Routes of avian influenza virus (AI

Routes of avian influenza virus (AIV) dispersal among aquatic birds involve direct (bird-to-bird) and
indirect (waterborne) transmission. The environmental persistence of H5N1 virus in natural water reservoirs
can be assessed by isolation of virus in embryonated chicken eggs. Here we describe development and
evaluation of a real-time quantitative reverse transcription (RT)-PCR (qRT-PCR) method for detection of
H5N1 AIV in environmental water. This method is based on adsorption of virus particles to formalin-fixed
erythrocytes, followed by qRT-PCR detection. The numbers of hemagglutinin RNA copies from H5N1 highly
pathogenic AIV particles adsorbed to erythrocytes detected correlated highly with the infectious doses of the
virus that were determined for three different types of artificially inoculated environmental water over a 17-day
incubation period. The advantages of this method include detection and quantification of infectious H5N1 AIVs
with a high level of sensitivity, a wide dynamic range, and reproducibility, as well as increased biosecurity. The
lowest concentration of H5N1 virus that could be reproducibly detected was 0.91 50% egg infective dose per ml.
In addition, a virus with high virion stability (Tobacco mosaic virus) was used as an internal control to
accurately monitor the efficiency of RNA purification, cDNA synthesis, and PCR amplification for each
individual sample. This detection system could be useful for rapid high-throughput monitoring for the
presence of H5N1 AIVs in environmental water and in studies designed to explore the viability and epidemiology
of these viruses in different waterfowl ecosystems. The proposed method may also be adapted for
detection of other AIVs and for assessment of their prevalence and distribution in environmental reservoirs.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เส้นทางของเชื้อไวรัสไข้หวัดนก (AIV) กระจายไปในหมู่นกน้ำเกี่ยวข้องโดยตรง (นกไปนก) และทางอ้อม
(น้ำ) การส่งผ่าน วิริยะสิ่งแวดล้อมของไวรัส H5N1 ในแหล่งน้ำธรรมชาติ
สามารถได้รับการประเมินโดยการแยกเชื้อไวรัสในไข่ไก่ embryonated ที่นี่เราจะอธิบายการพัฒนาและการ
การประเมินผลของเวลาจริงถอดความเชิงปริมาณย้อนกลับ (RT)-PCR (QRT-PCR) วิธีการตรวจหา
aiv H5N1 ในน้ำสิ่งแวดล้อม วิธีการนี​​้จะขึ้นอยู่กับการดูดซับของอนุภาคไวรัสที่เม็ดเลือดแดงฟอร์มาล​​ินคง
ตามด้วยการตรวจสอบ QRT-PCR ตัวเลขของสำเนา RNA hemagglutinin จาก H5N1 สูง
อนุภาคที่ทำให้เกิดโรค aiv ดูดซับการตรวจพบเม็ดเลือดแดงมีความสัมพันธ์อย่างมากกับปริมาณของเชื้อไวรัสที่
ได้รับการพิจารณาเป็นเวลาสามชนิดที่แตกต่างกันของน้ำสิ่งแวดล้อมเชื้อเทียมกว่า 17 วัน
ระยะฟักตัว ข้อดีของวิธีนี้รวมถึงการตรวจหาชนิดและปริมาณของเชื้อ H5N1 aivs
ที่มีระดับสูงของความไว, ช่วงความกว้างและการทำซ้ำเช่นเดียวกับความปลอดภัยทางชีวภาพที่เพิ่มขึ้น
ความเข้มข้นต่ำสุดของไวรัส H5N1 ที่สามารถตรวจพบ reproducibly เป็น 0.91% ไข่ 50 ปริมาณการติดเชื้อต่อมิลลิลิตร.
นอกจากนี้เชื้อไวรัสที่มีความมั่นคงสูง virion (ยาสูบไวรัสโมเสก) ถูกใช้เป็นระบบการควบคุมภายในที่จะ
ถูกต้องตรวจสอบประสิทธิภาพของ RNA บริสุทธิ์สังเคราะห์ยีนและการขยาย pcr สำหรับแต่ละ
ตัวอย่างบุคคลระบบการตรวจสอบนี้จะเป็นประโยชน์สำหรับการตรวจสอบการส่งผ่านสูงอย่างรวดเร็วสำหรับการแสดงตนของ
aivs H5N1 ในน้ำและสิ่งแวดล้อมในการศึกษาออกแบบมาเพื่อสำรวจศักยภาพและระบาดวิทยา
ของไวรัสเหล่านี้ในระบบนิเวศที่แตกต่างกันนก วิธีที่เสนออาจจะเหมาะสำหรับการตรวจสอบของ
aivs อื่น ๆ และสำหรับการประเมินความชุกและการกระจายของพวกเขาในอ่างเก็บน้ำสิ่งแวดล้อม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เส้นทางของ dispersal (AIV) ไวรัสไข้หวัดนกในนกน้ำเกี่ยวข้องโดยตรง (นกกับนก) และ
ส่งทางอ้อม (น้ำ) มีอยู่สิ่งแวดล้อมของไวรัส H5N1 ในอ่างเก็บน้ำธรรมชาติ
สามารถประเมิน โดยการแยกไวรัสในไข่ไก่ embryonated ที่นี่เราอธิบายพัฒนา และ
การประเมินความจริงเชิงปริมาณกลับ transcription (RT) -วิธี PCR (qRT-PCR) ตรวจ
AIV H5N1 ในน้ำสิ่งแวดล้อม วิธีการนี้จะขึ้นอยู่กับของอนุภาคไวรัสจะคง formalin
erythrocytes ตาม ด้วย qRT PCR ตรวจ หมายเลขของอาร์เอ็นเอ hemagglutinin คัดลอกจาก H5N1 สูง
อนุภาค AIV อุบัติ adsorbed การพบ erythrocytes correlated สูงกับปริมาณการติดเชื้อของการ
ไวรัสที่ถูกกำหนดสำหรับสะสมยอม inoculated น้ำสิ่งแวดล้อมกว่า 17 วัน
ระยะฟักตัว ข้อดีของวิธีนี้ได้แก่การตรวจจับและนับของติดเชื้อ H5N1 AIVs
ด้วยความไว wide dynamic range ระดับสูง และ reproducibility ตลอดจน biosecurity เพิ่มขึ้น
0.91 50% ไข่ infective ยาต่อมลมีความเข้มข้นต่ำสุดของไวรัส H5N1 ที่ reproducibly พบ
, ไวรัส มีเสถียรภาพสูง virion (ไวรัสโมเสกยาสูบ) ถูกใช้เป็นตัวควบคุมภายในเพื่อ
ถูกต้องตรวจสอบประสิทธิภาพของอาร์เอ็นเอทำให้บริสุทธิ์ การสังเคราะห์ cDNA และขยาย PCR สำหรับแต่ละ
แต่ละอย่าง ระบบตรวจสอบนี้อาจมีประโยชน์สำหรับการติดตามอัตราความเร็วสูงอย่างรวดเร็วสำหรับการ
ของ H5N1 AIVs ในน้ำสิ่งแวดล้อม และ ในการศึกษาเพื่อชีวิตและประชาชน
ของไวรัสเหล่านี้ในระบบนิเวศ waterfowl แตกต่างกันได้ วิธีการนำเสนออาจจะดัดแปลงสำหรับ
AIVs อื่น และ สำหรับการประเมินความชุกและกระจายในสิ่งแวดล้อมสามารถตรวจสอบได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เส้นทางที่มีโรคไข้หวัดนกโรคไข้หวัดใหญ่ฟุ้งกระจายไวรัส( aiv )อยู่ท่ามกลางนกสัตว์น้ำเกี่ยวข้องกับการส่งสัญญาณโดยตรง(นก - นก)และ
โดยอ้อม(บนผืนน้ำ) ยืนกรานทางด้านสิ่งแวดล้อมของไวรัส 5 N 1 ชั่วโมงในธรรมชาติน้ำอ่างเก็บน้ำ
สามารถได้รับการประเมินโดยแยกของไวรัสในไข่ไก่ embryonated ณที่นี่เราอธิบายถึงการพัฒนาและ
ตามมาตรฐานการประเมินผลแบบเรียลไทม์เชิงปริมาณย้อนกลับการถอดสคริปต์( RT ) - pcr ( QRT - pcr )เป็นวิธีการหนึ่งในการตรวจจับของ aiv
H 5 N 1 ในน้ำด้านสิ่งแวดล้อม. วิธีการนี้จะถูกใช้ใน adsorption ของ อนุภาค ไวรัสเพื่อฟอร์มาลิน - ถาวร
erythrocytes ตามด้วยการตรวจจับ QRT - pcr หมายเลขของสำเนา rna hemagglutinin จาก H 5 N 1
ตามมาตรฐานระดับสูงอนุภาค ขนาดเล็ก aiv pathogenic adsorbed เพื่อ erythrocytes ตรวจพบความสัมพันธ์เป็นอย่างสูงพร้อมด้วยปริมาณขยะติดเชื้อของ
ไวรัสที่มีไว้สำหรับสาม ประเภท ที่แตกต่างกันไปของน้ำสิ่งแวดล้อม inoculated ปลอมในช่วงระยะเวลา 17 วัน
ซึ่งจะช่วยให้ผู้ประกอบการ ข้อดีของวิธีการนี้รวมถึงจึงจำเป็นต้องมีและการตรวจจับ aivs H 5 N 1 โรคติดเชื้อ
พร้อมด้วยระดับความไวที่สูงช่วงไดนามิคที่หลากหลายและทำซ้ำเดิมและ biosecurity เพิ่มขึ้น.
ต่ำสุดที่ระดับความเข้มข้นของ H 5 N 1 ไวรัสที่สามารถตรวจพบ reproducibly เป็น 0.91 50% ไข่ infective ยาต่อมล..
ในนอกจากนี้ยังมีการที่ไวรัสด้วยสูง virion เสถียรภาพ (ยาโมซาอิคไวรัส)ได้เคยถูกใช้เป็นที่ ภายใน การควบคุมไปยัง
ซึ่งจะช่วยได้อย่างแม่นยำจอมอนิเตอร์ที่มี ประสิทธิภาพ ในการกรองน้ำของ rna , cdna การสังเคราะห์และ pcr ใช้การขยายเสียงสำหรับแต่ละบุคคลตัวอย่าง
ซึ่งจะช่วย.การตรวจสอบระบบนี้จะมีประโยชน์สำหรับอย่างรวดเร็วสูง - ความเร็วในการถ่ายโอนข้อมูลที่
ซึ่งจะช่วยให้การตรวจสอบของ H 5 N 1 aivs ในด้านสิ่งแวดล้อมและน้ำในการศึกษาได้รับการออกแบบเพื่อการสำรวจและความเป็นไปของเหล่านี้,
ไวรัสในนกน้ำระบบนิเวศ. วิธีการที่เสนออาจจะปรับให้เหมาะสำหรับการตรวจจับ aivs
อื่นๆและการประเมินผลการปฏิบัติงานของการกระจายและมีมากกว่าของพวกเขาในอ่างเก็บน้ำด้านสิ่งแวดล้อมยัง