Blood sampling and testing. Blood s

Blood sampling and testing. Blood samples
for analysis of selected parameters characterising
immune response in the investigated animals were taken
twice from all experimental groups of animals before (0
or K0 trial) and after administration of GM feeds. The
samples were collected into tubes containing
tripotassium salt of ethylenediamine tetraacetic acid
(K3EDTA, 0.07 mol/mL of blood), and into tubes with
heparin (20 U/mL).
Total and differential number of white blood
cells (WBC), - total number of lymphocytes (LYM), -
total number of “mid-size” cells such as monocytes,
eosinophils, and basophils (MID), - polymorphonuclear
leukocytes (PMNL, neutrophils) were assayed in the
blood. Moreover, immunophenotyping of peripheral
blood lymphocytes by the expression of CD2 (T-cell
antigen), CD4 (T-helper cell antigen), CD8, or CD8a in
poultry (T-cytotoxic/suppressor cell antigen), and WC4
(bovine B-cell antigen, examined only in cattle) surface
marker was performed. The immunophenotyping was
estimated using immunofluorescent flow cytometry
(FCM) with the species specific monoclonal antibodies
(MCAs) recognising the basic peripheral blood
lymphocyte cluster of the presented antigens (CD)
corresponding with the appropiate cell subpopulations.
The direct immunofluorescent differentiating
analysis of peripheral blood lymphocyte subpopulations
was performed according to Beckman-Coulter
Operator's Guide Procedure. Additional step was used in
the case of FITC-conjugated anti-CD45 and RPE-Cy5-
conjugated anti-CDl4 MCAs, which served for gating of
pure adequately separated lymphocyte population. The
analysis of suitable surface marker expression was done
directly from whole blood basing on OptiLyse
Immunotech preparation standard procedure. Fifty
microlitres of whole blood was incubated at room
temperature for 15 min with fluorescein isothiocyanateconjugated
anti-CD45, 2, 4, 8 (8a) and with redphycoerythrin-
cyanin 5.1-conjugated anti-CD14 MCAs
at recommended concentrations. Staining with primary
mouse anti-bovine WC4 MCA antibody involved a two
step procedure, as the antibody was not conjugated with
any fluorochrome and therefore, it reacted secondarily
with the F(ab´)2 rabbit anti-mouse immunoglobulin
conjugated to FITC (STAR9B Serotec,
UK/International). Then, 250 μL of lysing solution
(OptiLyse C, Immunotech) was added into all blood
samples and incubated again under the same conditions.
After the second incubation, blood cells were
isolated by double washing with PBS containing 5%
foetal calf serum, supernatant was discarded, and cells
were resuspended in 500 μL of PBS with foetal calf
serum. The cell suspension was analysed, using a flow
cytometer and a logarithmic amplifier.
Epics 4 XL Flow Cytometer (Beckman Coulter
Company, USA) with 15 MW argon ion air-cooled laser
providing incident light at 488 nm was used for the
analysis. Forward light scatter gates were set on the
lymphocyte fraction to exclude dead cells and debris.
The optical filter system consisting of the 525 nm

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สุ่มตัวอย่างเลือดและการทดสอบ ตัวอย่างเลือดสำหรับการวิเคราะห์พารามิเตอร์เลือก characterisingได้ดำเนินการตอบสนองภูมิคุ้มกันในสัตว์ investigatedจากกลุ่มทดลองทั้งหมดของสัตว์ก่อน (0 สองหรือทดลอง K0) และหลัง จากจัดการเนื้อหาสรุปกรัม ที่ตัวอย่างถูกเก็บไว้ในท่อที่ประกอบด้วยtripotassium เกลือของกรด ethylenediamine tetraacetic(K3EDTA โมล 0.07 มล.ของเลือด), และเข้าไป ในหลอดด้วยเฮพาริน (20 U/mL)จำนวนรวม และส่วนของเลือดสีขาวเซลล์ (WBC), -จำนวน lymphocytes (LYM), -จำนวนเซลล์ "ขนาดกลาง" เช่น monocyteseosinophils และ basophils (กลาง), - polymorphonuclearมี assayed leukocytes (PMNL, neutrophils) ในการเลือด นอกจากนี้ immunophenotyping ของอุปกรณ์ต่อพ่วงเลือด lymphocytes โดยนิพจน์ของ CD2 (ทีเซลล์ตรวจหา), CD4 (T helper เซลล์ตรวจหา), CD8 หรือ CD8a ในสัตว์ปีก (ตรวจหาเซลล์ T-cytotoxic/ตัว ป้องกันไฟเกิน), และ WC4พื้นผิว (วัว B-เซลล์ตรวจหา เฉพาะในวัว)ทำเครื่องหมาย Immunophenotyping ถูกประเมินโดยใช้เซลล์ไหล immunofluorescent(FCM) กับแอนตี้ monoclonal เฉพาะสปีชีส์(MCAs) ตระหนักถึงเลือดอุปกรณ์ต่อพ่วงพื้นฐานคลัสเตอร์ lymphocyte ของ antigens นำเสนอ (ซีดี)สอดคล้องกับ subpopulations เซลล์ appropiateวางขึ้นต้น immunofluorescent โดยตรงการวิเคราะห์เลือดต่อพ่วง lymphocyte subpopulationsทำตาม Beckman Coulterขั้นตอนคำแนะนำของผู้ประกอบการ ใช้ขั้นตอนเพิ่มเติมในกรณีต่อต้าน CD45 FITC กลวงและ RPE-Cy5 -ต่อต้าน-CDl4 กลวง MCAs ซึ่งเสิร์ฟ gating ของบริสุทธิ์อย่างเพียงพอแยกประชากร lymphocyte ที่วิเคราะห์ของนิพจน์เครื่องหมายผิวเหมาะโดยตรงจากเลือดทั้งหมดที่อ้างอิงบน OptiLyseImmunotech การเตรียมมาตรฐานขั้นตอน ห้าสิบmicrolitres ของเลือดทั้งหมดมี incubated ห้องอุณหภูมิสำหรับ 15 นาทีกับ fluorescein isothiocyanateconjugatedป้องกัน-CD45, 2, 4, 8 (8a) และ redphycoerythrin -cyanin MCAs 5.1 กลวงป้องกัน-CD14ที่แนะนำความเข้มข้น ย้อมสี ด้วยหลักเมาส์ bovine ป้องกัน WC4 MCA แอนติบอดีสองที่เกี่ยวข้องขั้นตอน เป็นแอนติบอดีที่ถูกไม่กลวงด้วยfluorochrome ใด ๆ และดังนั้น ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นเชื่อมด้วย immunoglobulin เมาส์ป้องกันกระต่าย 2 F (ab´)กลวงเพื่อ FITC (STAR9B SerotecUK/International) แล้ว μL 250 ของ lysing โซลูชั่น(OptiLyse C, Immunotech) ถูกเพิ่มเข้าไปในเลือดทั้งหมดตัวอย่าง และ incubated อีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกันหลังจากฟักตัวที่สอง เซลล์เม็ดเลือดได้แบ่งแยกห้องล้างด้วย PBS ประกอบด้วย 5%เซรั่มลูก foetal, supernatant ถูกปฏิเสธ และเซลล์มี resuspended ใน μL 500 ของ PBS กับลูก foetalซีรั่ม การระงับเซลล์ถูก analysed ขั้นตอนการใช้cytometer และขยายลอการิทึมEpics 4 XL กระแส Cytometer (Beckman Coulterบริษัท สหรัฐอเมริกา) กับ 15 MW อาร์กอนไอออน air-cooled เลเซอร์ให้แก้ไขปัญหาไฟที่ 488 nm ใช้ในการวิเคราะห์ กระจายแสงไปข้างหน้าประตูได้ตั้งค่าในการเศษส่วน lymphocyte การแยกเซลล์ที่ตายแล้วและเศษระบบกรองแสงที่ประกอบด้วย 525 nm

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเก็บตัวอย่างเลือดและการทดสอบ ตัวอย่างเลือดสำหรับการวิเคราะห์ของพารามิเตอร์ที่เลือกพัฒนาการตอบสนองของภูมิคุ้มกันในสัตว์การตรวจสอบถูกนำสองครั้งจากกลุ่มทดลองทั้งหมดของสัตว์ก่อน(0 หรือการพิจารณาคดี K0) และหลังการบริหารงานของฟีดจีเอ็ม เก็บตัวอย่างลงในหลอดที่มีเกลือ tripotassium ของกรด tetraacetic ethylenediamine (K3EDTA 0.07 mol / มิลลิลิตรของเลือด) และในหลอดที่มีเฮ(20 U / มิลลิลิตร). ทั้งหมดและจำนวนที่แตกต่างกันของเม็ดเลือดขาวเซลล์ (WBC) - รวม จำนวนของเซลล์เม็ดเลือดขาว (LYM) - จำนวนรวมของ "ขนาดกลาง" เซลล์เช่น monocytes, eosinophils และ basophils (MID) - polymorphonuclear เม็ดเลือดขาว (PMNL, นิวโทรฟิ) ถูก assayed ในเลือด นอกจากนี้ยังมีอุปกรณ์ต่อพ่วง immunophenotyping ของเซลล์เม็ดเลือดขาวในเลือดโดยการแสดงออกของCD2 (T เซลล์แอนติเจน) CD4 (แอนติเจนเซลล์ T-ผู้ช่วย) CD8 หรือ CD8a ในสัตว์ปีก(T-พิษ / สารต้านเซลล์) และ WC4 (วัว B- แอนติเจนเซลล์การตรวจสอบเฉพาะในวัว) พื้นผิวเครื่องหมายที่ได้ดำเนินการ immunophenotyping ถูกคำนวณโดยใช้วิธีcytometry ไหลพยาธิ(FCM) กับสายพันธุ์โคลนอลแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจง(MCAS) การตระหนักถึงเลือดพื้นฐานกลุ่มเม็ดเลือดขาวของแอนติเจนที่นำเสนอ(CD) ที่สอดคล้องกับประชากรเซลล์ที่เหมาะสม. พยาธิโดยตรงแตกต่างวิเคราะห์เลือดเม็ดเลือดขาวประชากรที่ได้ดำเนินการตามที่โคลเตอร์เบคค์-Operator คู่มือขั้นตอน ขั้นตอนเพิ่มเติมที่ใช้ในกรณีของ FITC-ผันต่อต้าน CD45 และ RPE-Cy5- ผันต่อต้าน CDl4 MCAS ซึ่งทำหน้าที่เป็น gating ของบริสุทธิ์แยกออกจากกันอย่างเพียงพอประชากรเม็ดเลือดขาว วิเคราะห์ของพื้นผิวที่เหมาะสมแสดงออกได้ทำเครื่องหมายโดยตรงจากเบสเลือดใน OptiLyse เตรียม Immunotech ขั้นตอนมาตรฐาน ห้าสิบmicrolitres เลือดทั้งหมดถูกบ่มที่ห้องอุณหภูมิ15 นาที fluorescein isothiocyanateconjugated ต่อต้าน CD45, 2, 4, 8 (8a) และ redphycoerythrin- cyanin 5.1 ผันต่อต้าน CD14 MCAS ที่ระดับความเข้มข้นที่แนะนำ การย้อมสีที่มีหลักเมาส์ต่อต้านวัวแอนติบอดี WC4 เอ็มที่เกี่ยวข้องกับสองขั้นตอนขั้นตอนที่เป็นแอนติบอดี้ที่ไม่ได้ผันกับfluorochrome ใด ๆ และดังนั้นจึงมีปฏิกิริยาตอบสนองครั้งที่สองกับF (ab') 2 กระต่ายอิมมูโนต่อต้านเมาส์ผันไปFITC (STAR9B Serotec , สหราชอาณาจักร / นานาชาติ) จากนั้น 250 ไมโครลิตรของการแก้ปัญหา lysing (OptiLyse ซี Immunotech) ถูกเพิ่มเข้าไปในเลือดตัวอย่างและบ่มอีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน. หลังจากการบ่มที่สองเซลล์เม็ดเลือดถูกแยกโดยการล้างคู่กับพีบีเอสที่มี 5% ซีรั่มน่องทารกในครรภ์ใสเป็น ทิ้งและเซลล์ถูกresuspended ใน 500 ไมโครลิตรของพีบีเอสกับลูกวัวซีรั่ม ระงับเซลล์ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้การไหลcytometer และเครื่องขยายเสียงลอการิทึม. มหากาพย์ 4 XL ไหล cytometer (Beckman Coulter บริษัท สหรัฐอเมริกา) 15 เมกะวัตต์ไอออนอาร์กอนเลเซอร์อากาศเย็นให้แสงที่ตกกระทบที่488 นาโนเมตรใช้สำหรับการวิเคราะห์ แสงไปข้างหน้าประตูกระจายที่ตั้งอยู่บนส่วนเม็ดเลือดขาวที่จะไม่รวมเซลล์ที่ตายแล้วและเศษ. ระบบกรองแสงประกอบด้วย 525 นาโนเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างเลือดและการทดสอบ ตัวอย่างเลือดเพื่อวิเคราะห์เลือกตัวแปร characterising

การตอบสนองทางภูมิคุ้มกันในสัตว์ถูกสอบสวน
สองครั้งจากกลุ่มทดลองทั้งหมดสัตว์ก่อน ( 0
หรือทดลอง k0 ) และหลังจากการบริหารงานของจีเอ็ม ฟีด
ตัวอย่างลงในหลอดที่มีเกลือไตรโพแทสเซียมของกรด tetraacetic ลลีนไดแอม

( k3edta 0.07 mol / มิลลิลิตรของเลือด )และเข้าไปในหลอดด้วย
เฮปาริน ( 20 U / ml ) .
รวมและอนุพันธ์จำนวนเซลล์เลือดขาว
( WBC ) - จำนวนของลิมโฟซัยท์ ( ลิ้ม ) -
จำนวน " ขนาด " กลางเซลล์ เช่น โมโนไซท
, การพิเคราะห์ และเบโซฟิล ( กลาง ) , - polymorphonuclear
เม็ดเลือดขาว ( pmnl นิวโทรฟิล ) ,
ซีรั่มในเลือด นอกจากนี้ immunophenotyping ของอุปกรณ์ต่อพ่วง
เลือดเม็ดเลือดขาว โดยการแสดงออกของ CD1 ( จาก
แอนติเจน ( antigen ) t-helper เซลล์ CD4 ) ในการศึกษา หรือ cd8a
สัตว์ปีก ( t-cytotoxic / เครื่องห้ามเซลล์แอนติเจน ) และ wc4
( วัว - แอนติเจน การตรวจสอบเฉพาะในโค ) เครื่องหมายผิว
กำหนด การ immunophenotyping ถูกประเมินโดยใช้การไหล (

immunofluorescent ( FCM ) กับชนิดโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจง
( mcas ) ตระหนักถึงพื้นฐาน
เลือด อุปกรณ์ต่อพ่วงโดยกลุ่มของนำเสนอแอนติเจน ( CD ) ที่สอดคล้องกับแต่ละเซลล์ที่เหมาะสม
.

immunofluorescent ความแตกต่างโดยการวิเคราะห์เม็ดเลือดขาว lymphocyte แต่ละ
ทําตามขั้นตอนคู่มือผู้ประกอบการของเบคแมน คูลเตอร์
. เพิ่มเติมขั้นตอนที่ใช้ในกรณี fitc conjugated
-
และเมื่อ rpe-cy5 anti-cdl4 mcas conjugated ,ซึ่งให้บริการสำหรับหลักการของ
บริสุทธิ์เพียงพอแยกออกโดยประชากร
วิเคราะห์เหมาะพื้นผิวเครื่องหมายแสดงออกทำ
โดยตรงจากเลือดทั้งหมดจาก optilyse
ขั้นตอนมาตรฐานการเตรียม immunotech . ห้าสิบ
microlitres เลือดทั้งหมดถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที isothiocyanateconjugated ี่

เมื่อ 2 , 4 , 8 ( 8A ) และ redphycoerythrin -
cyanin 5.1-conjugated anti-cd14 mcas
ที่ความเข้มข้นที่แนะนำ การย้อมด้วยเมาส์ wc4 MCA แอนติบอดีต่อต้านวัว

เกี่ยวข้องขั้นตอนสองขั้นตอนเป็นแอนติบอดีไม่ conjugated กับ
มีฟลู โรโครม และดังนั้น มันทำปฏิกิริยากับครั้งที่สอง
F ( ab ใหม่ ) 2 กระต่ายป้องกันเมาส์อิมมูโนโกลบูลิน
conjugated จะ fitc ( star9b serotec
, UK / นานาชาติ ) แล้ว 250 ลิตรต่อ
μ โซลูชั่น( optilyse C immunotech ) ถูกเพิ่มลงในตัวอย่างเลือด
และบ่มอีกภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน หลังจากบ่ม
2 )
แยกเซลล์เลือดโดยดับเบิลล้างด้วย pbs ที่มีถึง 5 %
เซรั่ม foetal ลูกวัว , น่านถูกทิ้ง และเซลล์
ถูก resuspended 500 μ L ของ PBS กับ foetal น่อง
เซรั่ม เซลล์แขวนลอยวิเคราะห์การไหล
ใช้โมโนและเครื่องขยายเสียงลอการิทึม
มหากาพย์ 4 การใช้โมโน XL ( Beckman Coulter
บริษัท , USA ) 15 เมกะวัตต์ ให้แสงเลเซอร์อาร์กอนไอออนด้วย
เหตุการณ์ที่ nm แล้วใช้
การวิเคราะห์ ส่งต่อแสงกระจายประตูถูกตั้งค่าบน
โดยส่วนรวมเซลล์ที่ตายแล้วและ debris .
แสงระบบกรองประกอบด้วย 525 นาโนเมตร