[0026] A ไลโปคาลิน มิวทีน of the กา

[0026] A ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย may also be able to ยึดเกาะ an ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกัน of PCSK9. An ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกัน of PCSK9 is a ชิ้นส่วนย่อย that has one or more เอพิโทป, mimotopes or other antigenic determinants, and is thus capable of inducing an immune response or against which an antibody can be raised. The ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกัน may รวมถึง a single เอพิโทป or may have a plurality of เอพิโทป. Since an antigen-presenting system, e.g. a carrier protein, may be used to provide the size required for recognition by an immune system, no particular size limitation applies to the ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกัน. Hence, the ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกัน may also be a "hapten", i.e. a ชิ้นส่วนย่อย that need not be antigenic per se or may have low immunogenicity, in particular due to its small molecular weight and accordingly size. Typically an ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกัน can, alone or when presented on a carrier, be bound by an immunoglobulin. An ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกัน of PCSK9 is typically capable of interacting with LDL-R and thereby modulating low density lipoprotein (LDL) particles that circulate in the bloodstream. ในบางรุรุ, an ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกัน of PCSK9 retains the capability of the full length ligand to be recognized and/or bound by a ไลโปคาลิน มิวทีน according to the การเปิดเผย. For example, the immunogenic :ชิ้นส่วนย่อยmay be an N-terminally and/or C-terminally shortened protein or peptide.

[0027] In รุรุต่างๆ, the ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย are able to ยึดเกาะPCSK9 of a น็อนฮิวเมน ไพรเมต PCSK9 (e.g., ไซโนมอลกัส มังกี้ PCSK9 or chimpanzee PCSK9) or an ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกันของมัน with detectable แอฟฟินิตี้, i.e. with a KD of at least 200 nM. ในบางรุรุ a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย may ยึดเกาะa น็อนฮิวเมน ไพรเมต PCSK9 or an ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกันของมัน with a KD equal to or less than about 10 nM, about 1 nM or about 0.3 nM. In รุรุต่างๆ, antigen binding portion ยึดเกาะ to mouse PCSK9 or an ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกันของมัน with a Ko equal to or less than about 10 nM, about 1 nM or about 0.5 nM.

[0028] In รุรุต่างๆ, one or more ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย are able to ยึดเกาะฮิวเมน PCSK9.9or an ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกันของมัน with detectable แอฟฟินิตี้, i.e. with a Ko of at least 200 nM. ในบางรุรุ a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย may ยึดเกาะ ฮิวเมน PCSK9.9 or an ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกันของมัน with a Ko equal to or less than about 10 nM, about 1 nM, about 0.1 nM, about 0.5 nM, about0.25 nM, about 10 pM or even less.

[0029) In some further embodiments, binding แอฟฟินิตี้ of one or more ไลโปคาลิน มิวทีน to ฮิวเมน PCSK9 or an ชิ้นส่วนย่อย ก่อการ ตอบสนองภูมิคุ้มกันของมัน have been found to be of a Kn below 0.1 nM and ในบางรุรุ be of a Ko equal to or less than about 1 picomolar (pM) (see Figure 7).

[0030) The binding แอฟฟินิตี้ of a ไลโปคาลิน มิวทีน to a selected target, in the present case PCSK9, can be measured and thereby Kn values of a มิวทีน-ligand complex be determine by a multitude of methods known to those skilled in the art. Such methods รวมถึง, but are not limited to, fluorescence titration, competition ELISA, calorimetric methods, such as isothermal titration calorimetry (ITC), and surface plasmon resonance (BIAcore). Examples for such methods are detailed below (See e.g. Example 7).

[0031) In one embodiment, a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย may act as an แอนตาโกนิสต์ of PCSK9. The term "แอนตาโกนิสต์ of PCSK9," ตามที่ใช้ในที่นี้, refers to an agent that is capable of interfere with the binding between PCSK9 and LDL-R. In some cases, a PCSK9 แอนตาโกนิสต์ can be identified by its ability to fully or partically inhibit the binding between PCSK9 and LDL-R.

[0032] Futhermore, a ไลโปคาลิน • มิวทีน of the การเปิดเผย may be competitive for binding ofLDL-R to PCSK9 (see Example 7).

[0033] In addition, a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย may be competitive for binding of a monoclonal antibody ซึ่งประกอบรวมด้วย SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 33 to PCSK9 (see Example 12).

[0034] In a further embodiment, a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย may be able to fully or partially inhibit PCSK9-mediated downregulation of LDL-R. Inhibition occurs, for example, where PCSK9-mediated downregulation of LDL-R, when exposed to a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย, is at least about 10% less, e.g. at least about 25%, 50%, 75% less, or totally inhibited, in comparison to PCSK9-mediated downregulation of LDL-R in the presence of a control or in the absence of the ไลโปคาลิน มิวทีน. In some still further embodiments, a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย may be able to inhibit PCSK9-mediated downregulation of LDL-R in a dose-dependent manner. In some still further embodiments, the inhibition of PCSK9-mediated downregulation of LDL-R can be demonstrated in a HEPG2-cell-based assay as essentially described in Example 13.
[0035) In yet another embodiment, a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย may be able to restore LDL uptake in the presence of PCSK9. In some further embodiments, the restorage of LDL updtake in the presence of PCSK9 can be demonstrated in a HEPG2-cell-based assay as essentially described in Example 11. In some still furtherernbodiments, to set up the assay, HEPG2 cells may be incubated with a fixed concentration of hPCSK9 (e.g. 100 nM) and then
may be titrated with one or more ไลโปคาลิน มิวทีน.


[0036) PCSK.9 can be taken to define a non-natural ligand of hum.an tear ไลโปคาลิน. The term "non-natural ligand" refers to a compound, which does not ยึดเกาะto ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย under physiological conditions. The term "ไลโปคาลินนุนุ" ตามที่ใช้ในที่นี้ refers to the ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย corresponding to the protein of the SWISS-PROT Data Bank Accession Number P3 l 025, while the ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย (SEQ ID NO:
1) does not รวมถึง the N-terminal signal peptide that is รวมถึงd in the sequence of SWISS• PROT Accession Number P31025.

[0037) The amino acid sequence of a มิวทีน of the การเปิดเผย has a high sequence identity to ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย (SEQ ID NO: 1). In this context, the amino acid sequence of a มิวทีน of the การเปิดเผย may be substantially similar to the amino acid sequence of ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย. A respective sequence of a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย, being substantially similar to the sequences of ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย, may have in รุรุต่างๆ at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 82%, at least
85%, at least 87% or at least 90% identity, ที่รวมถึง at least 95% identity, to the sequence of ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย (see, for example, Figure 10 and Figure 14), with the proviso that the altered position or sequence is retained.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

[0026] A ไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยยังอาจจะยึดเกาะตอบสนองภูมิคุ้มกันก่อการชิ้นส่วนย่อยเป็นของ PCSK9 ตอบสนองภูมิคุ้มกันก่อการเป็นชิ้นส่วนย่อยของ PCSK9 เป็นชิ้นส่วนย่อยที่มีอย่าง น้อยหนึ่งเอพิโทป mimotopes หรืออื่น ๆ ดีเทอร์มิแนนต์ antigenic และดังนั้นจึงสามารถ inducing การตอบสนองภูมิคุ้มกัน หรือ กับที่แอนติบอดีที่สามารถจะยก ชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันอาจรวมถึงเอพิโทปเดียว หรืออาจมีหลายฝ่ายของเอพิโทป ตั้งแต่ระบบการนำเสนอการตรวจหา เช่นการขนส่งโปรตีน อาจใช้เพื่อให้ขนาดที่จำเป็นสำหรับการมีระบบภูมิคุ้มกัน ไม่จำกัดขนาดเฉพาะที่ใช้กับชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกัน ดังนั้น ชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันยังได้เป็น "hapten" เช่นชิ้นส่วนย่อยที่จำเป็นไม่มี antigenic ต่อ se หรืออาจ immunogenicity ต่ำ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเนื่องจากน้ำหนักของโมเลกุลขนาดเล็ก และขนาดตาม โดยทั่วไปเป็นชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันสามารถ คนเดียว หรือเมื่อนำเสนอบนผู้ขนส่ง ติด immunoglobulin ตอบสนองภูมิคุ้มกันก่อการเป็นชิ้นส่วนย่อยของ PCSK9 โดยทั่วไปสามารถโต้ตอบกับ LDL-R และจึงเกี่ยวความหนาแน่นต่ำ (LDL) ไลโพโปรตีนอนุภาคที่ไหลเวียนในกระแสเลือดได้ ในบางรุรุ ตอบสนองภูมิคุ้มกันก่อการเป็นชิ้นส่วนย่อยของ PCSK9 ยังคงความสามารถของลิแกนด์แบบยาวสามารถรับรู้ และ/หรือติดมิวทีนไลโปคาลินตามการเปิดเผย ตัวอย่าง immunogenic: ชิ้นส่วนย่อยmay สามารถเป็น N-พฤติกรรม / C พฤติกรรมลดลงโปรตีนหรือเพปไทด์[0027] ในรุรุต่าง ๆ มิวทีนไลโปคาลินของการเปิดเผยจะ ยึดเกาะPCSK9 น็อนฮิวเมนไพรเมต PCSK9 (เช่น ไซโนมอลกัสมังกี้ PCSK9 หรือลิงชิมแปนซี PCSK9) หรือตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันก่อการเป็นชิ้นส่วนย่อยกับแอฟฟินิตี้สามารถตรวจสอบได้ เช่นกับ KD น้อย 200 nM ในบางรุรุมิวทีนไลโปคาลินของการเปิดเผยอาจ ยึดเกาะa น็อนฮิวเมนไพรเมต PCSK9 หรือตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันก่อการชิ้นส่วนย่อย KD ค่าเท่ากับหรือน้อยกว่าประมาณ 10 nM ประมาณ 1 นาโนเมตรหรือประมาณ 0.3 nM ในรุรุต่าง ๆ ยึดเกาะส่วนรวมการตรวจหาการเมาส์ PCSK9 หรือตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันก่อการชิ้นส่วนย่อยเกาะค่าเท่ากับหรือน้อยกว่าประมาณ 10 nM ประมาณ 1 นาโนเมตรหรือประมาณ 0.5 นาโนเมตร[0028] ในรุรุต่าง ๆ มิวทีนไลโปคาลิน น้อยของการเปิดเผยจะยึดเกาะฮิวเมน PCSK9.9or ตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันก่อการเป็นชิ้นส่วนย่อยกับแอฟฟินิตี้สามารถตรวจสอบได้ เช่น มีเกาะน้อย 200 nM ในบางรุรุมิวทีนไลโปคาลินของการเปิดเผยอาจยึดเกาะฮิวเมน PCSK9.9 หรือตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันก่อการชิ้นส่วนย่อยเกาะค่าเท่ากับหรือน้อยกว่าประมาณ 10 nM ประมาณ 1 nM เกี่ยวกับ 0.1 nM เกี่ยวกับ nM 0.5, about0.25 nM, 22.00 น.หรือแม้แต่น้อย [0029) ในบาง embodiments เพิ่มเติม ผูกแอฟฟินิตี้ของมิวทีนไลโปคาลิน น้อย ไปฮิวเมน PCSK9 หรือชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันพบเป็นช็อปปิ้งต่ำกว่า 0.1 nM และในบางรุรุจะเกาะค่าเท่ากับหรือน้อยกว่าประมาณ 1 picomolar (pM) (ดูรูปที่ 7)[0030) สามารถวัดแอฟฟินิตี้รวมของมิวทีนไลโปคาลินไปยังเลือกเป้าหมาย ในกรณี PCSK9 ปัจจุบัน และกำหนดจึงช็อปปิ้งได้ค่าของลิแกนด์มิวทีนที่ซับซ้อน ด้วยหลากหลายวิธีที่รู้จักกับผู้เชี่ยวชาญในศิลปะการ เช่นวิธีรวมถึง แต่จะไม่จำกัด การไทเทรต fluorescence แข่งขัน ELISA วิธีการ calorimetric การไทเทรต isothermal calorimetry (ซี), และการสั่นพ้อง plasmon ผิว (BIAcore) ตัวอย่างสำหรับวิธีการดังกล่าวมีรายละเอียดด้านล่าง (ดูเช่นตัวอย่างที่ 7)[ลื่นในหนึ่ง 0031) มิวทีนไลโปคาลินของการเปิดเผยอาจทำหน้าที่เป็นแอนตาโกนิสต์เป็นของ PCSK9 คำว่า "แอนตาโกนิสต์ PCSK9 ตามที่ใช้ในที่นี้ หมายถึงตัวแทนที่สามารถรบกวนการรวมระหว่าง PCSK9 และ LDL R. ในบางกรณี PCSK9 ที่แอนตาโกนิสต์สามารถระบุได้ ด้วยความสามารถในการทั้งหมด หรือ partically ยับยั้งการรวมระหว่าง PCSK9 และ LDL R.[0032] Futhermore มิวทีน•ไลโปคาลินเป็นของการเปิดเผยอาจแข่งขันสำหรับผูก ofLDL R PCSK9 (ดูตัวอย่าง 7)[0033],มิวทีนไลโปคาลินของการเปิดเผยอาจแข่งขันสำหรับผูกของ monoclonal แอนติบอดีซึ่งประกอบรวมด้วยลำดับรหัสไม่: 29 และเลขลำดับ ID: 33 การ PCSK9 (ดูตัวอย่าง 12)[0034] ลื่นเพิ่มเติม มิวทีนไลโปคาลินของการเปิดเผยอาจเป็นทั้งหมด หรือบางส่วนยับยั้ง PCSK9 mediated downregulation ของ LDL-อาร์ ยับยั้งการเกิด ขึ้น เช่น downregulation PCSK9 mediated ของ LDL-R เมื่อมิวทีนไลโปคาลินของการเปิดเผย สัมผัสน้อยประมาณ 10% น้อย เช่นน้อยประมาณ 25%, 50%, 75% น้อยกว่า หรือทั้งหมด ห้าม โดย PCSK9 mediated downregulation ของ LDL-R ในต่อหน้า ของตัวควบคุม หรือในกรณีไลโปคาลินมิวทีน ในบาง embodiments ยังคงเพิ่มเติม มิวทีนไลโปคาลินของการเปิดเผยอาจสามารถยับยั้ง downregulation PCSK9 mediated ของ LDL-R ในลักษณะขึ้นอยู่กับปริมาณรังสี ในบาง embodiments ยังคงเพิ่มเติม ยับยั้ง PCSK9 mediated downregulation ของ LDL R สามารถแสดงในวิเคราะห์ HEPG2 เซลล์ตามที่อธิบายไว้ในตัวอย่างที่ 13 เป็นหลัก [0035) ในอีกลื่น มิวทีนไลโปคาลินของการเปิดเผยอาจสามารถคืนค่าดูดซับ LDL ในต่อหน้าของ PCSK9 ได้ ในบาง embodiments เพิ่มเติม restorage ของ updtake LDL ในต่อหน้าของ PCSK9 สามารถแสดงในวิเคราะห์ HEPG2 เซลล์ตามที่อธิบายไว้ในตัวอย่างที่ 11 เป็นหลัก ในบาง furtherernbodiments นิ่ง การตั้งค่าทดสอบ เซลล์ HEPG2 อาจจะ incubated กับความเข้มข้นคงที่ของ hPCSK9 (เช่น 100 nM) แล้วอาจ titrated กับอย่าง น้อยหนึ่งมิวทีนไลโปคาลิน[PCSK.9 0036) สามารถนำไปกำหนดไม่ใช่ธรรมชาติลิแกนด์ของไลโปคาลิน hum.an ฉีกขาด คำว่า "ลิแกนด์ไม่ใช่ธรรมชาติ" หมายถึงสารประกอบ ซึ่งไม่ ยึดเกาะto ไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัยสภาวะสรีรวิทยา คำที่หมายถึง "ไลโปคาลินนุนุ" ตามที่ใช้ในที่นี้เต็มวัยน้ำตามนุษย์ไลโปคาลินที่ตรงกับโปรตีนของสวิส PROT ธนาคารข้อมูลทะเบียนเลข P3 l 025 ในขณะไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย (ลำดับ ID ไม่:1) ไม่รวมถึงไม่เพปไทด์สัญญาณ N-เทอร์มินัลที่ รวมถึงd ในลำดับของ SWISS• PROT ทะเบียนหมายเลข P31025[0037) The amino acid sequence of a มิวทีน of the การเปิดเผย has a high sequence identity to ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย (SEQ ID NO: 1). In this context, the amino acid sequence of a มิวทีน of the การเปิดเผย may be substantially similar to the amino acid sequence of ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย. A respective sequence of a ไลโปคาลิน มิวทีน of the การเปิดเผย, being substantially similar to the sequences of ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย, may have in รุรุต่างๆ at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 82%, at least85%, at least 87% or at least 90% identity, ที่รวมถึง at least 95% identity, to the sequence of ไลโปคาลิน น้ำตามนุษย์ เต็มวัย (see, for example, Figure 10 and Figure 14), with the proviso that the altered position or sequence is retained.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

[0026] เป็นไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยก็อาจจะเป็นความสามารถในการยึดเกาะชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ PCSK9 ชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ PCSK9 เป็นชิ้นส่วนย่อยที่มีหนึ่งหรือมากกว่าเอพิโทป, mimotopes หรือแอนติเจนปัจจัยอื่น ๆ และดังนั้นจึงเป็นความสามารถในการกระตุ้นให้เกิดการตอบสนองภูมิคุ้มกันหรือกับแอนติบอดีที่สามารถยกได้ ชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันอาจรวมถึงเดียวเอพิโทปหรืออาจมีส่วนใหญ่ของเอพิโทป ตั้งแต่ระบบแอนติเจนนำเสนอเช่นโปรตีนผู้ให้บริการอาจจะใช้เพื่อให้มีขนาดที่จำเป็นสำหรับการได้รับการยอมรับโดยระบบภูมิคุ้มกัน จำกัด ขนาดไม่เฉพาะใช้กับชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกัน ดังนั้นชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันก็อาจจะเป็น "hapten" เช่นชิ้นส่วนย่อยที่ไม่จำเป็นต้องเป็นแอนติเจนต่อหรืออาจมีภูมิคุ้มกันต่ำโดยเฉพาะอย่างยิ่งเนื่องจากน้ำหนักโมเลกุลขนาดเล็กและขนาดตาม โดยปกติชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันสามารถเพียงอย่างเดียวหรือเมื่อนำเสนอกับผู้ให้บริการที่จะผูกพันตามอิมมูโน ชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ PCSK9 โดยทั่วไปจะมีความสามารถในการมีปฏิสัมพันธ์กับ LDL-R และจึงเลตไลโปโปรตีนชนิดความหนาแน่นต่ำ (LDL) อนุภาคที่ไหลเวียนในกระแสเลือด ในบางรุรุเป็นชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ PCSK9 ยังคงรักษาความสามารถในการแกนด์ยาวเต็มรูปแบบได้รับการยอมรับและ / หรือผูกพันตามไลโปคาลินมิวทีนตามการเปิดเผย ยกตัวอย่างเช่นภูมิคุ้มกัน: ชิ้นส่วนย่อยอาจจะเป็น N-หนักและ / หรือ C-หนักสั้นลงโปรตีนหรือเปปไทด์. [0027] ในรุรุต่างๆที่ไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยจะสามารถ ยึดเกาะ PCSK9 ของน็อนฮิวเมนไพรเมต PCSK9 (เช่นไซโนมอลกัสมังกี้ PCSK9 หรือลิงชิมแปนซี PCSK9) หรือชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันที่มีการตรวจพบแอฟฟินิตี้, เช่นกับ KD อย่างน้อย 200 นาโนเมตร ในบางรุรุไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจยึดเกาะน็อนฮิวเมนไพรเมต PCSK9 หรือชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันกับ KD เท่ากับหรือน้อยกว่าประมาณ 10 นาโนเมตรประมาณ 1 นาโนเมตรหรือประมาณ 0.3 นาโนเมตร ในรุรุต่างๆแอนติเจนผูกพันส่วนที่ยึดเกาะเพื่อ PCSK9 เมาส์หรือชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันกับเกาะเท่ากับหรือน้อยกว่าประมาณ 10 นาโนเมตรประมาณ 1 นาโนเมตรหรือประมาณ 0.5 นาโนเมตร. [0028] ในรุรุต่างๆ, หนึ่งหรือมากกว่าไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยจะสามารถยึดเกาะฮิวเมน PCSK9.9or ชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันที่มีการตรวจพบแอฟฟินิตี้คือมีเกาะของ อย่างน้อย 200 นาโนเมตร ในบางรุรุไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจยึดเกาะฮิวเมน PCSK9.9 หรือชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันกับเกาะเท่ากับหรือน้อยกว่าประมาณ 10 นาโนเมตรประมาณ 1 นาโนเมตรประมาณ 0.1 นาโนเมตรประมาณ 0.5 นาโนเมตร, about0.25 นาโนเมตรประมาณ 10:00 หรือ. แม้แต่น้อย[0029) ในบาง embodiments เพิ่มเติมผูกพันแอฟฟินิตี้ของหนึ่งหรือมากกว่าไลโปคาลินมิวทีน การฮิวเมน PCSK9 หรือชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันได้รับพบว่าจะมี Kn ด้านล่าง 0.1 นาโนเมตรและในบางรุรุจะมีเกาะเท่ากับหรือน้อยกว่าประมาณ 1 picomolar (PM) (ดูรูปที่ 7 ). [0030) ผูกพันแอฟฟินิตี้ของไลโปคาลินมิวทีนที่จะเป็นเป้าหมายที่เลือกใน PCSK9 กรณีที่ปัจจุบันสามารถวัดและค่า Kn จึงของมิวทีน -ligand ซับซ้อน ได้รับการตรวจสอบโดยความหลากหลายของวิธีการที่รู้จักกันให้กับผู้ที่มีความสามารถในศิลปะ วิธีการดังกล่าวรวมถึง แต่ไม่ จำกัด เพียงการไตเตรทเรืองแสง, ELISA แข่งขันวิธีแคลอรีเช่น calorimetry ไตเตรท isothermal (ITC) และเสียงสะท้อนพื้นผิว plasmon (Biacore) ตัวอย่างสำหรับวิธีการดังกล่าวมีรายละเอียดดังนี้ (ดูตัวอย่างเช่น 7). [0031) หนึ่งในศูนย์รวมเป็นไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจทำหน้าที่เป็นแอนตาโกนิสต์ของ PCSK9 คำว่า "แอนตาโกนิสต์ของ PCSK9" ตามที่ใช้ในที่นี้หมายถึงตัวแทนที่สามารถยุ่งเกี่ยวกับการมีผลผูกพันระหว่าง PCSK9 และ LDL-R ในบางกรณี PCSK9 แอนตาโกนิสต์สามารถระบุได้โดยความสามารถในการได้อย่างเต็มที่หรือ partically ยับยั้งผูกพันระหว่าง PCSK9 และ LDL-R. [0032] เอาอีกแล้วเป็นไลโปคาลิน•มิวทีนของ การเปิดเผยอาจจะมีการแข่งขันสำหรับการผูก ofLDL-R เพื่อ PCSK9 (ดูตัวอย่าง 7). [0033] นอกจากนี้ไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจจะมีการแข่งขันที่มีผลผูกพันของแอนติบอดีซึ่งประกอบ รวมด้วย SEQ ID NO: 29 SEQ ID NO. 33 PCSK9 (ดูตัวอย่าง 12) [0034] ในศูนย์รวมต่อไปเป็นไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจจะทั้งหมดหรือบางส่วน ยับยั้งการ downregulation PCSK9 พึ่งของ LDL-R ยับยั้งการเกิดขึ้นเช่นที่ PCSK9 พึ่ง downregulation ของ LDL-R เมื่อสัมผัสกับไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยเป็นอย่างน้อยประมาณ 10% น้อยเช่นอย่างน้อยประมาณ 25%, 50 % 75% น้อยกว่าหรือยับยั้งโดยสิ้นเชิงเมื่อเปรียบเทียบกับ PCSK9 พึ่ง downregulation ของ LDL-R ในที่ที่มีการควบคุมหรือในกรณีที่ไม่มีของไลโปคาลิที่นมิวทีน ในบาง embodiments ต่อไปยังคงเป็นไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจจะสามารถยับยั้งการ downregulation PCSK9 พึ่งของ LDL-R ในลักษณะที่ขึ้นอยู่กับปริมาณ ในบาง embodiments ต่อไปยังที่ยับยั้งการ downregulation PCSK9 พึ่งของ LDL-R สามารถแสดงให้เห็นในการทดสอบ HepG2 เซลล์ตามที่อธิบายไว้เป็นหลักในตัวอย่างที่ 13 [0035) ยังเป็นศูนย์รวมในอีกไลโปคาลินมิ วทีนของการเปิดเผยอาจจะสามารถที่จะเรียกคืนการดูดซึม LDL ในการปรากฏตัวของ PCSK9 ใน embodiments เพิ่มเติมบาง restorage ของ updtake LDL ในการปรากฏตัวของ PCSK9 สามารถแสดงให้เห็นในการทดสอบตาม HepG2 เซลล์เป็นหลักตามที่อธิบายไว้ในตัวอย่างที่ 11. ในบางส่วนยังคง furtherernbodiments ที่การตั้งค่าการทดสอบเซลล์ HepG2 อาจจะบ่มกับ ความเข้มข้นคงที่ของ hPCSK9 (เช่น 100 นาโนเมตร) และจากนั้นอาจจะมีการปรับขนาดหนึ่งคนหรือมากกว่าไลโปคาลินมิวทีน. [0036) PCSK.9 สามารถนำไปกำหนดแกนด์ที่ไม่ใช่ธรรมชาติของการฉีกขาด hum.an ไลโปคาลิน คำว่า "แกนด์ที่ไม่เป็นธรรมชาติ" หมายถึงสารที่ไม่ได้ยึดเกาะเพื่อไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัยภายใต้เงื่อนไขทางสรีรวิทยา คำว่า "ไลโปคาลินนุนุ" ตามที่ใช้ในที่นี้หมายถึงไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัยที่สอดคล้องกับโปรตีนของสวิส-PROT ข้อมูลธนาคารจำนวนภาคยานุวัติ P3 ลิตร 025 ในขณะที่ไลโป คาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย (SEQ ID NO: 1). ไม่รวมถึง N-terminal ของเปปไทด์สัญญาณที่มีรวมถึง d ในลำดับของสวิส• PROT ภาคยานุวัติจำนวน P31025 [0037) ลำดับกรดอะมิโนของมิ วทีนของการเปิดเผยตัวตนที่มีลำดับสูงเพื่อไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย (SEQ ID NO: 1) ในบริบทนี้ลำดับกรดอะมิโนของมิวทีนของการเปิดเผยอาจจะเป็นอย่างมากคล้ายกับลำดับกรดอะมิโนไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย ลำดับที่เกี่ยวข้องของไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยเป็นอย่างมากคล้ายกับลำดับของไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัยที่อาจจะมีในรุรุต่างๆอย่างน้อย 70% อย่างน้อย 75% อย่างน้อย 80% อย่างน้อย 82% อย่างน้อย85% อย่างน้อย 87% หรืออย่างน้อยตัวตน 90% ที่รวมถึงอย่างน้อยตัวตน 95% เพื่อให้ลำดับของไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย (ที่ ดูตัวอย่างรูปที่ 10 และรูปที่ 14) โดยมีเงื่อนไขว่าการเปลี่ยนแปลงตำแหน่งหรือลำดับที่ถูกเก็บไว้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

[ ] ไลโปคาลิน 0026 มิวทีนของการเปิดเผยอาจยังสามารถยึดเกาะเป็นชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ pcsk9 . การชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ pcsk9 เป็นชิ้นส่วนย่อยที่มีหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งเอพิโทป mimotopes , หรือตัวกำหนดชนิดอื่น ๆและจึงสามารถกระตุ้นการตอบสนองของภูมิคุ้มกันหรือแอนติบอดีต่อซึ่งสามารถยก การชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันอาจรวมถึงเป็นเอพิโทปเดียวหรืออาจจะมีหลายฝ่ายของเอพิโทป . ตั้งแต่ antigen-presenting ระบบผู้ให้บริการ เช่น โปรตีน อาจถูกใช้เพื่อให้ขนาดที่จําเป็นสําหรับการรับรู้โดยระบบภูมิคุ้มกันไม่เฉพาะขนาดจำกัดกับชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกัน . ดังนั้น ชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันยังอาจเป็น " hapten " คือชิ้นส่วนย่อยที่ต้องไม่มีแอนติเจนต่อ se หรืออาจจะสามารถต่ำ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเนื่องจากน้ำหนักของโมเลกุลขนาดเล็ก และตามขนาดโดยปกติจะเป็นชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันสามารถ คนเดียว หรือ เมื่อนำเสนอบนเรือบรรทุกเครื่องบิน ผูกพันโดยอิมมูโนกลอบูลิน การชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ pcsk9 โดยปกติจะสามารถโต้ตอบกับ ldl-r และงบของไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำ ( LDL ) อนุภาคที่ไหลเวียนในกระแสเลือดในบางรุรุ , ชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของ pcsk9 ยังคงความสามารถของลิแกนด์ความยาวเต็มรูปแบบจะได้รับการยอมรับ และ / หรือ ผูกมัดด้วยไลโปคาลินมิวทีนตามการการเปิดเผย . ตัวอย่างเช่น immunogenic : ชิ้นส่วนย่อยอาจเป็น n-terminally และ / หรือ c-terminally ย่อโปรตีนหรือเปปไทด์ .

[ 0027 ] ในรุรุต่างๆ , ไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยสามารถยึดเกาะ pcsk9 ของน็อนฮิวเมนไพรเมต pcsk9 ( เช่น ไซโนมอลกัสมังกี้ pcsk9 หรือลิงชิมแปนซี pcsk9 ) หรือชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันกับการตรวจพบแอฟฟินิตี้ )กับ KD อย่างน้อย 200 นาโนเมตร ในบางรุรุเป็นไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจยึดเกาะเป็นน็อนฮิวเมนไพรเมต pcsk9 หรือชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันที่มีขนาดน้อยกว่าหรือเท่ากับประมาณ 10 นาโนเมตร ประมาณ 1 นาโนเมตรหรือประมาณ 0.3 nm . รุรุต่างๆใน ,แอนติเจนยึดเกาะส่วนผูกพันกับ pcsk9 เมาส์หรือชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันกับเกาะน้อยกว่า หรือเท่ากับประมาณ 10 นาโนเมตร ( 1 นาโนเมตรหรือประมาณ 0.5 nm .

[ 0028 ] ในรุรุต่างๆ หนึ่งหรือมากกว่าไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยสามารถยึดเกาะฮิวเมน pcsk9 .9or เป็นชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันกับการตรวจพบแอฟฟินิตี้เช่นกับเกาะอย่างน้อย 200 นาโนเมตร ในบางรุรุเป็นไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจยึดเกาะฮิวเมน pcsk9 .9 หรือชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันกับเกาะน้อยกว่า หรือเท่ากับประมาณ 10 นาโนเมตร ( 1 นาโนเมตร ประมาณ 0.1 นาโนเมตร ประมาณ 0.5 นาโนเมตร about0.25 นาโนเมตร ประมาณ 10 โมง หรือแม้แต่น้อย

[ 0029 ) ใน embodiments บางเพิ่มเติมรวมแอฟฟินิตี้ของหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งไลโปคาลินมิวทีนเพื่อฮิวเมน pcsk9 หรือชิ้นส่วนย่อยก่อการตอบสนองภูมิคุ้มกันของมันได้รับพบว่าเป็นในด้านล่าง 0.1 นาโนเมตร และในบางรุรุเป็นเกาะน้อยกว่า หรือเท่ากับประมาณ 1 picomolar ( PM ) ( รูปที่ 7 ) .

[ 0030 ) แอฟฟินิตี้ผูกพันของมิวทีนไลโปคาลินการเลือกเป้าหมายใน pcsk9 กรณีปัจจุบันที่สามารถวัดได้และจึงรู้ค่าของมิวทีน - ลิแกนด์ที่ซับซ้อนจะพิจารณาจากความหลากหลายของวิธีการที่รู้จักกันกับผู้ที่มีทักษะในงานศิลปะ วิธีการรวมถึงเช่น แต่ไม่ จำกัด การไทเทรต , การแข่งขัน , ELISA วิธีแคโละริเมท , ,เช่น คำนวณจากการไทเทรต ( ITC ) และเรโซแนนซ์ PLASMON พื้นผิว ( biacore ) ตัวอย่างวิธีการดังกล่าวมีรายละเอียดด้านล่าง ( ดูเช่นตัวอย่าง 7 )

[ 0031 ) ในรูปร่างหนึ่งเป็นไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจทำตัวเป็นแอนตาโกนิสต์ของ pcsk9 . แอนตาโกนิสต์คำว่า " ของตามที่ใช้ในที่นี้ pcsk9 " ,หมายถึงตัวแทนที่สามารถแทรกแซงกับความผูกพันระหว่าง pcsk9 ldl-r. และในบางกรณี pcsk9 แอนตาโกนิสต์สามารถระบุได้โดยความสามารถในการอย่างเต็มที่หรือ partically ยับยั้งผูกพันระหว่าง pcsk9 และ ldl-r.

[ 0032 ] การเป็นไลโปคาลิน - มิวทีนของการเปิดเผยอาจจะแข่งขันสำหรับผูก ofldl-r เพื่อ pcsk9 ( ดู ตัวอย่าง

7 )[ 0033 ] นอกจากนี้ ไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจจะแข่งขันสำหรับผูกของโมโนโคลนอลแอนติบอดีซึ่งประกอบรวมด้วย seq id : 29 : 33 หมายเลข seq จะ pcsk9 ( เห็นตัวอย่าง 12 )

[ ความ ] ในอีกรูปร่างเป็นไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจจะเต็มหรือบางส่วนเพื่อยับยั้ง pcsk9 downregulation ของ ldl-r. การยับยั้งเกิดขึ้น ตัวอย่างเช่นที่ pcsk9 ) downregulation ของ ldl-r เมื่อสัมผัสกับมิวทีนไลโปคาลินของการเปิดเผยเป็นอย่างน้อยประมาณ 10% น้อยกว่า เช่น อย่างน้อยประมาณ 25% , 50% , 75% น้อยกว่า หรือทั้งหมดห้าม ,ในการเปรียบเทียบกับระดับของ pcsk9 downregulation ldl-r ในสถานะของการควบคุม หรือในกรณีที่ไม่มีของไลโปคาลินมิวทีน . ในบางยังคงเพิ่มเติม embodiments , ไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจจะสามารถยับยั้งระดับของ pcsk9 downregulation ldl-r ในลักษณะปิดกั้น . ในบางยังคงเพิ่มเติม embodiments ,การยับยั้งโดย pcsk9 downregulation ของ ldl-r สามารถแสดงในเซลล์มะเร็งตับ ( ตามที่อธิบายไว้เป็นหลักฐานในตัวอย่างที่ 13 .
[ 0035 ) เลยรวม อื่น ๆ , ไลโปคาลินมิวทีนของการเปิดเผยอาจสามารถเรียกคืนการดูดซึม LDL ในการแสดงตนของ pcsk9 . ใน embodiments บางเพิ่มเติมการ restorage ของ LDL updtake ต่อหน้า pcsk9 สามารถแสดงในเซลล์มะเร็งตับ ( ตามที่อธิบายไว้เป็นหลักฐานในตัวอย่าง 11 ในบางส่วนยัง furtherernbodiments เพื่อตั้งค่าโดยเซลล์มะเร็งตับอาจบ่มที่มีความเข้มข้นของ hpcsk9 คงที่ ( เช่น 100 nm ) และจากนั้น
อาจจะตลอดเวลาที่มีหนึ่งหรือมากกว่าไลโปคาลินมิวทีน


[ 0036 ) pcsk .9 สามารถถูกกำหนดไม่ธรรมชาติ ) hum.an ฉีกไลโปคาลิน . คำว่า " ไม่ธรรมชาติ ) หมายถึง สารประกอบ ซึ่งไม่ยึดเกาะเพื่อไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัยภายใต้เงื่อนไขทางสรีรวิทยาคำว่า " ไลโปคาลินนุนุ " ตามที่ใช้ในที่นี้อ้างถึงไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัยสอดคล้องกับโปรตีนของ swiss-prot ข้อมูลธนาคาร พร้อมด้วยหมายเลข P3 L 025 , ในขณะที่ไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย ( seq id :
1 ) ไม่รวมถึงกรดอะมิโนเปปไทด์และสัญญาณที่รวมถึง D ในลำดับของชาวสวิส - ก่อนเข้าเบอร์ p31025

[ 0037 ) ลำดับกรดอะมิโนของมิวทีนของการเปิดเผยมีเอกลักษณ์ลำดับสูงไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย ( seq id : 1 ) ในบริบทนี้และลำดับกรดอะมิโนของมิวทีนของการเปิดเผยอาจมากคล้ายกับลำดับกรดอะมิโนของไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย . ลําดับที่เกี่ยวข้องของมิวทีนไลโปคาลินของการเปิดเผยถูกมากคล้ายกับลำดับของไลโปคาลินเต็มวัยน้ำตามนุษย์ ,มีรุรุต่างๆอย่างน้อย 70% อย่างน้อย 75% อย่างน้อย 80% อย่างน้อย 82 % เป็นอย่างน้อย
85% อย่างน้อย 87 % หรืออย่างน้อย 90% ของที่รวมถึงอย่างน้อย 95% ของการลำดับของไลโปคาลินน้ำตามนุษย์เต็มวัย ( ดู ตัวอย่าง รูปที่ 10 และ รูปที่ 14 ) ด้วยเงื่อนไขที่ว่า การเปลี่ยนแปลงตำแหน่งหรือลำดับ
จะยังคงอยู่