The TaqMan RT-qPCR analysis (Heid e

The TaqMan RT-qPCR analysis (Heid et al., 1996) was optimized
to quantify transcripts for different genes in goat in vivo-matured
oocytes (GDF9, BMP15, BAX, and BCL2L10; Table 3). Samples were
reversed transcribed, and the specific targets were amplified using
the CellsDirectTM One-Step qRT-PCR Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA,
USA). Briefly, mature oocytes were washed in PBS supplemented
with 0.1% polyvinyl alcohol upon thawing and grouped (n = 4 or
5 oocytes per pool) according to each treatment. Each pool of
MII oocytes was transferred to a 200-L nuclease-free tube containing
10 L resuspension buffer and 1 L lysis enhancer. Tubes
were incubated at 50 ◦C for 10 min in a thermocycler.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวิเคราะห์ TaqMan RT-qPCR (Heid et al. 1996) ถูกปรับให้เหมาะสมการวัดปริมาณใบสำหรับยีนแตกต่างกันในแพะใน vivo ที่ครบกำหนดเซลล์ไข่ (GDF9, BMP15, BAX และ BCL2L10 ตาราง 3) การเก็บตัวอย่างกลับรายการศัพท์ และเป้าหมายที่เฉพาะเจาะจงได้ขยายการใช้ขั้นตอนเดียว CellsDirectTM qRT-PCR Kit (Invitrogen คาร์ลบาด แคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา) สั้น ๆ เส้นผู้ใหญ่ถูกล้างใน PBS เสริมด้วยโพลีไวนิลแอลกอฮอล์ 0.1% เมื่อละลาย และจัดกลุ่ม (n = 4 หรือเส้น 5 ต่อสระว่ายน้ำ) ตามแต่ละการรักษา แต่ละกลุ่มเส้นหมี่ถูกถ่ายโอนไปที่ประกอบด้วยหลอดฟรี nuclease 200 Lบัฟเฟอร์การ resuspension ตะกอน 10 L และ 1 L lysis enhancer หลอดได้รับการกกที่ 50 ◦C 10 นาทีในเครื่อง thermocycler

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ TaqMan RT-qPCR (. Heid, et al, 1996) ถูกปรับให้เหมาะสม
ที่จะหาจำนวนยีนที่ยีนที่แตกต่างกันในแพะในร่างกายครบ
เซลล์ไข่ (GDF9, BMP15, แบ็กซ์และ BCL2L10; ตารางที่ 3) ตัวอย่างที่ถูก
กลับรายการถ่ายทอดและเป้าหมายที่เฉพาะเจาะจงถูกขยายโดยใช้
CellsDirectTM ขั้นตอนเดียว qRT-PCR Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA,
USA) สั้น ๆ , การพัฒนาของไข่ผู้ใหญ่ถูกล้างในพีบีเอสเสริม
กับเครื่องดื่มแอลกอฮอล์โพลีไวนิล 0.1% เมื่อละลายและการจัดกลุ่ม (n = 4 หรือ
5 ต่อการพัฒนาของไข่สระว่ายน้ำ) ตามการรักษาแต่ละครั้ง สระว่ายน้ำของแต่ละ
MII เซลล์ไข่ที่ถูกย้ายไป 200-L หลอด Nuclease ฟรีมี
10 ลิตรบัฟเฟอร์ทับถมและการสลาย 1 ลิตรเพิ่มสลาย ท่อ
ถูกบ่มที่ 50 ◦Cเป็นเวลา 10 นาทีใน thermocycler

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การ taqman RT qpcr การวิเคราะห์ ( ขัง et al . , 1996 ) ก็เหมาะที่มีประวัติสำหรับยีนที่แตกต่างกันในแพะในร่างกายนะไข่ ( gdf9 bmp15 BAX และ , , , bcl2l10 ตารางที่ 3 ) ตัวอย่างคือกลับถ่ายทอด และเป้าหมายที่เฉพาะเจาะจงถูกขยายโดยใช้การ cellsdirecttm ขั้นตอนหนึ่งที่ข้าพเจ้า PCR Kit ( Invitrogen Carlsbad , CA ,สหรัฐอเมริกา ) สั้น ๆ , mature oocyte ใน PBS อาหารล้าง0.1 % โพลีไวนิลแอลกอฮอล์เมื่อละลายและจัดกลุ่ม ( n = 4 หรือ5 ไข่ต่อสระ ) ตามการรักษาแต่ละ สระว่ายน้ำของแต่ละMII oocytes ถูกส่งไป 200-l นิวเคลียสหลอดบรรจุฟรีบัฟเฟอร์ resuspension 10 ลิตร และเพิ่มการสลาย 1 . ท่ออุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีใน◦เทอร์มอไซเคล ์ .