2.4.2. Preparation and injection of

2.4.2. Preparation and injection of coffee extracts
The extraction protocol was based on the conditions previously
optimized by Rostagno et al. [24]. In short, 0.5 g of each coffee
sample were extracted with 15 ml of 50% methanol/water,
followed by 15 ml of 75% methanol/water, and finally with
15 ml of 100% methanol. Extraction was performed on a multifrequency
ultrasound bath [10,25,26], operating at 25 kHz for
20 min at 60 8C. After each extraction step, the sample is
centrifuged for 10 min at 10 8C and a velocity of 4000 rpm using
a universal centrifuge. The supernatant was collected and the solid
residue was subjected to the next extraction step. After the final
extraction, the supernatants were combined, and water was added
to obtain a final volume of 100 ml. 20 ml of the obtained extract
was filtered and injected into the HPLC apparatus. Analyses were
performed in triplicate.
2.4.3. HPLC gradient
A binary gradient elution (Table 1) was used. The mobile phase
was as follows: 1% phosphoric acid in water (solvent A) and 1%
phosphoric acid in acetonitrile (solvent B). The flow rate was
systematically controlled and set at 1 ml/min.
2.4.4. Analytical method validation
The limit of detection (LOD) was determined considering a
value three times the standard deviation of the background noise
obtained from blank samples (solvent; methanol), divided by the
slope of the calibration curve. The limit of quantification (LOQ) was
determined considering a value 10 times the standard deviation of
the background noise, obtained from noise samples divided by the
slope of the calibration curve. The limit of detection (LOD) ranged
from 0.75 to 14.79 mg/l, while the limit of quantification (LOQ)
ranged from 2.26 to 44.44 mg/l (Table 2a).
The recovery capacities of the method were assessed in
quadruplicate by spiking coffee extracts with three different
concentrations of pure standards (phenolic compounds and
caffeine) (0.5, 0.7 and 1.0 mg/100 g). The average recovery was
greater than 98% for all molecules (Table 2b).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4.2. Preparation and injection of coffee extractsThe extraction protocol was based on the conditions previouslyoptimized by Rostagno et al. [24]. In short, 0.5 g of each coffeesample were extracted with 15 ml of 50% methanol/water,followed by 15 ml of 75% methanol/water, and finally with15 ml of 100% methanol. Extraction was performed on a multifrequencyultrasound bath [10,25,26], operating at 25 kHz for20 min at 60 8C. After each extraction step, the sample iscentrifuged for 10 min at 10 8C and a velocity of 4000 rpm usinga universal centrifuge. The supernatant was collected and the solidresidue was subjected to the next extraction step. After the finalextraction, the supernatants were combined, and water was addedto obtain a final volume of 100 ml. 20 ml of the obtained extractwas filtered and injected into the HPLC apparatus. Analyses wereperformed in triplicate.2.4.3. HPLC gradientA binary gradient elution (Table 1) was used. The mobile phasewas as follows: 1% phosphoric acid in water (solvent A) and 1%phosphoric acid in acetonitrile (solvent B). The flow rate wassystematically controlled and set at 1 ml/min.2.4.4. Analytical method validationThe limit of detection (LOD) was determined considering avalue three times the standard deviation of the background noiseobtained from blank samples (solvent; methanol), divided by theslope of the calibration curve. The limit of quantification (LOQ) wasกำหนดพิจารณาค่า 10 ครั้งส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของเสียงพื้นหลัง ได้จากตัวอย่างเสียงหารความชันของเส้นโค้งการปรับเทียบ ขีดจำกัดของการตรวจสอบ (ลอด) อยู่ในช่วงจาก 0.75 ถึง 14.79 mg/l ในขณะที่จำนวนนับ (LOQ)อยู่ในช่วงจาก 2.26 การ 44.44 mg/l (ตาราง 2a)กำลังกู้คืนของวิธีการถูกประเมินในquadruplicate โดย spiking สารสกัดจากกาแฟกับ 3 แตกต่างกันความเข้มข้นมาตรฐานบริสุทธิ์ (ม่อฮ่อม และคาเฟอีน) (0.5, 0.7 และ 1.0 มิลลิกรัม/100 กรัม) ถ.เฉลี่ยค่ามากกว่า 98% สำหรับโมเลกุลทั้งหมด (ตารางที่ 2b)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4.2 การเตรียมและการฉีดสารสกัดจากกาแฟโพรโทคอสกัดก็ขึ้นอยู่กับเงื่อนไขที่ก่อนหน้านี้เพิ่มประสิทธิภาพโดยRostagno et al, [24] ในระยะสั้น 0.5 กรัมของกาแฟแต่ละตัวอย่างถูกสกัดด้วย15 มลเมทานอล 50% / น้ำตามด้วย15 มลเมทานอล 75% / น้ำและสุดท้ายกับ15 มลเมทานอล 100% การสกัดที่ได้ดำเนินการใน multifrequency อาบน้ำอัลตราซาวนด์ [10,25,26] การดำเนินงาน ณ วันที่ 25 เฮิร์ทซ์สำหรับ20 นาทีที่ 60 8C หลังจากขั้นตอนการสกัดแต่ละตัวอย่างจะถูกปั่นเป็นเวลา 10 นาทีที่ 10 8C และความเร็วของ 4000 รอบต่อนาทีใช้หมุนเหวี่ยงสากล สารละลายที่ถูกเก็บรวบรวมและของแข็งที่เหลือก็จะถูกขั้นตอนการสกัดต่อไป หลังจากรอบสุดท้ายสกัด supernatants ถูกรวมและน้ำถูกเพิ่มเข้ามาจะได้รับเล่มสุดท้าย100 มล. 20 มล. ของสารสกัดที่ได้ถูกกรองและฉีดเข้าไปในเครื่องHPLC ได้ วิเคราะห์ได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า. 2.4.3 ลาด HPLC ชะลาดไบนารี (ตารางที่ 1) ถูกนำมาใช้ เฟสเคลื่อนที่ได้ดังนี้กรดฟอสฟอรัส 1% ในน้ำ (ตัวทำละลาย A) และ 1% กรดฟอสฟอรัสใน acetonitrile (ตัวทำละลาย B) อัตราการไหลได้รับการควบคุมอย่างเป็นระบบและตั้งวันที่ 1 มล. / นาที. 2.4.4 การตรวจสอบวิธีการวิเคราะห์ขีด จำกัด ของการตรวจสอบ (LOD) ถูกกำหนดพิจารณาค่าสามเท่าของส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของเสียงพื้นหลังที่ได้รับจากกลุ่มตัวอย่างที่ว่างเปล่า(ตัวทำละลาย; เมทานอล) หารด้วยความลาดชันของเส้นโค้งการสอบเทียบ ขีด จำกัด ของปริมาณ (LOQ) ถูกกำหนดพิจารณาค่า10 ครั้งค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานของเสียงพื้นหลังที่ได้รับจากตัวอย่างเสียงแบ่งตามความลาดชันของเส้นโค้งการสอบเทียบ ขีด จำกัด ของการตรวจสอบ (LOD) ตั้งแต่0.75-14.79 มิลลิกรัม / ลิตรในขณะที่ขีด จำกัด ของปริมาณนี้ (LOQ) ตั้งแต่ 2.26-44.44 mg / l (ตารางที่ 2a). ความจุการฟื้นตัวของวิธีการที่ถูกประเมินในquadruplicate กาแฟองศา สารสกัดที่มีความแตกต่างกันสามระดับความเข้มข้นของมาตรฐานบริสุทธิ์(ฟีนอลและสารคาเฟอีน) (0.5, 0.7 และ 1.0 มก. / 100 กรัม) การฟื้นตัวเฉลี่ยมากกว่า 98% โมเลกุลทั้งหมด (ตารางที่ 2b)