดยไมโครปลูกถ่ายอวัยวะและวิเคราะห์โดยใช้วิธี PCR และซับใต้ wasdone วิเคราะห์ PCR สำหรับทุกคืนหน่อพันธุ์สมมุติขณะที่ Southernblotting ทำสำหรับสายที่เลือกไม่กี่
ผลการวิเคราะห์โดยใช้วิธี PCR 1 ร้องไห้ Ac andbargene เฉพาะ
ไพรเมอร์ (รูปที่ 3a. และข) แสดงให้เห็นการรวมจีโนมของภูมิภาค T-DNA และด้วยเหตุนั้น ธรรมชาติของพันธุ์อาศัยอยู่
ในหลอดทดลองพืช การวิเคราะห์ PCR ต่อไปของรุ่นถัดไป
(T1-T4) ชี้ให้เห็นมรดกที่มั่นคงของการแนะนำ
ยีนเพื่อให้คนรุ่นต่อไป (รูปที่ 3c และง.) ผลของ
การวิเคราะห์ blot ภาคใต้โดยใช้ DIG ป้าย cry1Ac ไม่มีกัมมันตภาพรังสี
สอบสวนพบสำเนาเดียวสองโคลน (DQR และ DN) และห้า
เล่มเจ็ดโคลน (A9R, B3, BR, C1, C4, C5 และ CR) (รูปที่ 3

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บูรณาการจีโนมของถั่วพืช t-dna regionputative ยีนแสดงร้องไห้ 1ac ยีนให้ต้านทานแมลง
bargene เป็นตารางและซีเลคเครื่องหมายโรงงานยีนถูกพัฒนาโดย Agrobacterium transformation . การเลือกและการดูแลรักษา พัฒนา transgenicshoots ซึ่งทำบนอาหารสูตร MS ที่เสริมด้วยน้ำทะเล ส่วนอธิบายขั้นตอนตาม ( 2.1 ส่วน )อย่างน้อย 7 – 9 เดือน
ต้องได้รับการแสดงออกยีนยิงพร้อม micrografting . ในหลอดทดลองซึ่งจำลองยิงจาก than65 โคลนออก 2500 ชิ้นส่วนหายโดยไมโครการวิเคราะห์โดยใช้วิธี PCR และ Southern blotting . การวิเคราะห์ข้อมูลทั้งหมดที่กู้คืนต้นหน่อซึ่งการแสดงออกในขณะที่ southernblotting ทำไปบรรทัดที่เลือกไม่กี่ .
ผลของการวิเคราะห์ PCR โดยใช้ primers จำเพาะร้องไห้ 1 AC andbargene
( รูปที่ 3A และ B แบบบูรณาการจีโนมของ t-dna ภูมิภาคและงบลักษณะพันธุกรรมของกลับมา
ในหลอดทดลองพืช การวิเคราะห์ดีเอ็นเอเพิ่มเติม ต่อมารุ่น
( T1 ( T4 ) พบมรดกที่มั่นคงของแนะนำ
transgenes ไปยังคนรุ่นต่อไป ( รูปที่ 3 C และ D ) ผลของ
Southern blot การวิเคราะห์ใช้ขุดป้ายไม่ cry1ac
ตรวจสอบกัมมันตรังสีพบสำเนาเดียวสำหรับสองสายพันธุ์ ( และ dqr DN ) 5
เล่ม 7 โคลน ( a9r , B3 , ห้องนอน , C1 , C4 , C5 และ CR ) ( รูปที่ 3