VLPsQ VLPs were produced in Escher

VLPsQ VLPs were produced in Escherichia coli using methods that we have previously described for the production of MS2 bacteriophage VLPs [20]. Peptides representing huPCSK9 aminoacids 68–76, 153–163, and 207–223 were synthesized (Gen-Script) and modified to include a C-terminal cysteine residuepreceded by a 2-glycine-spacer sequence. Peptides were conju-gated to VLPs using the bifunctional cross-linker succinimidyl6-[(-maleimidopropionamido)hexanoate] (SMPH; ThermoScien-tific) [21]. Efficiency of conjugation was measured using denaturingpolyacrylamide gel electrophoresis.Recombinant PCSK9-VLP expression vectors were constructedby genetically inserting huPCSK9 sequences (amino acids 153–163,188–200, 208–222, and 368–381) by PCR at the N-terminus of asingle-chain dimer version of the MS2 bacteriophage coat protein[20]. All constructs were sequenced to verify correct location andsequence of PCSK9 insert. Recombinant MS2 VLPs were expressedand purified as described [20].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

VLPsQ VLPs ถูกผลิตใน Escherichia coli โดยใช้วิธีการที่เราได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้สำหรับการผลิตแบคที MS2 VLPs [20] เปปไทด์เป็นตัวแทนของ aminoacids huPCSK9 68-76, 153-163 และ 207 – 223 ถูกสังเคราะห์ (Gen-สคริปต์) และแก้ไขรวม residuepreceded cysteine ขั้ว C ตามลำดับ 2-glycine-สเปเซอร์ เปปไทด์ถูก gated conju การใช้ bifunctional cross-linker succinimidyl6 - VLPs [hexanoate (- maleimidopropionamido)] (SMPH ThermoScien-tific) [21] ประสิทธิภาพของผันถูกวัดโดยใช้อิเจ denaturingpolyacrylamide เวกเตอร์นิพจน์ PCSK9 VLP recombinant ถูก constructedby ทางพันธุกรรมการแทรกลำดับ huPCSK9 (กรดอะมิโน 153 – 163,188 – 200, 208-222 และ 368-381) โดย PCR ที่ terminus N รุ่นเดียวโซ่ dimer โปรตีนเสื้อแบคที MS2 [20] โครงสร้างทั้งหมดถูกเรียงลำดับในการตรวจสอบตำแหน่งที่ถูกต้อง andsequence ของ PCSK9 แทรก Recombinant MS2 VLPs ถูก expressedand บริสุทธิ์ดังที่ [20]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

VLPsQ? VLPs มีการผลิตใน Escherichia coli โดยใช้วิธีการที่เราได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้สำหรับการผลิตของ MS2 VLPs bacteriophage ม [20] เปปไทด์ที่เป็นตัวแทนของ huPCSK9 aminoacids 68-76, 153-163 และ 207-223 ถูกสังเคราะห์ (Gen-Script) และการปรับเปลี่ยนเพื่อ ได้แก่ cysteine ​​c- ขั้ว residuepreceded โดยลำดับ 2-glycine spacer เปปไทด์ที่ถูก conju รั้วรอบขอบชิดเพื่อ VLPs ใช้ bifunctional succinimidyl6 ข้ามลิงเกอร์ - [(- maleimidopropionamido?) hexanoate] (SMPH; ThermoScien-Tific) [21] ประสิทธิภาพของการผันถูกวัดโดยใช้เจล denaturingpolyacrylamide electrophoresis.Recombinant PCSK9-VLP เวกเตอร์การแสดงออกถูก constructedby พันธุกรรมใส่ลำดับ huPCSK9 (กรดอะมิโน 153-163,188-200, 208-222 และ 368-381) โดยวิธี PCR ที่ N-ปลายทางของ asingle- รุ่นโซ่ dimer ของโปรตีนเสื้อ MS2 bacteriophage [20] โครงสร้างทั้งหมดมีลำดับขั้นตอนในการตรวจสอบ andsequence ตำแหน่งที่ถูกต้องของ PCSK9 แทรก recombinant MS2 VLPs บริสุทธิ์ expressedand ตามที่อธิบายไว้ [20]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

vlpsq vlps ถูกผลิตใน Escherichia coli โดยใช้วิธีที่เราได้อธิบายไว้ก่อนหน้าในการผลิตแบคเทอริโอเฟจ vlps MS2 [ 20 ] เปปไทด์ของ hupcsk9 ว่า 68 – 76 , 153 ) 163 , และ 207 – 223 สังเคราะห์ ( gen script ) และการแก้ไข ได้แก่ ซีสเตอีน 2-glycine-spacer ซึ่ง residuepreceded โดยลำดับ เปปไทด์เป็น conju gated เพื่อ vlps ใช้ bifunctional ข้ามสนามกอล์ฟ succinimidyl6 - [ ( - maleimidopropionamido ) hexanoate ] ( smph ; thermoscien tific ) [ 21 ] วัดประสิทธิภาพของการใช้ denaturingpolyacrylamide เจล pcsk9-vlp การแสดงออกยีนพันธุกรรมที่เป็นเวกเตอร์ ที่ผู้วิจัยสร้างขึ้น ซึ่งการ hupcsk9 ลำดับ ( กรดอะมิโน 153 – 163188 – 200 , 208 - 222 และ 368 ( 381 ) โดยวิธี PCR ของยีนโซ่ซิงเกิ้ลที่เมอร์รุ่นของโปรตีน [ MS2 ถึงอย่างไรก็ตามเสื้อ 20 ] ทั้งหมดสร้างเป็นลำดับเพื่อตรวจสอบตำแหน่งที่ถูกต้องของ andsequence pcsk9 แทรก รีคอมบิแนนท์ MS2 vlps เป็น expressedand บริสุทธิ์ตามที่อธิบายไว้ [ 20 ]