fluorescence was measured with a Ce

fluorescence was measured with a Cecil spectrofluorometer using 450-nm
emission and 365-nm excitation filters. The normal range of enzyme activity
was determined in leukocytes of six normal Thais. Each patient’s major clinical
features and enzymatic activity are shown in Table 1.
Genotyping
After informed consent was obtained, high-molecular weight genomic DNA of
all patients except patient 1 was extracted from peripheral blood leukocytes.
Long-template PCR amplifying the entire GBA gene was performed using the
Elongase Enzyme Mix (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) with primers GBA-F1
and GBA-R11 (Table 2). DNA was denatured for 30 s at 94 1C, followed by 35
cycles of denaturation at 94 1C for 30 s, annealing at 55 1C for 30s and
elongation at 68 1C for 7 min. The 6.6-kb product amplified by long-template
PCR was gel purified using the QIAquick gel extraction kit (Qiagen, Valencia,
CA, USA), then treated with ExoSAP-IT (USB Corporation, Cleveland, OH,
USA), and sent for direct sequencing at Macrogen Inc., Seoul, Korea. In
addition, the genomic DNA of all patients including patient 1, whose highmolecular
weight DNA was not available, was subjected to PCR amplification
using primers designed to amplify each exon of the functional GBA gene but
not the pseudogene (Table 2). PCR products were treated with ExoSAP-IT and
sent for direct sequencing. Sequence analyses were performed by Sequencher
4.2. Samples with possible new variants were resequenced. The positions of

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เรืองแสงถูกวัด ด้วย spectrofluorometer เซซิลที่ใช้ 450 nmปล่อยและตัวกรองไฟฟ้ารุ่น 365 นาโนเมตร ช่วงปกติของเอนไซม์กำหนดในหญิงของคนไทยปกติที่หก ทางคลินิกของผู้ป่วยแต่ละวิชาในตารางที่ 1 แสดงคุณลักษณะและเอนไซม์Genotypingหลังจากที่ยินยอมเป็นดีเอ็นเอการน้ำหนัก โมเลกุลสูง ได้รับของผู้ป่วยทั้งหมดยกเว้นผู้ป่วย 1 ถูกแยกจากเลือดหญิงแม่นาน PCR ขยายยีน GBA ทั้งหมดดำเนินการโดยใช้การElongase เอนไซม์ผสมผสาน (Invitrogen คาร์ลบาด CA สหรัฐอเมริกา) กับไพรเมอร์ GBA-F1และ GBA-R11 (ตาราง 2) ดีเอ็นเอถูกเอทิลแอลกอฮอล์ 30 s ที่ 94 1C ตาม ด้วย 35รอบการ denaturation ที่ 94 1C 30 s หลอมที่ 1C 55 เวลา และยืดที่ 1C 68 7 นาที ผลิตภัณฑ์ 6.6 กิโลขยายแม่แบบยาวPCR ถูกเจบริสุทธิ์โดยใช้ชุดการสกัดเจ QIAquick (Qiagen วาเลนเซียCA, USA), แล้วรักษา ด้วย ExoSAP-มัน (บริษัท USB, Cleveland, OHสหรัฐอเมริกา), และส่งการจัดลำดับโดยตรงที่ Macrogen Inc. โซล เกาหลี ในนอกจากนี้ ดีเอ็นเอของผู้ป่วยทั้งหมดรวมทั้งผู้ป่วย 1, highmolecular ที่มีการน้ำหนักดีเอ็นเอไม่ได้ ภายใต้การปลักใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาเพื่อเพิ่มพลังแต่ละ exon GBA ยีนทำงาน แต่ไม่ที่ pseudogene (ตารางที่ 2) ผลิตภัณฑ์ PCR ได้รับการรักษา ด้วย ExoSAP มัน และส่งสำหรับการจัดลำดับโดยตรง ดำเนินการวิเคราะห์ลำดับ โดย Sequencher4.2. ตัวอย่างพันธุ์ใหม่ได้ถูก resequenced ตำแหน่งของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เรืองแสงวัดกับเซซิล spectrofluorometer ใช้ 450 นาโนเมตร
ปล่อยก๊าซเรือนกระจกและ 365 นาโนเมตรฟิลเตอร์กระตุ้น ช่วงปกติของการทำงานของเอนไซม์
ที่ถูกกำหนดในเม็ดเลือดขาวหกคนไทยปกติ คลินิกผู้ป่วยแต่ละสาขา
คุณสมบัติและเอนไซม์ที่จะแสดงในตารางที่ 1
Genotyping
หลังจากยินยอมที่ได้รับน้ำหนักโมเลกุลสูงดีเอ็นเอของ
ผู้ป่วยทั้งหมดยกเว้นผู้ป่วย 1 ถูกสกัดจากเม็ดเลือดขาว.
ยาวแม่แบบ PCR ปรากฏการณ์ทั้งยีน GBA เป็น ดำเนินการโดยใช้
Elongase เอนไซม์ผสม (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) กับไพรเมอร์ GBA-F1
และ GBA-R11 (ตารางที่ 2) ดีเอ็นเอเอทิลแอลกอฮอล์เป็นเวลา 30 วินาทีที่ 94 1C ตามด้วย 35
รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่ 1C 94 เป็นเวลา 30 วินาที, การอบที่ 55 1C สำหรับยุค 30 และ
ความยืดเมื่อ 68 1C 7 นาที ผลิตภัณฑ์ 6.6 กิโลไบต์ขยายโดยยาวแม่แบบ
PCR ถูกเจลบริสุทธิ์โดยใช้ QIAquick ชุดสกัดเจล (Qiagen, วาเลนเซีย,
CA, USA) ได้รับการรักษาแล้วด้วย ExoSAP-IT (USB คอร์ปอเรชั่น Cleveland, OH,
USA) และส่งสำหรับ ลำดับตรงที่ Macrogen อิงค์กรุงโซลประเทศเกาหลีใต้ ใน
นอกจากนี้ดีเอ็นเอของผู้ป่วยทั้งหมดรวมทั้งผู้ป่วย 1 ซึ่ง highmolecular
ดีเอ็นเอน้ำหนักก็ไม่สามารถใช้ได้ถูกยัดเยียดให้ขยาย PCR
โดยใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาเพื่อขยายเอกซ์ซอนของยีน GBA ทำงานแต่ละ แต่
ไม่ pseudogene (ตารางที่ 2) ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการรักษาด้วย ExoSAP-IT และ
ส่งสำหรับการจัดลำดับโดยตรง ลำดับได้ดำเนินการวิเคราะห์โดย SEQUENCHER
4.2 ตัวอย่างสายพันธุ์ใหม่ที่เป็นไปได้ถูก resequenced ตำแหน่งของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เรือง เป็นวัดที่มีชื่อ spectrofluorometer ใช้ 450 nmการปล่อยและ 365 nm และตัวกรอง ช่วงปกติของกิจกรรมเอนไซม์ตั้งใจในเม็ดเลือดขาวของหกปกติคนไทย คนไข้แต่ละสาขาคลินิกคุณลักษณะและเอนไซม์จะแสดงในตารางที่ 1เขตหลังจากที่ได้รับความยินยอม , ดีเอ็นเอโมเลกุลสูงผู้ป่วยทุกคน ยกเว้นผู้ป่วย 1 สกัดจากเม็ดเลือดขาวเม็ดเลือดขาว .นานแม่แบบ PCR amplifying ยีน GBA ทั้งหมดถูกดำเนินการโดยใช้ผสมเอนไซม์ elongase ( Invitrogen Carlsbad , CA , USA ) ด้วยไพรเมอร์ gba-f1และ gba-r11 ( ตารางที่ 2 ) ดีเอ็นเอถูกใช้สำหรับ 30 วินาทีที่ 94 1C , ตามด้วย 35รอบ ( ที่ 94 ใน 30 วินาที annealing ที่ 55 1C สำหรับ 30 และยืดที่ 68 ใน 7 นาที 6.6-kb ผลิตภัณฑ์โดยขยายแม่แบบยาวปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสโดยใช้ qiaquick เจลเจลบริสุทธิ์สกัด ( เพิ่มชุด , บาเลนเซียCA , USA ) แล้วได้รับการรักษาด้วย exosap ( USB Corporation , Cleveland , โอ้สหรัฐอเมริกา ) และส่งโดยตรงลำดับที่ macrogen อิงค์ , โซล , เกาหลี ในส่วนดีเอ็นเอของผู้ป่วยทั้งหมด รวมทั้งผู้ป่วยที่มี highmolecular 1น้ำหนักดีเอ็นเอไม่พร้อมใช้งาน ภายใต้เทคนิคเพิ่มจำนวนใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาเพื่อขยายแต่ละชนิดของยีน GBA หน้าที่แต่ไม่ pseudogene ( ตารางที่ 2 ) ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกรักษาด้วย exosap มันและส่งของโดยตรง การวิเคราะห์ลำดับได้ sequencher4.2 . ตัวอย่างสายพันธุ์ใหม่เป็นไปได้ resequenced . ตำแหน่งของ