4.3.1.2. Agent isolation and identi

4.3.1.2. Agent isolation and identification
Isolation of RSIV and ISKNV is undertaken using the Grunt fin (GF) cell line. Spleen and/or kidney
tissues from diseased fish are suitable samples. Cells should be grown in L-15 medium supplemented
with 10% fetal bovine serum (FBS) at 25°C in a temperature-controlled incubator to ensure subsequent
success in the isolation of RSIV. Viruses to be used as positive controls can be obtained from the OIE
Reference Laboratory for RSIVD. Use uninfected cells as negative controls. Following development of
viral cytopathic effect (CPE), virus identification would be undertaken using either antibody-based
antigen detection (IFAT) and/or nucleic acid-based methods (PCR).
4.3.1.2.1. Cell culture/artificial media
4.3.1.2.1.1 Isolation of RSIV and ISKNV in cell culture
Inoculation of cell monolayers

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4.3.1.2. แทนการแยกและระบุแยกของ RSIV และ ISKNV จะดำเนินการใช้บรรทัดเซลล์ฮึดฮัดครีบ (GF) ม้ามและไตเนื้อเยื่อจากปลาเป็นโรคเป็นตัวอย่างที่เหมาะสม เซลล์ควรจะปลูกใน L-15 เสริมกับ 10% ทารกวัวซีรั่ม (FBS) ที่ 25° C ในตู้อบที่ควบคุมอุณหภูมิเพื่อให้ตามมาความสำเร็จในการแยกของ RSIV ไวรัสที่จะใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวกได้จากต้องการห้องปฏิบัติการอ้างอิงสำหรับ RSIVD ใช้เซลล์ที่ติดเชื้อเป็นลบตัวควบคุม การพัฒนาต่อไปนี้ผล cytopathic ไวรัส (CPE), รหัสไวรัสจะเป็น undertaken ใช้แอนติบอดีขึ้นการตรวจหา antigen (IFAT) หรือวิธีใช้กรดนิวคลีอิก (PCR)4.3.1.2.1. เซลล์ประดิษฐ์วัฒนธรรมสื่อ4.3.1.2.1.1 แยก RSIV และ ISKNV ในเซลล์กักบริเวณของเซลล์ monolayers

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4.3.1.2 แยกตัวแทนและบัตรประจำตัว
แยก RSIV และ ISKNV จะดำเนินการโดยใช้ครีบเสียงฮึดฮัด (GF) สายพันธุ์ของเซลล์ ม้ามและ / หรือไต
เนื้อเยื่อจากปลามีอาการของโรคเป็นตัวอย่างที่เหมาะสม เซลล์ควรจะปลูกใน L-15 เติม
10% ของทารกในครรภ์วัวซีรั่ม (FBS) ที่ 25 ° C ในตู้ควบคุมอุณหภูมิเพื่อให้แน่ใจว่าภายหลัง
ประสบความสำเร็จในการแยกของ RSIV ไวรัสที่จะใช้เป็นตัวควบคุมในเชิงบวกที่สามารถหาได้จาก OIE
ห้องปฏิบัติการอ้างอิงสำหรับ RSIVD ใช้เซลล์ที่ไม่ติดเชื้อเป็นตัวควบคุมเชิงลบ ต่อไปนี้การพัฒนาของ
ผล cytopathic ไวรัส (CPE) บัตรประจำตัวไวรัสจะต้องดำเนินการโดยใช้แอนติบอดีที่ใช้
การตรวจหาแอนติเจน (IFAT) และ / หรือวิธีการนิวคลีอิกกรด-based (PCR).
4.3.1.2.1 การเพาะเลี้ยงเซลล์ / เทียมสื่อ
การแยก 4.3.1.2.1.1 ของ RSIV และ ISKNV ในเซลล์เพาะเลี้ยง
ฉีดวัคซีนของ monolayers มือถือ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4.3.1.2 . การแยกสารและการจำแนกการแยกและการ rsiv isknv ดังคำราม FIN ( GF ) เซลล์ที่บรรทัด ไต ม้าม และ / หรือเนื้อเยื่อจากตัวอย่างปลาที่เหมาะสม เซลล์ ควรปลูกใน l-15 MSร้อยละ 10 ของซีรั่มโค ( FBS ) ที่อุณหภูมิ 25 ° C ที่อยู่ในตู้ควบคุมอุณหภูมิ เพื่อให้แน่ใจว่าต่อความสำเร็จในการแยก rsiv . ไวรัสจะใช้เป็นตัวควบคุมบวกได้จาก OIEห้องปฏิบัติการอ้างอิงสำหรับ rsivd . ใช้ควบคุมมาก่อน เซลล์ที่เป็นลบ ต่อไปนี้การพัฒนาของผล cytopathic ไวรัส ( CPE ) ตัวไวรัสจะดำเนินการโดยใช้แอนติบอดีจากการตรวจหาแอนติเจน ( ifat ) และ / หรือ กรดนิวคลีอิก โดยวิธี ( PCR )4.3.1.2.1 . เซลล์วัฒนธรรม / สื่อเทียม4.3.1.2.1.1 rsiv isknv การแยกและเพาะเลี้ยงเซลล์การ monolayers ของเซลล์