2.1. AnimalsTimed Wistar pregnant r

2.1. Animals
Timed Wistar pregnant rats were housed individually
in breeding cages and allowed to fed with a standard
diet containing 21% protein (Alimentos Balanceados
Ltda, Santiago, Chile). Malnutrition was produced
during lactation by competition for maternal
milk. Immediately after birth, pups from all litters were
pooled, randomized and redistributed into large litters
(18-19 pups, PCM group) and normal litters (8 pups,
well-nourished). Throughout gestation and the suckling
period, all nurses were fed the 21% protein diet.
Previous work with this nutritional model has demonstrated
that maternal care is adequate and neonatal
stress is absent (Bell et al., 1987; Lau et al., 1988).
Studies were conducted in the preweaning period, at
18 days of age in malnourished and well-nourished
male and female Wistar rats. Mean + SD weight (g) of
PCM and well-nourished rats at 18th days of age were
25 _t 4.7 (n = 53) and 40 & 4.0 (n = 53), respectively.
At 17 days of age, animals were grouped as follows:
(a> PCM animals receiving intracerebroventricular
(i.c.v.) injection of 6-hydroxydopamine (6-OHDA) (120
pg/lO ~11, at stereotaxic coordinates A: 5.3, L: 1.5, V:
2.8, in mm, according to a stereotaxic atlas (Sherwood
and Timiras, 1970); (b) PCM animals receiving 10 ~1
i.c.v. injection ascorbic acid in saline (1 mg/ml)
(solvent); (c) PCM without intervention (untreated
group); (d) well-nourished rats receiving 6-OHDA i.c.v.;
(e) well-nourished rats i.c.v. injected with solvent; and
(f) well-nourished animals without intervention (untreated
group).
2.2. Noradrenaline and metabolite determinations
At 18 days of age, rats from each group were killed
by decapitation, and median eminences (ME) and
spleens were rapidly removed and cooled on ice. The
tissues were treated with perchloric acid (0.1 M) and
disrupted by homogenization. Alumina was added to
the tissue to absorb the catecholamines, and the samples
were washed and eluted in perchloric acid (0.1 M)
using a microfilter kit. Aliquots of the eluted extract
were subjected to high-performance liquid chromatography
(HPLC) with electrochemical detection to determine
NA and metabolite levels. The concentration of
the metabolite 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol
(HMPG) was measured in ME only. For chromatographic
separations, a Biophase ODS (5 pm) analytical
column was used. The mobile phase was a mixture of
0.15 M monochloroacetate, pH 3.0 with 2.0 mM
Na,EDTA and 28 mg/l sodium octyl sulfate. AI1 solutions
were filtered and degassed. The loo-p1 injection
was made through a fixed loop (20 ~1) injection valve.
Flow rates of 1.3-1.5 ml/min were used at 2000-24000
p.s.i. back pressure.
2.3. Lymphocyte blastogenesis
Spleens were minced in RPM1 1640 medium and
lymphocytes isolated in a Ficoll-Hypaque gradient.
Lymphocytes in complete medium (RPM1 1640, 5%
bovine fetal serum, 2 mM L-glutamine and gentamycin
50 mg/l) were seeded at 2 X 10’ cells/well in 96-well
flat-bottomed microtitre plates. Medium alone or
medium with an optimal concentration of Concanavalin
A (ConA) 0.5 P./well (Sigma, St. Louis, MO)
was added and the plates incubated for 120 h at 37°C
at 5% CO, and 95% air. A dose-response curve for
ConA was performed to determine the optimal mitogen
concentration. The optimal response in unweaned
pups was achieved at 5 days of culture. Tritiated thymidine,
0.5 &i/well (specific activity 6.7 &i/mM NEN,
Boston, MA) was added to the culture wells during the
last 18 h of incubation. Samples were tested in triplicate
(Schlesinger et al., 1992).
2.4. IL-l induction
IL-l was induced in adherent spleen cells employing
a modification of the Hiffner-Cavaillon technique
(Haffner-Cavaillon et al., 1990). One-million of spleen
lymphocytes were adhered with complete medium in
24-well culture plates during 2 h at 37°C in 5% CO,-
95% air. Non-adherent cells were removed by PBS
washings and adherent cells were stimulated with 10

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1 การสัตว์เวลา Wistar หนูตั้งครรภ์ได้ห้องพักแต่ละในกรงผสมพันธุ์ และได้รับอนุญาตให้เลี้ยงดู ด้วยมาตรฐานอาหารที่ประกอบด้วยโปรตีน 21% (Alimentos BalanceadosLtda, Santiago ประเทศชิลี) ขาดสารอาหารที่ผลิตในด้านการให้นมโดยแข่งขันสำหรับแม่นม ทันทีหลังคลอด pups จาก litters ทั้งหมดได้รวม randomized และแพร่เข้าไปใน litters ขนาดใหญ่(18-19 pups กลุ่ม PCM) และ litters ปกติ (8 pupsห้องพัก nourished) ครรภ์และการหันระยะเวลา พยาบาลทั้งหมดได้รับอาหารโปรตีน 21%ได้สาธิตการทำงานก่อนหน้านี้กับโภชนาการว่าดูแลแม่อย่างเพียงพอ และมีทารกแรกเกิดความเครียดจะขาด (Bell et al., 1987 Lau et al., 1988)การศึกษาได้ดำเนินการในระยะ preweaning ที่วันที่ 18 ของอายุใน malnourished และห้องพัก nourishedหนู Wistar เพศชาย และเพศหญิง ค่าเฉลี่ย + SD น้ำหนัก (กรัม) ของPCM และหนูดี nourished ที่อายุ 18 วัน25 _t 4.7 (n = 53) 40 และ 4.0 (n = 53), ตามลำดับในวัน 17 อายุ สัตว์ถูกจัดกลุ่มเป็นดังนี้:(การ > สัตว์ PCM ที่รับ intracerebroventricularฉีด (i.c.v.) 6-hydroxydopamine (6-OHDA) (120pg/หล่อ ~ 11 ที่ stereotaxic พิกัด a: 5.3, l: 1.5, v คัมภีร์:2.8 มม. ตามแอตลาส stereotaxic (Sherwoodและ Timiras, 1970); (ข) PCM สัตว์รับ 10 ~ 1กรดแอสคอร์บิคฉีด i.c.v. ในน้ำเกลือ (1 mg/ml)(ตัวทำละลาย); (ค) PCM (ไม่ถูกรักษาโดยกลุ่ม); (ง) แห่ง nourished หนูรับ 6-OHDA i.c.v.(อี) i.c.v. ห้อง nourished หนูฉีดกับตัวทำละลาย และ(f) สัตว์ห้อง nourished (ไม่ถูกรักษาโดยกลุ่ม)2.2. Noradrenaline และ metabolite determinationsที่อายุ 18 วัน หนูจากแต่ละกลุ่มถูกฆ่าตายโดย decapitation และ eminences มัธยฐาน (ME) และspleens ถูกลบออกอย่างรวดเร็ว และระบายความร้อนด้วยบนน้ำแข็ง ที่เนื้อเยื่อได้รับการรักษา ด้วย perchloric กรด (0.1 M) และระหว่างสองวัน โดย homogenization อลูมินาถูกเพิ่มเข้าไปเนื้อเยื่อซับ catecholamines และตัวอย่างมีหิน และ eluted ใน perchloric กรด (0.1 M)ใช้ชุด microfilter Aliquots ของสารสกัด elutedchromatography เหลวประสิทธิภาพสูงถูกต้อง(HPLC) ด้วยการตรวจทางเคมีไฟฟ้าเพื่อกำหนดระดับ NA และ metabolite ความเข้มข้นของmetabolite 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol(HMPG) เป็นวัดในฉันเท่านั้น สำหรับ chromatographicประโยชน์ การ Biophase ODS (17.00 น) วิเคราะห์มีใช้คอลัมน์ ระยะการเคลื่อนผสมกัน0.15 M monochloroacetate, pH 3.0 กับ 2.0 มม.นา EDTA และ octyl 28 mg/l โซเดียมซัลเฟต โซลูชั่น AI1กรอง และ degassed ฉีด loo-p1ทำผ่านวนถาวร (20 ~ 1) วาล์วฉีดอัตราไหล 1.3-1.5 ml/min ครั้ง 2000-24000p.s.i. ความกดดันที่หลัง2.3. lymphocyte blastogenesisSpleens ถูกสับใน RPM1 1640 และlymphocytes ที่แยกต่างหากในไล่ Ficoll HypaqueLymphocytes ในสมบูรณ์ปานกลาง (RPM1 1640, 5%เซรั่มครรภ์วัว 2 มม. L glutamine และ gentamycin50 mg/l) ถูก seeded ที่ 2 X 10' เซลล์/ดีใน 96-ดีแผ่น flat-bottomed microtitre สื่อเพียงอย่างเดียว หรือขนาดกลาง มีความเข้มข้นที่เหมาะสมที่สุดของ Concanavalin(ConA) P. 0.5/บ่อ (ซิก St. Louis, MO)เพิ่ม และแผ่น incubated สำหรับ h 120 ที่ 37° Cที่ 5% CO และอากาศ 95% เส้นโค้งตอบรับยาสำหรับทำการกำหนด mitogen สุด ConAความเข้มข้น การตอบสนองที่ดีที่สุดใน unweanedpups สำเร็จใน 5 วันของวัฒนธรรม Tritiated thymidine0.5 และฉัน/ดี (กิจกรรม 6.7 และ ฉัน/mM ฆราวาสBoston, MA) ถูกเพิ่มเข้าไปบ่อวัฒนธรรมระหว่างการh 18 ล่าสุดของคณะทันตแพทยศาสตร์ ตัวอย่างทดสอบใน triplicate(Schlesinger et al., 1992)2.4. IL l การเหนี่ยวนำIL l ถูกทำให้เกิดเซลล์ม้ามนฤมลใช้การปรับเปลี่ยนเทคนิค Hiffner-Cavaillon(Haffner Cavaillon et al., 1990) หนึ่ง - ล้านของม้ามlymphocytes ถูกปฏิบัติตาม ด้วยสื่อสมบูรณ์ในวัฒนธรรมดี 24 แผ่นระหว่าง h 2 ที่ 37° C 5% CO, -อากาศ 95% เซลล์ไม่มี adherent ออก โดย PBSwashings และนฤมลเซลล์ที่ถูกกระตุ้น ด้วย 10

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 สัตว์
หมดเวลาหนูวิสตาร์ตั้งครรภ์ถูกเก็บเป็นรายบุคคล
ในกรงเพาะพันธุ์และได้รับอนุญาตให้เลี้ยงด้วยมาตรฐาน
อาหารที่มีโปรตีน 21% (อาหาร Balanceados
Ltda ซันติอาโก, ชิลี) การขาดสารอาหารที่ผลิต
ในระหว่างการให้นมบุตรโดยการแข่งขันสำหรับมารดา
นม ทันทีหลังจากที่คลอดลูกจากลูกครอกทั้งหมดถูก
รวบรวม, สุ่มและแจกจ่ายเป็นลูกครอกใหญ่
(18-19 ลูกกลุ่ม PCM) และลูกครอกปกติ (8 ลูก,
ดีหล่อเลี้ยง) ตลอดการตั้งครรภ์และการดูดนม
ระยะเวลา, พยาบาลทั้งหมดได้รับการเลี้ยงดูอาหารที่มีโปรตีน 21%.
การทำงานก่อนหน้านี้ที่มีรูปแบบทางโภชนาการนี้ได้แสดงให้เห็น
ว่าการดูแลมารดาที่เพียงพอและทารกแรกเกิด
ความเครียดจะหายไป (เบลล์และคณะ, 1987;.. Lau, et al, 1988) .
การศึกษาได้ดำเนินการในช่วงเวลา preweaning ที่
18 วันของอายุในโรคขาดสารอาหารและเป็นที่หล่อเลี้ยง
ชายและหนูวิสตาร์หญิง หมายถึงน้ำหนัก + SD (ช) ของ
PCM และหนูดีหล่อเลี้ยงวันที่ 18 คืออายุ
25 _t 4.7 (n = 53) และ 40 และ 4.0 (n = 53) ตามลำดับ.
เมื่อ 17 วันของอายุสัตว์ที่ถูกจัดกลุ่มเป็น ดังนี้
(> สัตว์ PCM รับ intracerebroventricular
(ICV) ฉีด 6 hydroxydopamine (6-OHDA) (120
กรัม / lO ~ 11 ที่ stereotaxic พิกัด: 5.3, L: 1.5 V:
2.8 มิลลิเมตรตาม Atlas stereotaxic (เชอร์วู้ด
และ Timiras, 1970); (ข) สัตว์ที่ได้รับ PCM 10 ~ 1
i.cv ฉีดวิตามินซีในน้ำเกลือ (1 mg / ml)
(ตัวทำละลาย) (ค) โดยไม่มีการแทรกแซง PCM (ได้รับการรักษา
กลุ่ม) ( ง) หนูที่ได้รับการหล่อเลี้ยง 6 OHDA ICV;
(จ) หนูดีหล่อเลี้ยง ICV ฉีดด้วยตัวทำละลายและ
(ฉ) สัตว์ดีหล่อเลี้ยงโดยไม่มีการแทรกแซง (ได้รับการรักษา
กลุ่ม).
2.2 noradrenaline และหาความ metabolite.
ใน 18 วันของอายุ หนูจากแต่ละกลุ่มถูกฆ่าตาย
โดยการตัดศีรษะและ eminences มัธยฐาน (ME) และ
ม้ามถูกถอดออกอย่างรวดเร็วและระบายความร้อนบนน้ำแข็ง.
เนื้อเยื่อได้รับการรักษาด้วยกรดเปอร์คลอริก (0.1 เมตร) และ
หยุดชะงักโดยทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน. อลูมิถูกบันทึกอยู่ใน
เนื้อเยื่อในการดูดซับ catecholamines และตัวอย่าง
ถูกล้างและชะในกรดเปอร์คลอริก (0.1 M)
โดยใช้ชุดกรองอากาศ ส่วนลงตัวของสารสกัดจากชะ
ถูกยัดเยียดให้มีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography
(HPLC) มีการตรวจสอบเพื่อตรวจสอบไฟฟ้า
NA และระดับ metabolite ความเข้มข้นของ
สาร metabolite 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol
(HMPG) วัดใน ME เท่านั้น สำหรับโครมา
แยก ODS Biophase (05:00) การวิเคราะห์
คอลัมน์ถูกนำมาใช้ เฟสเคลื่อนที่เป็นส่วนผสมของ
0.15 M โมโนคลอโรพีเอช 3.0 กับ 2.0 มิลลิ
นา, EDTA และ 28 mg / l โซเดียมซัลเฟต octyl โซลูชั่น AI1
ถูกกรองและกำจัดก๊าซ ฉีดห้องน้ำ-P1
ที่ถูกสร้างขึ้นผ่านห่วงคงที่ (20 ~ 1) วาล์วหัวฉีด.
อัตราการไหลของ 1.3-1.5 มิลลิลิตร / นาทีถูกนำมาใช้ที่ 2,000-24,000
p.si แรงดันย้อนกลับ.
2.3 เม็ดเลือดขาว blastogenesis
ม้ามถูกสับใน RPM1 1640 ขนาดกลางและ
เซลล์เม็ดเลือดขาวที่แยกได้ในการไล่ระดับสี Ficoll-Hypaque.
เซลล์เม็ดเลือดขาวในสื่อฉบับสมบูรณ์ (RPM1 1640, 5%
ซีรั่มของทารกในครรภ์วัว 2 มิลลิ L-glutamine และ Gentamycin
50 mg / l) เป็นเมล็ดที่ 2 X 10 'เซลล์ / ดีใน 96 หลุม
ที่ราบต่ำแผ่น microtitre ปานกลางคนเดียวหรือ
ขนาดกลางที่มีความเข้มข้นที่เหมาะสมของ Concanavalin
(Cona) 0.5 P. / ดี (Sigma, เซนต์หลุยส์)
ถูกบันทึกและแผ่นบ่มเป็นเวลา 120 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส
ที่ CO 5% และ 95% ของอากาศ . เส้นโค้งปริมาณการตอบสนองสำหรับ
Cona ได้ดำเนินการเพื่อตรวจสอบ mitogen ดีที่สุด
เข้มข้น การตอบสนองที่ดีที่สุดใน unweaned
ลูกก็ประสบความสำเร็จใน 5 วันของวัฒนธรรม thymidine Tritiated,
0.5 และ I / ดี (กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจง 6.7 & I / มิลลิ NEN,
Boston, MA) ถูกบันทึกอยู่ในบ่อเพาะเลี้ยงในช่วง
ที่ผ่านมา 18 ชั่วโมงของการบ่ม ตัวอย่างถูกทดสอบในเพิ่มขึ้นสามเท่า
(ชเลซิงเจอร์ et al., 1992).
2.4 เหนี่ยวนำ IL-L
IL-L ถูกชักนำในเซลล์ม้ามสาวกจ้าง
ปรับเปลี่ยนเทคนิค Hiffner-Cavaillon
(Haffner-Cavaillon et al., 1990) หนึ่งล้านของม้าม
เซลล์เม็ดเลือดขาวที่ถูกยึดติดกับสื่อที่สมบูรณ์ใน
แผ่นวัฒนธรรม 24 หลุมระหว่างวันที่ 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสใน CO 5% -
95% อากาศ เซลล์ปลอดสานุศิษย์ถูกถอดออกโดยพีบีเอส
และเซลล์ซักพรรคพวกถูกกระตุ้นด้วย 10

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.1 . เวลาที่หนูท้องของสัตว์

ถูกแบบในกรงผสมพันธุ์ และได้รับอนุญาตให้ป้อนด้วยมาตรฐาน
อาหารที่มีโปรตีน 21% ( Alimentos balanceados
Ltda , Santiago , ชิลี ) ภาวะทุพโภชนาการที่ผลิตโดยการแข่งขันระหว่างการให้นมแม่

นม ทันทีหลังคลอดต่อจากซากถูก
รวม และแจกจ่ายเป็นลูกหนูขนาดใหญ่และ
( 18-19 ลูกกลุ่ม 1 ( PCM ) ปกติ 8 ลูก
เอ่อหล่อเลี้ยง ) ตลอดการตั้งครรภ์และเลี้ยงดู
ระยะเวลาทั้งหมด พยาบาลที่ได้รับอาหารโปรตีนร้อยละ 21 .
ก่อนหน้านี้ทำงานกับรุ่นนี้ได้แสดงให้เห็นถึงการดูแลโภชนาการ
แม่เป็นอย่างเพียงพอ และทารกแรกเกิด
ความเครียดขาด ( กระดิ่ง et al . , 1987 ; เลา et al . , 1988 ) .
ศึกษาปฏิบัติใน preweaning ระยะเวลา ที่
อายุ 18 วัน ขาดอาหาร และก็หล่อเลี้ยง
ชายและหนูพุกขาวผู้หญิง หมายถึงน้ำหนัก SD ( G )
PCM และเลี้ยงดูหนูอายุ 18 วัน
25 _t 4.7 ( n = 53 ) และ 40 & 4.0 ( n = 53 ) ตามลำดับ
ที่ 17 วันของอายุ สัตว์ถูกจัดกลุ่มดังนี้ :
( > PCM สัตว์ได้รับ intracerebroventricular
( i.c.v. ) การฉีด 6-hydroxydopamine ( 6-ohda ) ( 120
PG / lo ~ 11ที่ stereotaxic พิกัด : 5.3 ลิตร : 1.5 V :
2.8 มิลลิเมตร ตาม stereotaxic Atlas ( Sherwood
และ timiras , 1970 ) ; ( b ) PCM สัตว์ได้รับ 10 ~ 1
i.c.v. ฉีดวิตามินซีในน้ำเกลือ ( 1 mg / ml )
( ตัวทำละลาย ) ; ( c ) PCM โดยปราศจากการแทรกแซง ( untreated
กลุ่ม ) ; ( d ) ก็เลี้ยงหนูที่ได้รับ 6-ohda i.c.v. ;
( E ) ก็เลี้ยงหนู i.c.v. ฉีดด้วยตัวทำละลาย ; และ
( ฉ ) หล่อเลี้ยงสัตว์โดยไม่มีการแทรกแซง ( รักษา
2 )
2 . noradrenaline และอาหารรวมทั้ง
ที่ 18 วันของอายุของหนูในแต่ละกลุ่มจะถูกฆ่าโดยการตัดหัวและค่ามัธยฐาน eminences
,
( ฉัน ) และม้ามออกอย่างรวดเร็ว และเย็นบนน้ำแข็ง
เนื้อเยื่อรักษาด้วยเปอร์คลอริกแอซิด ( 0.1 m )
รบกวนด้วยการ . เพิ่ม

อะลูมินาเนื้อเยื่อดูดซับแคทีโคลามีน และตัวอย่าง
ถูกล้างและตัวอย่างในเปอร์คลอริกแอซิด ( 0.1 M )
โดยใช้ค่าชุด เฉยๆของตัวอย่างสกัด
ถูกวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) กับการตรวจหาไฟฟ้า

นา และอุณหภูมิ เพื่อตรวจสอบระดับ ความเข้มข้นของเลือด 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol

( hmpg ) เป็นวัดในหนูเท่านั้นสำหรับโครมาโตกราฟี
แยก , biophase ODS ( 5 โมงเย็น ) คอลัมน์วิเคราะห์
ถูกใช้ เฟสเคลื่อนที่เป็นส่วนผสมของ
0.15 เมตร monochloroacetate pH 3.0 , 2.0 มม.
na , EDTA และ 28 มก. / ล. ออกทิลโซเดียมซัลเฟต ai1 โซลูชั่น
ถูกกรองและ degassed . การ loo-p1 ฉีด
ถูกถ่ายทอดผ่านลูปคงที่ ( 20 ~ 1
) วาล์วฉีด อัตราการไหลของ 1.3-1.5 มิลลิลิตรต่อนาทีที่ใช้ใน 2000-24000 ความแรงนิดเดียวเอง

กลับมากดดัน2.3 โดย blastogenesis
ม้ามถูกสับใน rpm1 1640 ขนาดกลาง และถูกแยกใน ficoll

hypaque ลาด . เม็ดเลือดขาวในสื่อสมบูรณ์ ( rpm1 1640 5 %
เซรั่มของทารกในครรภ์ และ Glutamine 2 มม. และเจนตามัยซิน
50 มก. / ล. ) เป็นเมล็ดที่ 2 x 10 ' เซลล์ / ดีใน 96 ดี
microtitre แบน bottomed แผ่น กลางคนเดียว หรือกับความเข้มข้นที่เหมาะสมของสื่อ

( ถูก cona ) 0 P/ ดี ( Sigma , St . Louis , MO )
เพิ่มและจาน บ่มที่ 37 ° C 120 H
5 % CO และ 95% อากาศ ความคิดเห็นที่โค้ง
cona ทำการศึกษาความเข้มข้นที่เหมาะสมปรากฎ
. การตอบสนองที่เหมาะสมใน unweaned
ลูกหมาอยู่ได้ 5 วัน ของวัฒนธรรม tritiated เพียง 0.5 &
/ ดี ( เฉพาะกิจกรรม 6.7 &ผม / อืมเณร
, Boston , MA ) คือเพิ่มวัฒนธรรมเวลส์ในระหว่าง
เมื่อ 18 ชั่วโมงของการบ่ม ตัวอย่างทดสอบทั้งสามใบ
( Schlesinger et al . , 1992 ) .
2.4 . il-l
il-l เหนี่ยวนำเซลล์ม้ามโดยสานุศิษย์
การเปลี่ยนแปลงของคาเวล์ลง hiffner เทคนิค
( ฮอฟเนอร์คาเวล์ลง et al . , 1990 ) หนึ่งล้านของม้ามเม็ดเลือดขาวถูกยึดติดกับสื่อสมบูรณ์

24 แผ่นดีในวัฒนธรรมระหว่าง 2 H ที่ 37 ° C ใน 5% CO , -
95% อากาศไม่ติดเซลล์ออกโดย PBS
washings สานุศิษย์เซลล์ได้รับการกระตุ้นและ 10 ด้วย