β-actin was used as internal standa

β-actin was used as internal standard. All primers were synthesized commercially by TaKaRa Biotechnology (Dalian, China). Quantitative Real-time PCR used was 96-well CFX-96 Real-Time PCR detection System (Bio-Rad, USA). The SYBR Green PCR reaction system was 10 μl in total, it was composed of 5 μl SYBR Premix Ex Taq™ (2×), 1 μl each of forward and reverse primers, 2 μl ddH2O and 1 μl cDNA. Each sample was amplified in triplicate. The parameters of real-time PCR were as follows: a pre-run at 95 °C for 10 s, 40 cycles of denaturation step at 95 °C for 5 s, followed by a 60 °C annealing step for 25 s and a 72 °C extension step for 15 s. Melting curve conditions were: 1 cycle of denaturation at 95 °C for 10 s, then 65 °C change to 95 °C with temperature change velocity at 0.5 °C/s. Gene expression data from replicate samples were averaged and analyzed using the Pfaffl method (Pfaffl, 2001) to between the cassava and maize cycle threshold values.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Βแอกตินถูกใช้เป็นมาตรฐานภายใน ไพรเมอร์ทั้งหมดถูกสังเคราะห์ในเชิงพาณิชย์ โดยเทคโนโลยีชีวภาพ TaKaRa (ต้าเหลียน จีน) Real-time PCR เชิงปริมาณที่ใช้ถูกดี 96 CFX 96 Real-Time PCR ตรวจหาระบบ (Bio Rad สหรัฐอเมริกา) ระบบปฏิกิริยา SYBR Green PCR μl 10 รวม ถูกประกอบ 5 μl ™ Premix SYBR Ex Taq (2 ราย), 1 μl แต่ละของไพรเมอร์ไปข้างหน้า และย้อนกลับ 2 μl ddH2O และ 1 μl cDNA แต่ละอย่างถูกขยายใน triplicate พารามิเตอร์ของ PCR แบบเรียลไทม์มีดังนี้: รันก่อนที่ 95 ° C 10 s วงจร 40 ขั้นตอน denaturation ที่ 95 ° C สำหรับ 5 s ตาม° C 60 การอบเหนียวขั้นตอน 25 s และส่วนขยาย 72 ° C เป็นขั้นตอนสำหรับมีสภาพโค้งหลอมเหลว s ได้ 15:1 รอบของ denaturation ที่ 95 ° C มีอุณหภูมิเปลี่ยนแปลงความเร็วที่ 0.5 ° C สำหรับเปลี่ยน 10 s แล้ว 65 ° C ถึง 95 ° C/s ข้อมูลนิพจน์ยีนจากจำลอง ตัวอย่างที่ averaged และวิเคราะห์โดยใช้วิธี Pfaffl (Pfaffl, 2001) การระหว่างมันสำปะหลังและข้าวโพดรอบค่าขีดจำกัด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

β-โปรตีนถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐานภายใน ไพรเมอร์ทั้งหมดถูกสังเคราะห์ในเชิงพาณิชย์โดย TaKaRa เทคโนโลยีชีวภาพ (Dalian, จีน) ปริมาณ Real-time PCR ที่ใช้เป็น 96 หลุม CFX-96 แบบ Real-Time PCR ระบบการตรวจสอบ (Bio-Rad, ประเทศสหรัฐอเมริกา) ระบบปฏิกิริยาสีเขียว SYBR PCR คือ 10 ไมโครลิตรทั้งหมดมันก็ประกอบด้วย 5 ไมโครลิตร SYBR พรีมิกซ์ Ex Taq ™ (2 ×) 1 ไมโครลิตรแต่ละข้างหน้าและย้อนกลับไพร 2 ไมโครลิตร ddH2O และ cDNA 1 ไมโครลิตร แต่ละตัวอย่างถูกขยายในเพิ่มขึ้นสามเท่า พารามิเตอร์ของ real-time PCR มีดังนี้วิ่งก่อนที่ 95 ° C เป็นเวลา 10 วินาที, 40 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติขั้นตอนที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 วินาที, ตามด้วย 60 องศาเซลเซียสขั้นตอนการอบเป็นเวลา 25 และ 72 ° C ขั้นตอนส่วนขยายสำหรับ 15 วินาที ละลายเงื่อนไขโค้งคือ 1 วงจรของการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่ 95 ° C เป็นเวลา 10 วินาทีแล้ว 65 องศาเซลเซียสการเปลี่ยนแปลงถึง 95 ° C ที่มีความเร็วการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิที่ 0.5 ° C / วินาที ข้อมูลการแสดงออกของยีนจากตัวอย่างซ้ำถูกเฉลี่ยและวิเคราะห์โดยใช้วิธี Pfaffl (Pfaffl, 2001) ระหว่างมันสำปะหลังและค่าเกณฑ์วงจรข้าวโพด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บีตา - actin ถูกใช้เป็นมาตรฐานภายใน ทุกชิ้นดีเอ็นเอสังเคราะห์ในเชิงพาณิชย์โดยเทคโนโลยีชีวภาพ ทาคาระ ( Dalian , จีน ) ปริมาณเวลา PCR จริงใช้เป็น 96 ดี cfx-96 เวลาจริงและระบบตรวจจับ ( USA ชีวภาพราด ) ระบบของปฏิกิริยา PCR ได้ 10 μ SYBR กรีนผมทั้งหมดมันประกอบด้วย 5 μฉัน SYBR รวมอดีตได้ดี™ ( 2 × ) 1 μ L แต่ละไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์ ddh2o L และ 2 μ cDNA L 1 μ .แต่ละตัวอย่างของทั้งสามใบ พารามิเตอร์ของ PCR แบบเรียลไทม์ ดังนี้ ก่อนทำงานที่ 95 องศา C 10 , 40 รอบของขั้นตอน ( 95 องศา C เป็นเวลา 5 วินาที ตามด้วย 60 ° C ขั้นตอนการอบ 25 และ 72 ° C เป็นเวลา 15 วินาที ส่วนขยายขั้นตอนละลายสภาพโค้ง 1 รอบ ( ที่ 95 องศา C เป็นเวลา 10 วินาที แล้ว 65 ° C 95 องศา C เปลี่ยนความเร็วเปลี่ยนอุณหภูมิ 0.5 ° C / Sทำซ้ำข้อมูลการแสดงออกของยีนจากจำนวนเฉลี่ย และวิเคราะห์ข้อมูลโดยวิธีการ pfaffl ( pfaffl , 2001 ) ระหว่าง มันสำปะหลัง และข้าวโพดเลี้ยงสัตว์ เกณฑ์ของค่า