2. Experimental/materials and methods
2.1. Reagents and materials
FA was purchased from Sigma Aldrich (Deisenhofen, Germany).
Fivefold isotope-labeled FA (C13-FA) as internal reference substance (IS) was purchased from Merck&Cie (Schaffhausen, Switzerland).
The purity of the substance was 99.7% with an isotope- labeling exclusively on the glutamate part of the molecule.
Acetonitrile (HPLC grade), formic acid (99%) and sodium hydroxide were obtained from VWR (Darmstadt, Germany), 2-(cyclohexylamino) ethanesulfonic acid (CHES), 4-(2-hydroxyethyl) piperazine- 1-ethanesulfonic acid (HEPES) and dithiothreitol (DTT) were from Sigma Aldrich (Deisenhofen, Germany).
Analytical grade water was obtained from a LaboStar TM purification system, Siemens
(Munich, Germany).
Methanol was from Merck (Darmstadt, Germany). Phenex-PTFE syringe filters (15 mm, 0.2 lm) were obtained from Phenomenex (Aschaffenburg, Germany).
A HEPES/CHES buffer according to Wilson and Horne (Wilson & Horne, 1984) was used for diluting FA stock solutions and juice samples. Stock solutions of the FA standard and the IS (2 mg/ml) were prepared in an aqueous solution of NaOH (0.1 mol/l).
These solutions were diluted with HEPES/CHES buffer and stored in small portions at 80 C until use.
The working solution of the IS was 1 lg/ml, various concentration of the FA standard were prepared by appropriate dilution with the HEPES/CHES buffer
2 การทดลอง / วัสดุและวิธีการ
2.1 รีเอเจนต์และวัสดุที่
เอฟเอได้รับซื้อมาจากซิกม่าดิช (Deisenhofen, เยอรมนี)
Fivefold ไอโซโทปที่ติดฉลากเอฟเอ (C13-เอฟเอ) เป็นสารอ้างอิงภายใน (IS) ที่ซื้อมาจากเมอร์ & Cie (Schaffhausen วิตเซอร์แลนด์)
ที่มีความบริสุทธิ์ของสารที่เป็น 99.7% กับการติดฉลาก isotope- เฉพาะในส่วนที่กลูตาเมตของโมเลกุล
Acetonitrile (เกรด HPLC), กรดฟอร์มิ (99%) และโซเดียมไฮดรอกไซที่ได้รับจาก VWR (Darmstadt, เยอรมนี), 2 (Cyclohexylamino) กรด ethanesulfonic (CHES) 4 (2-hydroxyethyl) piperazine- กรด 1 ethanesulfonic (HEPES) และ dithiothreitol (DTT) มาจากซิกม่าดิช (Deisenhofen, เยอรมนี)
ระดับคุณภาพน้ำในการวิเคราะห์ที่ได้รับจากระบบฟอก LaboStar TM ซีเมนส์
(มิวนิค, เยอรมนี)
เมทานอลเป็นจากเมอร์ (Darmstadt, เยอรมนี) Phenex-PTFE กรองเข็มฉีดยา (15 มม, 0.2 ลูเมน) ที่ได้รับจาก Phenomenex (อาส, เยอรมนี)
HEPES / CHES buffer ตามที่วิลสันและฮอร์น (วิลสันและฮอร์น, 1984) ที่ใช้สำหรับการเจือจางเอฟเอโซลูชั่นหุ้นและตัวอย่างน้ำผลไม้ การแก้ปัญหาสต็อกสินค้าของเอฟเอได้มาตรฐานและเป็น (2 mg / ml) ได้จัดทำขึ้นสารละลายของ NaOH (0.1 โมล / ลิตร)
การแก้ปัญหาเหล่านี้ได้ถูกเจือจางด้วย HEPES / CHES buffer และเก็บไว้ในส่วนเล็ก ๆ ที่ 80 องศาเซลเซียสจน ใช้
วิธีการทำงานของเป็นที่ 1 LG / ml ความเข้มข้นที่แตกต่างกันของมาตรฐานเอฟเอได้รับการจัดทำขึ้นโดยการลดสัดส่วนที่เหมาะสมกับกันชน HEPES / CHES
การแปล กรุณารอสักครู่..
2 . วัสดุและวิธีการทดลอง /
3 . สารเคมีและวัสดุ
ฟ้าถูกซื้อจากซิกม่า Aldrich ( deisenhofen , เยอรมนี )
3 ไอโซโทปป้ายฟ้า ( c13-fa ) เป็นสารอ้างอิงภายใน ( ) คือซื้อจากเมอร์ค& CIE ( Schaffhausen สวิตเซอร์แลนด์ )
ความบริสุทธิ์ของสารที่เป็น 99.7% กับไอโซโทป - ฉลากเฉพาะในส่วนของผงชูรส
โมเลกุลไน ( เกรด 4 ) กรด ( 99% ) และโซเดียมไฮดรอกไซด์ความเข้มข้นอนาคีเมีย ( ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) , 2 - ( cyclohexylamino ) ethanesulfonic acid ( เชษฐ์ ) , 4 - ( 2-hydroxyethyl ) ปิเปอราซีน - 1-ethanesulfonic acid ( ฮีเปส ) และบัตรแข็ง ( DTT ) จากซิกม่า Aldrich ( deisenhofen , เยอรมัน )
น้ำเกรดวิเคราะห์ได้จาก labostar TM ระบบฟอกซีเมนส์
( มิวนิค , เยอรมัน )
เมทานอลจากเมอร์ค ( ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) ตัวกรองฟีเน็กซ์ ( 15 มม. เข็ม PTFE 0.2 LM ) ที่ได้รับจาก phenomenex ( Aschaffenburg , เยอรมนี ) : ฮีเปส / เชษฐ์ บัฟเฟอร์ตามวิลสัน ( Wilson &ฮอร์นและฮอร์น , 1984 ) ถูกใช้เพื่อเจือจางฟ้าหุ้นโซลูชั่นและตัวอย่างน้ำผลไม้ หุ้นโซลูชั่นมาตรฐานของฟ้าและ ( 2 mg / ml ) ถูกเตรียมไว้ในสารละลาย NaOH 0.1 mol / L )
โซลูชั่นเหล่านี้ถูกเจือจางด้วยฮีเปส / เชษฐ์ กันชน และเก็บไว้ในส่วนเล็ก ๆที่ 80 C จนใช้
โซลูชั่นการทำงานของเป็น 1 LG / ml ความเข้มข้นต่าง ๆของมาตรฐานเอฟเอเตรียมได้โดยการเจือจางที่เหมาะสมกับฮีเปส / เชษฐ์ กันชน
การแปล กรุณารอสักครู่..