2.3. Lymphocyte blastogenesisSpleen

2.3. Lymphocyte blastogenesis
Spleens were minced in RPM1 1640 medium and
lymphocytes isolated in a Ficoll-Hypaque gradient.
Lymphocytes in complete medium (RPM1 1640, 5%
bovine fetal serum, 2 mM L-glutamine and gentamycin
50 mg/l) were seeded at 2 X 10’ cells/well in 96-well
flat-bottomed microtitre plates. Medium alone or
medium with an optimal concentration of Concanavalin
A (ConA) 0.5 P./well (Sigma, St. Louis, MO)
was added and the plates incubated for 120 h at 37°C
at 5% CO, and 95% air. A dose-response curve for
ConA was performed to determine the optimal mitogen
concentration. The optimal response in unweaned
pups was achieved at 5 days of culture. Tritiated thymidine,
0.5 &i/well (specific activity 6.7 &i/mM NEN,
Boston, MA) was added to the culture wells during the
last 18 h of incubation. Samples were tested in triplicate
(Schlesinger et al., 1992).
2.4. IL-l induction
IL-l was induced in adherent spleen cells employing
a modification of the Hiffner-Cavaillon technique
(Haffner-Cavaillon et al., 1990). One-million of spleen
lymphocytes were adhered with complete medium in
24-well culture plates during 2 h at 37°C in 5% CO,-
95% air. Non-adherent cells were removed by PBS
washings and adherent cells were stimulated with 10
pg LPS (Sigma) in complete medium with indomethacin
1 pg/ml (INDO, Sigma Chemical Co., St.
Louis, MO) during 24 h. The percentage of
macrophages in the adherent cell population assessed
by non-specific stearase staining ranged between 70
and 80% in all animal groups. At the end of the
incubation period, adherent cells were washed and
lysed by three freeze-thaw cycles and maintained at
-70°C until assay for IL-l biological activity.
IL-l activity was measured employing a thymocyte
proliferation assay (Nouri et al., 1984). Thymuses of
CH3/He 5-6-week-old mouse were finely minced in
complete RPM1 1640 medium. The final cell preparation
was adjusted to 7 x 10’ cells/well in 96 wells
microtitre plates (flat bottomed) in complete medium
with 10e5 M 2-mercaptoethanol and ConA (0.08 kg).
100 ~1 of a 1:lO dilution of the adherent spleen cell
lysate was added to this culture system and incubated
for 3 days at 37°C in 5% CO,-95% air. Proliferation
was assessed by measuring the incorporation of 0.5 PCi
of tritiated thymidine/well during 18 h pulse and expressed
as mean cpm of triplicate wells using standard
liquid scintillation techniques
2.6. Plasma corticosterone determinations
Corticosterone determinations were performed by
radioimmunoassay (ICN Biomedicals, Inc., Costa Mesa,
CA) in blood samples obtained by heart punction at 9
a.m.
2.7. Statistics
Non-parametric data were analysed by Kruskall-
Wallis Test and Mann-Whitney test. Parametric results
were analysed by ANOVA test. A P-value less than
0.05 was accepted as statistically significant.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. lymphocyte blastogenesisSpleens ถูกสับใน RPM1 1640 และlymphocytes ที่แยกต่างหากในไล่ Ficoll HypaqueLymphocytes ในสมบูรณ์ปานกลาง (RPM1 1640, 5%เซรั่มครรภ์วัว 2 มม. L glutamine และ gentamycin50 mg/l) ถูก seeded ที่ 2 X 10' เซลล์/ดีใน 96-ดีแผ่น flat-bottomed microtitre สื่อเพียงอย่างเดียว หรือขนาดกลาง มีความเข้มข้นที่เหมาะสมที่สุดของ Concanavalin(ConA) P. 0.5/บ่อ (ซิก St. Louis, MO)เพิ่ม และแผ่น incubated สำหรับ h 120 ที่ 37° Cที่ 5% CO และอากาศ 95% เส้นโค้งตอบรับยาสำหรับทำการกำหนด mitogen สุด ConAความเข้มข้น การตอบสนองที่ดีที่สุดใน unweanedpups สำเร็จใน 5 วันของวัฒนธรรม Tritiated thymidine0.5 และฉัน/ดี (กิจกรรม 6.7 และ ฉัน/mM ฆราวาสBoston, MA) ถูกเพิ่มเข้าไปบ่อวัฒนธรรมระหว่างการh 18 ล่าสุดของคณะทันตแพทยศาสตร์ ตัวอย่างทดสอบใน triplicate(Schlesinger et al., 1992)2.4. IL l การเหนี่ยวนำIL l ถูกทำให้เกิดเซลล์ม้ามนฤมลใช้การปรับเปลี่ยนเทคนิค Hiffner-Cavaillon(Haffner Cavaillon et al., 1990) หนึ่ง - ล้านของม้ามlymphocytes ถูกปฏิบัติตาม ด้วยสื่อสมบูรณ์ในวัฒนธรรมดี 24 แผ่นระหว่าง h 2 ที่ 37° C 5% CO, -อากาศ 95% เซลล์ไม่มี adherent ออก โดย PBSwashings และนฤมลเซลล์ที่ถูกกระตุ้น ด้วย 10pg LPS (ซิกมา) ในสื่อสมบูรณ์ด้วย indomethacin1 pg/ml (อินโด ซิกเคมี Co. เซนต์Louis, MO) ในช่วง 24 ชม เปอร์เซ็นต์ของบังเอิญในประชากรเซลล์นฤมลประเมินโดยเจาะจง stearase ย้อมสีแสก ๆ ระหว่าง 70และ 80% ในกลุ่มของสัตว์ทั้งหมด เมื่อสิ้นสุดการคณะทันตแพทยศาสตร์รอบระยะเวลา adherent เซลล์ถูกล้าง และlysed โดยสามรอบ thaw แช่แข็ง และเก็บรักษาที่-70° C จนถึงทดสอบในกิจกรรมชีวภาพ IL lIL l กิจกรรมที่วัดใช้เป็น thymocyteทดสอบการงอก (Nouri et al., 1984) Thymuses ของCH3 / เมาส์ 5-6-สัปดาห์เก่าเขาประณีตถูกสับในสมบูรณ์ปานกลาง RPM1 1640 การเตรียมเซลล์สุดท้ายมีการปรับปรุงการ 7 x 10' เซลล์/ดีในบ่อ 96microtitre แผ่น (แบนยนที่) ในสมบูรณ์10e5 M 2 mercaptoethanol และ ConA (0.08 ตามลำดับกก.)100 ~ 1 ของ 1: หล่อ เจือจางเซลล์ม้ามนฤมลlysate เพิ่มระบบนี้ และ incubatedสำหรับ 3 วันที่ 37° C 5% CO, -95% อากาศ การแพร่หลายถูกประเมิน โดยการวัดในการประสานของ 0.5 PCithymidine tritiated/ดี ระหว่างชีพจร 18 h และแสดงเป็น cpm เฉลี่ยของบ่อที่ใช้มาตรฐาน triplicateเทคนิค scintillation เหลว2.6. พลาสม่า corticosterone determinationsCorticosterone determinations ถูกดำเนินการโดยradioimmunoassay (ICN Biomedicals, Inc. คอสตาเมซาCA) ในตัวอย่างเลือดที่ได้รับ โดย punction ห้องที่ 9น.2.7. สถิติข้อมูลที่ไม่ใช่พาราเมตริกได้ analysed โดย Kruskall-ทดสอบทดสอบวาลลิและวิทนีย์มานน์ ผลลัพธ์พาราเมตริกถูก analysed โดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทดสอบ ค่า P น้อยกว่า0.05 ยอมรับเป็นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 เม็ดเลือดขาว blastogenesis
ม้ามถูกสับใน RPM1 1640 ขนาดกลางและ
เซลล์เม็ดเลือดขาวที่แยกได้ในการไล่ระดับสี Ficoll-Hypaque.
เซลล์เม็ดเลือดขาวในสื่อฉบับสมบูรณ์ (RPM1 1640, 5%
ซีรั่มของทารกในครรภ์วัว 2 มิลลิ L-glutamine และ Gentamycin
50 mg / l) เป็นเมล็ดที่ 2 X 10 'เซลล์ / ดีใน 96 หลุม
ที่ราบต่ำแผ่น microtitre ปานกลางคนเดียวหรือ
ขนาดกลางที่มีความเข้มข้นที่เหมาะสมของ Concanavalin
(Cona) 0.5 P. / ดี (Sigma, เซนต์หลุยส์)
ถูกบันทึกและแผ่นบ่มเป็นเวลา 120 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส
ที่ CO 5% และ 95% ของอากาศ . เส้นโค้งปริมาณการตอบสนองสำหรับ
Cona ได้ดำเนินการเพื่อตรวจสอบ mitogen ดีที่สุด
เข้มข้น การตอบสนองที่ดีที่สุดใน unweaned
ลูกก็ประสบความสำเร็จใน 5 วันของวัฒนธรรม thymidine Tritiated,
0.5 และ I / ดี (กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจง 6.7 & I / มิลลิ NEN,
Boston, MA) ถูกบันทึกอยู่ในบ่อเพาะเลี้ยงในช่วง
ที่ผ่านมา 18 ชั่วโมงของการบ่ม ตัวอย่างถูกทดสอบในเพิ่มขึ้นสามเท่า
(ชเลซิงเจอร์ et al., 1992).
2.4 เหนี่ยวนำ IL-L
IL-L ถูกชักนำในเซลล์ม้ามสาวกจ้าง
ปรับเปลี่ยนเทคนิค Hiffner-Cavaillon
(Haffner-Cavaillon et al., 1990) หนึ่งล้านของม้าม
เซลล์เม็ดเลือดขาวที่ถูกยึดติดกับสื่อที่สมบูรณ์ใน
แผ่นวัฒนธรรม 24 หลุมระหว่างวันที่ 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสใน CO 5% -
95% อากาศ เซลล์ปลอดสานุศิษย์ถูกถอดออกโดยพีบีเอส
และเซลล์ซักพรรคพวกถูกกระตุ้นด้วย 10
PG LPS (Sigma) ในสื่อที่สมบูรณ์แบบด้วย indomethacin
1 พิโคกรัม / ml (INDO ซิก Chemical Co. , เซนต์
หลุยส์, MO) ระหว่างวันที่ 24 ชั่วโมง ร้อยละของ
ประชากรขนาดใหญ่ในเซลล์สานุศิษย์ประเมิน
โดยการย้อมสี stearase ไม่ใช่เฉพาะในช่วงระหว่าง 70
และ 80% อยู่ในกลุ่มสัตว์ทั้งหมด ในตอนท้ายของ
ระยะเวลาการบ่มเซลล์พรรคพวกถูกล้างและ
lysed โดยสามรอบแช่แข็งละลายและการบำรุงรักษาที่
-70 ° C จนตรวจหากิจกรรมทางชีวภาพ IL-L.
กิจกรรม IL-L วัดจ้าง thymocyte
ทดสอบการงอก (ดนูและ al., 1984) Thymuses ของ
CH3 / เขาเมาส์ 5-6 สัปดาห์เก่าถูกสับละเอียดใน
RPM1 สมบูรณ์ 1640 กลาง การเตรียมเซลล์สุดท้าย
ได้รับการปรับให้ 7 x 10 'เซลล์ / ดีใน 96 หลุม
แผ่น microtitre (จุดต่ำสุดแบน) ในสื่อที่สมบูรณ์
กับ 10e5 M 2-mercaptoethanol และ Cona (0.08 กก.)
100 ~ 1 จาก 1: LO เจือจาง เซลล์ม้ามสาวก
lysate ถูกบันทึกอยู่ในระบบวัฒนธรรมนี้และบ่ม
เป็นเวลา 3 วันที่ 37 ° C ใน 5% CO, -95% อากาศ ขยาย
ได้รับการประเมินโดยการวัดการรวมตัวของไอ 0.5
ของ thymidine tritiated / ดีในช่วงชีพจร 18 ชั่วโมงและแสดง
เป็นค่าเฉลี่ยต่อนาทีสำหรับหลุมเพิ่มขึ้นสามเท่าโดยใช้มาตรฐาน
เทคนิคประกายของเหลว
2.6 corticosterone พลาสม่าหาความ
หาความ corticosterone ดำเนินการโดย
radioimmunoassay (ICN- Biomedicals, Inc, คอสตาเมซา,
CA) ในตัวอย่างเลือดที่ได้รับจากหัวใจ punction ที่ 9
น
2.7 สถิติ
ข้อมูลไม่พาราวิเคราะห์ Kruskall-
วาลลิสและทดสอบ Mann-Whitney ทดสอบ ผล Parametric
ถูกนำมาวิเคราะห์โดยการทดสอบวิเคราะห์ความแปรปรวน P-value น้อยกว่า
0.05 ได้รับการยอมรับเป็นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 โดย blastogenesis
ม้ามถูกสับใน rpm1 1640 ขนาดกลาง และถูกแยกใน ficoll

hypaque ลาด . เม็ดเลือดขาวในสื่อสมบูรณ์ ( rpm1 1640 5 %
เซรั่มของทารกในครรภ์ และ Glutamine 2 มม. และเจนตามัยซิน
50 มก. / ล. ) เป็นเมล็ดที่ 2 x 10 ' เซลล์ / ดีใน 96 ดี
microtitre แบน bottomed แผ่น กลางคนเดียว หรือกับความเข้มข้นที่เหมาะสมของสื่อ

( ถูก cona ) 0 P/ ดี ( Sigma , St . Louis , MO )
เพิ่มและจาน บ่มที่ 37 ° C 120 H
5 % CO และ 95% อากาศ ความคิดเห็นที่โค้ง
cona ทำการศึกษาความเข้มข้นที่เหมาะสมปรากฎ
. การตอบสนองที่เหมาะสมใน unweaned
ลูกหมาอยู่ได้ 5 วัน ของวัฒนธรรม tritiated เพียง 0.5 &
/ ดี ( เฉพาะกิจกรรม 6.7 &ผม / อืมเณร
, Boston , MA ) คือเพิ่มวัฒนธรรมเวลส์ในระหว่าง
เมื่อ 18 ชั่วโมงของการบ่ม ตัวอย่างทดสอบทั้งสามใบ
( Schlesinger et al . , 1992 ) .
2.4 . il-l
il-l เหนี่ยวนำเซลล์ม้ามโดยสานุศิษย์
การเปลี่ยนแปลงของคาเวล์ลง hiffner เทคนิค
( ฮอฟเนอร์คาเวล์ลง et al . , 1990 ) หนึ่งล้านของม้ามเม็ดเลือดขาวถูกยึดติดกับสื่อสมบูรณ์

24 แผ่นดีในวัฒนธรรมระหว่าง 2 H ที่ 37 ° C ใน 5% CO , -
95% อากาศไม่ติดเซลล์ออกโดย PBS
washings สานุศิษย์เซลล์ได้รับการกระตุ้นและ 10
- สเปรย์หล่อลื่น ( Sigma ) ในอาหารที่สมบูรณ์กับอินโด
1 pg / ml ( อินโด , Sigma Chemical Co . , St .
Louis , MO ) ตลอด 24 ชั่วโมง ร้อยละ
macrophages ในพลพรรคเซลล์ประชากรประเมิน
โดยเฉพาะ stearase . อยู่ระหว่าง 70 และ 80 %
ในกลุ่มสัตว์ทั้งหมด ในตอนท้ายของ
ระยะเวลาพลพรรคเซลล์มีการล้างและละลาย
lysed สามรอบ และรักษาที่ 70 ° C )
- จน สำหรับกิจกรรมทางชีวภาพ il-l กิจกรรม
il-l วัดใช้ไทมอไซต์
proliferation assay ( นูริ et al . , 1984 ) thymuses ของ
CH3 / เขา 5-6-week-old เมาส์ถูกสับละเอียดที่สมบูรณ์ใน
rpm1 1640 ) สุดท้ายเตรียมปรับเซลล์
7 x 10 ' เซลล์ / ในบ่อ
96microtitre แผ่น ( แบน bottomed )
) M และสมบูรณ์ด้วยอย่างเดียว 10e5 cona ( 0.08 กิโลกรัม ) .
100 ~ 1 1 โล ( ของพลพรรคเซลล์ม้าม
lysate ถูกเพิ่มเข้าไปในระบบวัฒนธรรมและบ่ม
3 วัน ที่ 37 ° C ใน 5% CO , - 95% อากาศ การประเมินโดยการวัดการ

ของ tritiated เพียง 0.5 PCI / ตอน 18 H
ชีพจรและแสดงหมายความว่า CPM ของเวลส์ทำสำเนาสามฉบับโดยใช้มาตรฐาน

เทคนิคแสงของเหลว 2.6 พลาสมาคอร์ติโคสเตอโรน determinations ใช้คอร์ติโคสเตอโรนได้

radioimmunoassay ( ICN biomedicals , อิงค์ , Costa Mesa ,
CA ) ในตัวอย่างเลือดที่ได้จาก punction หัวใจ 9
3
2.7 .
สถิติที่ไม่ใช้พารามิเตอร์วิเคราะห์ข้อมูลโดย kruskall -
ลิส test และ Mann Whitney Test
ผลพารามิเตอร์วิเคราะห์ข้อมูลด้วยการทดสอบ ANOVA ( p น้อยกว่า 0.05 คือ
รับเป็นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ