A sensitive and reliable high-throu

A sensitive and reliable high-throughput approach to screen lipoxygenase (LOX) mutants was developed
to permit a directed evolution study in an attempt to increase the activity and thermostability of LOX
from Anabaena sp. PCC 7120 using error-prone polymerase chain reaction (PCR) and DNA shuffling. The
best mutant, named D22, contained one key amino acid change (N305D) and its half-life of inactivation
at 50 ◦C was increased by approximately twofold in comparison to the wild-type enzyme, while specific
activity 1.87-fold higher than the wild-type enzyme. The N305D substitution was confirmed to be critical
for the thermostability and catalytic activity of LOX by site-saturation mutagenesis. Indeed, the reaction
temperature for maximum activity increased from 45 ◦C to 50 ◦C, while catalytic efficiency (kcat/Km) was
increased by 83%. This study reports for the first timeThe activity and thermostability of the LOX from Anabaena sp.
PCC 7120 was improved by combining epPCR and DNA shuffling.
The best variant, which had one amino acid substitution (N305D),
exhibited a two-fold increase in t1/2 and a 1.87-fold increase in specific
activity compared to the wild-type ana-LOX. The amino acid
Asp305 was confirmed by site-saturation mutagenesis to be crucial
for improving activity and thermostability. The mutant with
enhanced activity and thermostability is potentially useful for food
industry applications. on the directed evolution of the LOX from Anabaena
sp. for improving thermostability and catalytic activity, and the mutant is of potential importance in food
processing and flavor biosynthesis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการอัตราความเร็วสูงมีความสำคัญ และเชื่อถือได้กับจอ lipoxygenase (LOX) สายพันธุ์ได้รับการพัฒนาเพื่ออนุญาตให้มีการศึกษาวิวัฒนาการโดยตรงในความพยายามที่จะเพิ่มกิจกรรมและ thermostability LOXจาก Anabaena sp. PCC 7120 ใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่มักผิดพลาดพอลิเมอเรส (PCR) และดีเอ็นเอสลับ ที่สุด mutant, D22 ชื่อ ที่อยู่ของ half-life ของยกเลิกการเรียกและเปลี่ยนกรดอะมิโนสำคัญหนึ่ง (N305D)ที่ 50 ◦C ขึ้น โดยประมาณสองเท่าโดยเอนไซม์ชนิดป่า ในขณะที่เฉพาะกิจกรรม 1.87-fold สูงกว่าเอนไซม์ชนิดป่า แทน N305D ได้รับการยืนยันเป็นสำคัญthermostability และกิจกรรมตัวเร่งปฏิกิริยาของ LOX โดย mutagenesis เข้มไซต์ แน่นอน ปฏิกิริยาอุณหภูมิสำหรับกิจกรรมสูงสุดเพิ่มขึ้นจาก 45 ◦C 50 ◦C ในขณะประสิทธิภาพของตัวเร่งปฏิกิริยา (kcat/Km)เพิ่มขึ้น 83% การศึกษานี้รายงานสำหรับกิจกรรม timeThe แรกและ thermostability LOX จาก Anabaena spPCC 7120 ถูกพัฒนาโดย epPCR และสับดีเอ็นเอตัวแปรสุด ซึ่งมีกรดอะมิโนหนึ่งแทน (N305D),จัดแสดงเพิ่มสองพับมี t1/2 และเพิ่มเป็น 1.87-fold เฉพาะกิจกรรมเปรียบเทียบกับป่าชนิดอนา-LOX กรดอะมิโนAsp305 ได้รับการยืนยัน โดย mutagenesis เข้มไซต์เป็นสำคัญสำหรับการปรับปรุงกิจกรรมและ thermostability Mutant ด้วยกิจกรรมพิเศษและ thermostability คืออาจมีประโยชน์สำหรับอาหารใช้งานอุตสาหกรรม ในวิวัฒนาการโดยตรงของ LOX จาก Anabaenasp.ในการปรับปรุง thermostability และกิจกรรมตัวเร่งปฏิกิริยา และ mutant เป็นศักยภาพสำคัญในอาหารประมวลผลและรสสังเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

มีความไวและเชื่อถือได้วิธีสูงผ่านไปยังหน้าจอ lipoxygenase (แซลมอนรมควัน)
การกลายพันธุ์ได้รับการพัฒนาเพื่อเปิดโอกาสให้การศึกษาวิวัฒนาการกำกับในความพยายามที่จะเพิ่มกิจกรรมและทนร้อนของแซลมอนรมควันจาก
Anabaena SP PCC 7120 โดยใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอผิดพลาดได้ง่าย (PCR) และสับดีเอ็นเอ
กลายพันธุ์ที่ดีที่สุดชื่อ D22, มีการเปลี่ยนแปลงกรดอะมิโนที่สำคัญอย่างหนึ่ง (N305D)
และครึ่งชีวิตของการใช้งานที่50
◦Cได้เพิ่มขึ้นประมาณสองเท่าเมื่อเทียบกับเอนไซม์ชนิดป่าในขณะที่เฉพาะกิจกรรมที่1.87 เท่าสูงกว่า เอนไซม์ชนิดป่า การเปลี่ยนตัวผู้เล่น N305D
ได้รับการยืนยันที่จะมีความสำคัญสำหรับทนร้อนและกิจกรรมการเร่งปฏิกิริยาของแซลมอนรมควันโดยฉับเว็บไซต์อิ่มตัว อันที่จริงการเกิดปฏิกิริยาอุณหภูมิสูงสุดเป็นกิจกรรมที่เพิ่มขึ้นจาก 45 ◦Cถึง 50 ◦Cในขณะที่ประสิทธิภาพการใช้ตัวเร่งปฏิกิริยา (kcat / กิโลเมตร) ได้เพิ่มขึ้น83% นี้รายงานการศึกษาสำหรับกิจกรรม timeThe ครั้งแรกและทนร้อนของแซลมอนรมควันจาก Anabaena sp. จำนวนPCC 7120 ได้รับการปรับปรุงโดยการรวม epPCR และสับดีเอ็นเอ. ตัวแปรที่ดีที่สุดซึ่งมีหนึ่งทดแทนกรดอะมิโน (N305D) แสดงเพิ่มขึ้นสองเท่าใน t1 / 2 และเพิ่มขึ้น 1.87 เท่าในเฉพาะกิจกรรมเมื่อเทียบกับป่าประเภทana-LOX กรดอะมิโนAsp305 รับการยืนยันโดยฉับเว็บไซต์อิ่มตัวจะเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการปรับปรุงกิจกรรมและทนร้อน กลายพันธุ์ที่มีกิจกรรมที่เพิ่มขึ้นและทนร้อนอาจเป็นประโยชน์สำหรับอาหารงานอุตสาหกรรม เกี่ยวกับวิวัฒนาการของการกำกับแซลมอนรมควันจาก Anabaena SP สำหรับการปรับปรุงการทนร้อนและการเร่งปฏิกิริยาและกลายพันธุ์เป็นสิ่งที่สำคัญที่อาจเกิดขึ้นในอาหารการประมวลผลและการสังเคราะห์รสชาติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อ่อนไหวง่ายและเชื่อถือได้วิธีการที่จะช่วยจอภาค ( LOX ) กลายพันธุ์พัฒนา
ให้ผู้กํากับวิวัฒนาการศึกษาในความพยายามที่จะเพิ่มกิจกรรมของ Anabaena sp . LOX ทดล
จาก PCC 7120 ข้อผิดพลาดมักจะใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่และดีเอ็นเอสับไพ่
ชื่อ d22 ที่ดีที่สุด , กลายพันธุ์มีอยู่หนึ่งที่สำคัญในการเปลี่ยนกรดอะมิโน ( n305d ) และค่าครึ่งชีวิตของการยับยั้ง
ที่ 50 ◦ C เพิ่มขึ้นประมาณสองเท่าในการผลิตเอนไซม์ โดยเฉพาะ
1.87-fold สูงกว่ากิจกรรมของเอนไซม์ การ n305d ทดแทนได้รับการยืนยันเป็นวิกฤต
สำหรับทดลและฤทธิ์ของความอิ่มตัวของออกซิเจนเหลว โดยเว็บไซต์ . แน่นอน , ปฏิกิริยา
อุณหภูมิสูงสุดสำหรับกิจกรรมเพิ่มขึ้นจาก 45 ◦ C 50 ◦ C ในขณะที่ประสิทธิภาพการ ( kcat / km ) คือ
เพิ่มขึ้น 83 % รายงานการศึกษานี้เป็นครั้งแรก timethe กิจกรรมและทดลของปลาแซลมอนรมควันจาก Anabaena sp .
PCC 7120 ดีขึ้น โดยรวม eppcr และดีเอ็นเอสับไพ่
ตัวแปรที่ดีที่สุดซึ่งมีกรดอะมิโนทดแทน ( n305d )
) เป็นสองเท่าเพิ่ม T1 / 2 และ 187 พับเพิ่มในกิจกรรมเฉพาะ
เมื่อเทียบกับของ ANA ปลาแซลมอนรมควัน . กรดอะมิโน asp305
ยืนยันได้จากเว็บไซต์ของการเป็นสําคัญ
สำหรับการปรับปรุงกิจกรรมและทดล . กลายพันธุ์กับ
กิจกรรมเพิ่มประสิทธิภาพและเป็นประโยชน์อาจทดลสำหรับการใช้งานอุตสาหกรรมอาหาร

ในกำกับวิวัฒนาการของปลาแซลมอนรมควันจาก
Anabaena sp .สำหรับการปรับปรุงกิจกรรมทดลและ catalytic และกลายพันธุ์เป็นศักยภาพสำคัญในการประมวลผลอาหาร
และรสชาติใน .