The purpose of this research is to

The purpose of this research is to establish a routine procedure for the application of proteomic analysis to olive tree. Olive leaf tissue is notoriously recalcitrant to common protein extraction methods due to high levels of interfering compounds. We developed a protocol for isolating proteins suitable for two-dimensional electrophoresis (2-DE) from olive leaf. The remarkable characteristics of the protocol include: (i) additional grinding dry acetone powder of leaf tissue to a finer extent, (ii) after extensive organic solvent washes to remove pigments, lipids etc., using aqueous tricholoroacetic acid washes to remove water-soluble contaminants, and (iii) phenol extraction of proteins in the presence of sodium dodecyl sulfate. The final protein preparation is free of interfering compounds based on its well-resolved 2-DE patterns. The protocol can be completed within 3 h, and protein yield is approximately 2.49 mg⋅g−1 of aged leaf. We also evaluated the protocol by immunoblotting with anti-tyrosinate α-tubulin antibody. To our knowledge, this is the first time that a protocol for protein extraction from olive leaf appears to give satisfactory and reproducible results. The protocol is expected to be applicable to other recalcitrant plant tissues and could be of interest to laboratories involved in plant proteomics

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัตถุประสงค์ของงานวิจัยนี้คือการ สร้างกระบวนงานประจำการวิเคราะห์ proteomic โอลีฟ เนื้อเยื่อใบมะกอก recalcitrant ฉาวกับวิธีสกัดโปรตีนทั่วไปเนื่องจากสารรบกวนในระดับสูงได้ เราพัฒนาโพรโทคอลสำหรับการแยกโปรตีนที่เหมาะสม (2-DE) electrophoresis สองจากใบมะกอก มีลักษณะโดดเด่นของโพรโทคอล: (i) เพิ่มเติมบดผงแห้งอะซีโตนของเนื้อเยื่อใบระดับปลีกย่อย, (ii) หลังจากตัวทำละลายอินทรีย์มากมายต่อผิวหน้าเพื่อลบสี ฯลฯ ใช้ tricholoroacetic อควี washes กรดเอาสารปนเปื้อนที่ละลายใน และสกัดโปรตีนในต่อหน้าของโซเดียมซัลเฟต dodecyl (iii) วางโครงการ การเตรียมการขั้นสุดท้ายโปรตีนไม่รบกวนสารตามรูปแบบของ 2DE แก้ไขห้องพัก โพรโทคอลสามารถจะแล้วเสร็จภายใน 3 h และผลผลิตโปรตีนคือ ใบอายุประมาณ 2.49 mg⋅g−1 เรายังประเมินโพรโทคอล โดย immunoblotting กับแอนติบอดีต่อต้าน tyrosinate α-tubulin ความรู้ของเรา นี้เป็นครั้งแรกที่ ให้ผลลัพธ์ที่น่าพอใจ และจำลองการโพรโทคอลการสกัดโปรตีนจากใบมะกอก โพรโทคอลคาดว่าจะใช้กับเนื้อเยื่อพืช recalcitrant อื่น ๆ และอาจจะสนใจปฏิบัติเกี่ยวข้องกับพืชโปรตีโอมิกส์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัตถุประสงค์ของงานวิจัยนี้คือการสร้างขั้นตอนตามปกติสำหรับการประยุกต์ใช้การวิเคราะห์โปรตีนเพื่อต้นมะกอก เนื้อเยื่อใบมะกอกเป็นฉาวโฉ่บิดพลิ้วกับวิธีการสกัดโปรตีนที่พบบ่อยเนื่องจากระดับสูงของสารรบกวน เราได้พัฒนาโปรโตคอลสำหรับการแยกโปรตีนที่เหมาะสมสำหรับการ electrophoresis สองมิติ (2-DE) จากใบมะกอก ลักษณะที่โดดเด่นของโปรโตคอลรวมถึง: (i) เพิ่มเติมบดผงอะซิโตนแห้งของเนื้อเยื่อใบในระดับปลีกย่อย (ii) หลังจากที่กว้างขวางล้างตัวทำละลายอินทรีย์ที่จะเอาสีไขมัน ฯลฯ โดยใช้ล้างกรด tricholoroacetic น้ำเพื่อเอา​​น้ำที่ละลาย สารปนเปื้อนและ (iii) การสกัดฟีนอลของโปรตีนในการปรากฏตัวของโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต เตรียมโปรตีนสุดท้ายคือฟรีของสารรบกวนอยู่บนพื้นฐานที่ดีของการแก้ไขรูปแบบ 2-DE โปรโตคอลที่สามารถจะแล้วเสร็จภายใน 3 ชั่วโมงและผลผลิตโปรตีนจะอยู่ที่ประมาณ 2.49 mg⋅g-1 ใบอายุ นอกจากนี้เรายังประเมินโปรโตคอลโดย immunoblotting ที่มีการป้องกัน tyrosinate α-tubulin แอนติบอดี เพื่อความรู้ของเรานี้เป็นครั้งแรกที่โปรโตคอลสำหรับการสกัดโปรตีนจากใบมะกอกจะปรากฏขึ้นเพื่อให้ผลลัพธ์ที่น่าพอใจและสามารถทำซ้ำ โปรโตคอลที่คาดว่าจะมีผลบังคับใช้กับเนื้อเยื่อพืชบิดพลิ้วอื่น ๆ และอาจจะเป็นที่สนใจของห้องปฏิบัติการที่เกี่ยวข้องในโปรตีนจากพืช

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิจัยครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อสร้างกระบวนการขั้นตอนสำหรับการประยุกต์ใช้การวิเคราะห์โปรตีนต้นไม้มะกอก เนื้อเยื่อใบมะกอกเป็นอย่างฉาวโฉ่นอกครูไปวิธีการสกัดโปรตีนทั่วไปเนื่องจากระดับสูงของรบกวนสารประกอบ เราพัฒนาโปรโตคอลเพื่อแยกโปรตีนที่เหมาะสมสำหรับสองมิติ electrophoresis ( แผ่น ) จากใบมะกอกลักษณะที่โดดเด่นของโปรโตคอลรวมถึง : ( 1 ) เพิ่มคัฟอะซีโตนผงใบเนื้อเยื่อในระดับปลีกย่อย ( II ) หลังจากกว้างขวาง ตัวทำละลายอินทรีย์ล้างเพื่อลบสี , ไขมัน ฯลฯ ใช้น้ำล้างเอาสิ่งปนเปื้อน tricholoroacetic กรดที่ละลายน้ำและ ( 3 ) ฟีนอล การสกัดโปรตีนในการแสดงตนของโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต .การเตรียมโปรตีนสุดท้ายฟรีรบกวนสารประกอบตามมันแก้ไขแผ่นรูปแบบ โปรโตคอลสามารถเสร็จได้ภายใน 3 ชั่วโมง และผลผลิตโปรตีนประมาณ 2.49 มิลลิกรัม⋅ G − 1 ใบแก่ นอกจากนี้เรายังทดสอบโปรโตคอลแพงกับการป้องกัน tyrosinate แอลฟาทูบูลินแอนติบอดี ความรู้ของเรานี่เป็นครั้งแรกที่เป็นโพรโทคอลสำหรับการสกัดโปรตีนจากใบมะกอกที่ดูเหมือนจะให้ผลลัพธ์ที่น่าพอใจและซ้ํา ซึ่งคาดว่าจะสามารถใช้ได้กับเนื้อเยื่อพืชอื่น ๆและสามารถหัวดื้อเป็นที่สนใจของห้องปฏิบัติการที่เกี่ยวข้องในการวิเคราะห์โปรตีนพืช