2. Material and methodsTwo types of

2. Material and methods
Two types of model batches with the addition of the BA producing
starter strain were produced: (i) a batch of cheeses with the
addition of the BA producing strain of L. lactis subsp. cremoris
CCDM 824 (hereafter L824) and (ii) a batch of cheeses with the addition
of the BA producing strain of L. lactis subsp. cremoris CCDM
946 (hereafter L946). Both of these BA producing strains were
obtained from the Culture Collection of Dairy Microorganisms
(Laktoflora, Prague, Czech Republic) as isolates from natural
cheeses and their BA production was proved (Bunˇková et al.,
2009). The taxonomy of both strains was confirmed by 16S RNA
sequencing. These strains of L. lactis subsp. lactis are commonly
used as part of primary starter cultures (Bunˇková et al., 2010,
2011) to produce a large diversity of cheeses and also fermented
milks. Furthermore, control samples without the addition of the
BA producing strains (hereafter ‘‘C’’) were also made.
2.1. Bulk starter preparation
For the preparation of the bulk starter for the control production
(control cheese group C – without the addition of the BA producing
strains), a commercial lyophilised mesophilic culture
(Laktoflora, Milcom, Prague, Czech Republic) containing L. lactis
subsp. lactis, L. lactis subsp. cremoris and L. lactis subsp. lactis biovar
diacetylactis was used. In our previous work, we found out that the
above-mentioned commercial culture did not produce a significant
amount of biogenic amines (unpublished data). For the preparation
of the bulk starter, heat-treated milk (30 min at a temperature of
100 ± 1 C) was used. One hundred millilitres of thus prepared
heat-treated milk after cooling (at a temperature of 25 ± 1 C)
was inoculated with 0.3 g of the lyophilised commercial mesophilic
culture. The resulting mixture was incubated at a temperature
of 25 ± 1 C for 20 h.
For each model batch of cheeses (with the addition of the BA
producing strain), two bulk starters were prepared separately: (i)
a basic bulk starter of 50 mL volume (containing the
above-mentioned commercial mesophilic culture of Laktoflora),
and (ii) a second bulk starter containing BA producing lactococci
of 50 mL volume. The basic bulk starter was prepared by mixing
50 mL of heat-treated milk and 0.15 g of the lyophilised commercial
culture and was incubated at a temperature of 25 ± 1 C for 20 h.
The second bulk starter (containing the BA producing strain of
CCDM 824 or CCDM 946) was prepared by mixing 50 mL of
heat-treated milk and 5 mL of broth inoculated with the appropriate
BA producing strain (CCDM 824 or CCDM 946) and was incubated
at a temperature of 25 ± 1 C for 20 h. The broth used for
the preparation of the bulk starter was prepared according to
Bunˇková et al. (2011) – 5 mL of a culture medium M17 broth
(Merck, New Jersey, USA) with the addition of 0.2% (w/v) precursors
of biogenic amines (histidine, tyrosine, lysine, ornithine and arginine;
Sigma–Aldrich, St. Louis, USA) was inoculated with 25 ll of
an overnight culture (107–108 CFU/mL) and incubated at a temperature
of 30 ± 1 C for 20 h. The bulk starters after the incubation
(both the basic one and also the one containing the BA producing
strains) and the broths for the preparation of the bulk starters with
the BA producing strains (including the overnight culture) were
analysed to determine biogenic amine content. Also, microbiological
analyses were performed (see Sections 2.4 and 2.6).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการชนิดที่สองของชุดแบบจำลองด้วยการเพิ่มการผลิตบาต้องใช้สตาร์ทผลิต: (i) ชุดของเนยแข็งด้วยการแห่งบาที่ผลิตต้องใช้ของ L. lactis ถั่ว cremoris824 CCDM (โดย L824) และ (ii) ชุดของเนยแข็งด้วยการเพิ่มของ BA ที่ผลิตต้องใช้ของ L. lactis ถั่ว cremoris CCDM946 (โดย L946) ทั้งนี้ BA ที่ผลิตสายพันธุ์ได้ได้รับจากวัฒนธรรมชุดของนมจุลินทรีย์(Laktoflora ปราก สาธารณรัฐเช็ก) เป็นที่แยกได้จากธรรมชาติเนยแข็งและการผลิตของ BA ได้พิสูจน์ (Bunˇková et al.,2009) จำแนกประเภทของสายพันธุ์ทั้งสองได้รับการยืนยัน โดยอาร์เอ็นเอ 16Sจัดลำดับ สายพันธุ์เหล่านี้ของ L. lactis ถั่ว lactis อยู่ทั่วไปใช้เป็นส่วนหนึ่งของวัฒนธรรมหลักเริ่มต้น (Bunˇková et al., 20102011) การผลิตเนยแข็งหลากหลายขนาดใหญ่ และยัง มีหมักmilks นอกจากนี้ ควบคุมตัวอย่างไม่ มีการเพิ่มการนอกจากนี้ยังเกิดสายพันธุ์ producing BA (โดย ''ซี '')2.1 เตรียมเริ่มต้นจำนวนมากสำหรับการเตรียมของ starter จำนวนมากสำหรับการควบคุมการผลิต(ควบคุมกลุ่มชี C – โดยไม่มีการเพิ่มการผลิตบาstrains), วัฒนธรรมเชิงพาณิชย์ lyophilised mesophilic(Laktoflora, Milcom ปราก สาธารณรัฐเช็ก) ประกอบด้วย L. lactisถั่ว lactis, L. lactis ถั่ว cremoris และ L. lactis ถั่ว lactis biovarใช้ diacetylactis ในการทำงานของเราก่อนหน้านี้ เราพบว่าการวัฒนธรรมทางการค้าดังกล่าวไม่ได้สร้างเป็นสำคัญจำนวน biogenic amines (ยกเลิกการประกาศข้อมูล) สำหรับการเตรียมของ starter จำนวนมาก heat-treated นม (30 นาทีที่อุณหภูมิของใช้ 100 ± 1 C) Millilitres หนึ่งร้อยของเตรียมทำนม heat-treated หลังระบายความร้อน (ที่อุณหภูมิ 25 ± 1 C)มี inoculated กับ 0.3 g ของ mesophilic พาณิชย์ lyophilisedวัฒนธรรม ส่วนผสมได้ถูก incubated ที่อุณหภูมิของ± 25 1 C สำหรับ 20 hแต่ละชุดแบบจำลองของเนยแข็ง (กับแห่งบาการผลิตต้องใช้), สองจำนวนมากอย่าได้เตรียมแยก: (i)เริ่มต้นพื้นฐานจำนวนมากของปริมาตร 50 mL (ประกอบด้วยการmesophilic กลพาณิชย์วัฒนธรรม Laktoflora),และ (ii) เริ่มต้นที่สองเป็นกลุ่มที่ประกอบด้วย BA ผลิต lactococciของปริมาตร 50 mL เริ่มต้นพื้นฐานจำนวนมากถูกเตรียม โดยผสม50 mL นม heat-treated และ 0.15 g ของพาณิชย์ lyophilisedวัฒนธรรม และมี incubated ที่อุณหภูมิ 25 ± 1 C สำหรับ 20 hเริ่มต้นจำนวนมากสองที่ (BA ที่ผลิตต้องใช้ของที่ประกอบด้วยCCDM 824 หรือ CCDM 946) ถูกเตรียม โดยผสม 50 mL ของนม heat-treated และ 5 mL ของซุป inoculated มีBA ที่ผลิตสายพันธุ์ (CCDM 824 หรือ CCDM 946) และมี incubatedที่อุณหภูมิ 25 ± 1 C สำหรับ 20 h ซุปที่ใช้สำหรับเตรียมเริ่มต้นจำนวนมากเตรียมไว้ตามBunˇková et al. (2011) – 5 mL ของสื่อวัฒนธรรมซุป M17(เมอร์ค นิวเจอร์ซีย์ สหรัฐอเมริกา) แห่ง precursors 0.2% (w/v)of biogenic amines (histidine, tyrosine, lysine, ornithine and arginine;Sigma–Aldrich, St. Louis, USA) was inoculated with 25 ll ofan overnight culture (107–108 CFU/mL) and incubated at a temperatureof 30 ± 1 C for 20 h. The bulk starters after the incubation(both the basic one and also the one containing the BA producingstrains) and the broths for the preparation of the bulk starters withthe BA producing strains (including the overnight culture) wereanalysed to determine biogenic amine content. Also, microbiologicalanalyses were performed (see Sections 2.4 and 2.6).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.
วัสดุและวิธีการสองประเภทของรูปแบบสำหรับกระบวนการที่มีการเพิ่มขึ้นของบริติชแอร์เวย์ผลิตสายพันธุ์เริ่มต้นที่มีการผลิต
(i)
ชุดของชีสที่มีการเพิ่มขึ้นของบริติชแอร์เวย์ผลิตสายพันธุ์ของL. lactis subsp cremoris
CCDM 824 (ต่อ L824) และ (ii)
ชุดของเนยแข็งมีการเพิ่มของบริติชแอร์เวย์ผลิตสายพันธุ์ของL. lactis subsp cremoris CCDM
946 (ต่อ L946) ทั้งสองสายพันธุ์ที่ผลิต BA
เหล่านี้ที่ได้รับจากการเก็บวัฒนธรรมของจุลินทรีย์นม
(Laktoflora ?, ปรากสาธารณรัฐเช็ก)
เป็นสายพันธุ์จากธรรมชาติชีสและการผลิตปริญญาตรีของพวกเขาได้พิสูจน์(Bunková et al.,
2009) อนุกรมวิธานของทั้งสองสายพันธุ์ที่ได้รับการยืนยันจาก 16S RNA
ลำดับ สายพันธุ์นี้ L. lactis subsp lactis
มักจะถูกใช้เป็นส่วนหนึ่งของวัฒนธรรมที่เริ่มต้นหลัก(Bunková et al., 2010,
2011)
ในการผลิตความหลากหลายขนาดใหญ่ของเนยแข็งและหมักนม นอกจากนี้กลุ่มตัวอย่างโดยไม่ต้องควบคุมการเพิ่มขึ้นของสายพันธุ์ที่ผลิตปริญญาตรี (ต่อจากนี้ '' ซี '') ยังทำ. 2.1 เตรียมเริ่มต้นจำนวนมากสำหรับการเตรียมเริ่มต้นจำนวนมากสำหรับการผลิตควบคุม(กลุ่มควบคุมชีส C - โดยไม่มีการเพิ่มของบริติชแอร์เวย์ผลิตสายพันธุ์) ซึ่งเป็นวัฒนธรรมเชิงพาณิชย์ lyophilised mesophilic (Laktoflora ?, Milcom, ปราก, สาธารณรัฐเช็ก) ที่มีแอล lactis subsp lactis ลิตร lactis subsp cremoris และ L. lactis subsp lactis ไบโอวาร์diacetylactis ถูกนำมาใช้ ในการทำงานของเราก่อนหน้านี้เราพบว่าดังกล่าวข้างต้นวัฒนธรรมในเชิงพาณิชย์ไม่ได้ผลิตอย่างมีนัยสำคัญปริมาณของไบโอจีเอมีน(ข้อมูลที่ไม่ถูกเผยแพร่) สำหรับการเตรียมความพร้อมของการเริ่มต้นเป็นกลุ่มนมที่ได้รับความร้อน (30 นาทีที่อุณหภูมิ 100 ± 1 องศาเซลเซียส) ถูกนำมาใช้ หนึ่งร้อยมิลลิลิตรจึงเตรียมนมได้รับการรักษาความร้อนหลังจากที่ระบายความร้อน (ที่อุณหภูมิ 25 ± 1 องศาเซลเซียส) ได้รับเชื้อด้วย 0.3 กรัมของ mesophilic lyophilised พาณิชย์วัฒนธรรม ผสมทำให้ถูกบ่มที่อุณหภูมิ25 ± 1 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 ชั่วโมง?. สำหรับแต่ละชุดรูปแบบของชีส (ที่มีการเพิ่มขึ้นของบริติชแอร์เวย์ผลิตสายพันธุ์) สองเริ่มเป็นกลุ่มได้จัดทำแยกต่างหาก: (i) การเริ่มต้นเป็นกลุ่มพื้นฐานของปริมาณ 50 มิลลิลิตร (ที่มีดังกล่าวข้างต้นmesophilic วัฒนธรรมในเชิงพาณิชย์ของ Laktoflora?) และ (ii) เริ่มต้นที่สองเป็นกลุ่มที่มีการผลิตปริญญาตรี lactococci ของปริมาณ 50 มิลลิลิตร เริ่มต้นที่กลุ่มพื้นฐานถูกจัดทำขึ้นโดยการผสม50 มลนมร้อนได้รับการรักษาและ 0.15 กรัมของการค้า lyophilised วัฒนธรรมและได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 25 ± 1 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 ชม. เริ่มต้นที่กลุ่มที่สอง (ที่มี BA ผลิตสายพันธุ์ของCCDM 824 หรือ CCDM 946) ถูกจัดทำขึ้นโดยการผสม 50 มิลลิลิตรนมร้อนได้รับการรักษาและ5 มิลลิลิตรของน้ำซุปเชื้อด้วยที่เหมาะสมผลิตบริติชแอร์เวย์สายพันธุ์(CCDM 824 หรือ CCDM 946) และได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ25 ± 1 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 ชั่วโมง น้ำซุปที่ใช้ในการเตรียมความพร้อมของการเริ่มต้นเป็นกลุ่มที่ถูกจัดทำขึ้นตามBunková et al, (2011) - 5 มิลลิลิตรของวัฒนธรรมกลางน้ำซุป M17 (เมอร์ค, New Jersey, USA) ด้วยนอกเหนือจาก 0.2% (ที่ w / v) สารตั้งต้นของเอมีนไบโอจี(ฮิสติดีน, ซายน์, ไลซีน ornithine และอาร์จินี; Sigma-Aldrich, เซนต์หลุยส์สหรัฐอเมริกา) ได้รับเชื้อด้วย 25 LL ของวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืน(107-108 CFU / มิลลิลิตร) และบ่มที่อุณหภูมิ30 ± 1 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 ชั่วโมง น้ำย่อยกลุ่มหลังจากบ่ม(ทั้งหนึ่งขั้นพื้นฐานและยังเป็นหนึ่งที่มีการผลิตบริติชแอร์เวย์สายพันธุ์) และซุปมิโสะสำหรับเตรียมความพร้อมของการเริ่มเป็นกลุ่มที่มีสายพันธุ์ที่ผลิตBA (รวมถึงวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืน) ได้รับการวิเคราะห์เพื่อกำหนดเนื้อหาไบโอจีเอ นอกจากนี้ทางจุลชีววิทยาการวิเคราะห์ได้ดำเนินการ (ดูมาตรา 2.4 และ 2.6)