To conduct our genetic analysis, wh

To conduct our genetic analysis, whole genomic DNA was extracted from fin clips preserved in 96% EtOH. DNA extraction was performed using QIAxtractor (QIAGEN, Crawley) according to manufacturer's protocols. A fragment of the mitochondrial DNA control region of Canthigaster was amplified with the primers CANT-CR-F and CANT-CR-R (Randall et al. 2008). PCR amplifications were performed on a Mastercycler® pro (Eppendorf) thermocycler, in a final 25 μl reaction containing: 2.5 μl of the buffer provided by the manufacturer (5 PRIME), 1.25 μl of MgCl2 (25 mM), 3 μl of dNTP (2 mM), 0.4 μl of each primer (l0 mM), 5 U Taq DNA polymerase (5 PRIME), 2.0 mM, and 1–3 μl of total genomic DNA. The thermocycle procedure (35 cycles) was a modified hot-start touchdown PCR, with an initial soak at 94 °C for 3 min, followed by 35 cycles at 94°C for 25s, 52°C for 25s and 72°C for 1 min. The final phase of the procedure was a 3-min elongation period at 72 °C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวิเคราะห์ทางพันธุกรรมของเรา ทั้ง genomic DNA ที่สกัดจากคลิปที่หูใน 96% EtOH สกัดดีเอ็นเอที่ดำเนินการโดยใช้ QIAxtractor (QIAGEN วิคครอวเลย์) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต ส่วนของ mitochondrial DNA ควบคุมภูมิภาคของ Canthigaster ถูกขยาย ด้วยไพรเมอร์ CANT CR F และ CANT-CR-R (Randall et al. 2008) PCR amplifications ได้ดำเนินการในการ Mastercycler ® pro (Eppendorf) thermocycler ในการ μl สุดท้าย 25 ปฏิกิริยาประกอบด้วย: μl 2.5 บัฟเฟอร์โดยผู้ผลิต (5 นายก), μl 1.25 ของ MgCl2 (25 mM), μl 3 ของ dNTP (มม. 2), μl 0.4 แต่ละพื้น (l0 mM), 5 U Taq DNA พอลิเมอเรส (5 นายก), 2.0 มม. และ μl 1 – 3 ของ genomic DNA รวม กระบวนการ thermocycle (35 รอบ) ถูกปรับเปลี่ยนเริ่มร้อนเหรียญ PCR ด้วยการแช่ต้นที่ 94 ° C สำหรับ 3 นาที ตาม ด้วยรอบ 35 ที่ 94° C สำหรับ 25s, 52° C สำหรับ 25s และ 72 ° C ใน 1 นาที ขั้นตอนสุดท้ายของกระบวนการมีระยะเวลา 3 นาที elongation ที่ 72 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อดำเนินการวิเคราะห์ทางพันธุกรรมของเราดีเอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากคลิปครีบเก็บรักษาไว้ในเอทานอล 96% สกัดดีเอ็นเอถูกดำเนินการโดยใช้ QIAxtractor (QIAGEN, Crawley) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต ส่วนของภูมิภาคควบคุมยลดีเอ็นเอของ Canthigaster ถูกขยายด้วยไพรเมอร์ลาดเท-CR-F และลาดเท-CR-R (Randall et al. 2008) การขยาย PCR ได้ดำเนินการเกี่ยวกับโปรMastercycler® (Eppendorf) เครื่อง thermocycler ในขั้นสุดท้ายปฏิกิริยา 25 ไมโครลิตรที่มี: 2.5 ไมโครลิตรของบัฟเฟอร์ที่มีให้โดยผู้ผลิต (5 PRIME) 1.25 ไมโครลิตรของ MgCl2 (25 มิลลิเมตร), 3 ไมโครลิตรของ dNTP ( 2 มิลลิเมตร) 0.4 ไมโครลิตรของแต่ละไพร (l0 มิลลิเมตร) 5 U Taq ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ (5 PRIME) 2.0 มิลลิและ 1-3 ไมโครลิตรของดีเอ็นเอทั้งหมด ขั้นตอน thermocycle (35 รอบ) เป็นทัชดาวน์เริ่มร้อนแก้ไข PCR กับการเริ่มต้นแช่ที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาทีตามด้วย 35 รอบที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 25s, 52 ° C เป็นเวลา 25s และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที ขั้นตอนสุดท้ายของขั้นตอนเป็นช่วงเวลาที่ยืดตัว 3 นาทีที่ 72 ° C

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อดำเนินการวิเคราะห์ทางพันธุกรรมของเรา ทั้งจีโนมดีเอ็นเอจากครีบคลิปดองแอลกอฮอล์ 96% . การสกัดดีเอ็นเอโดยใช้ qiaxtractor ( QIAGEN ครอวี ) ตามที่ผู้ผลิตของโปรโตคอล ส่วนของไมโตคอนเดรียลดีเอ็นเอของ canthigaster เป็นเขตควบคุมของไพรเมอร์และ cant-cr-f cant-cr-r ( Randall et al . 2008 )PCR amplifications แสดงบน mastercycler ® Pro ( เพนดอร์ฟ ) เทอร์มอไซเคล ์ในสุดท้าย 25 μ L ปฏิกิริยาที่มี : 2.5 μ L ของบัฟเฟอร์โดยผู้ผลิต ( 5 ท่าน ) , 1.25 ลิตรμไอโซโทป ( 25 มม. ) , 3 μ l dntp ( 2 มม. ) , 0.4 μ L แต่ละไพรเมอร์ ( l0 มม. ) 5 u แท็ค DNA polymerase ( 5 ท่าน ) , 2.0 มม. และ 1 – 3 μลิตรรวมจีโนมดีเอ็นเอขั้นตอน thermocycle ( 3 รอบ ) เป็นการดัดแปลงจาเริ่มลงตรวจกับแช่เริ่มต้นที่ 94 ° C เป็นเวลา 3 นาที ตามด้วย 35 รอบ 94 ° C ที่ 25s , 52 ° C 25s และ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที ขั้นตอนสุดท้ายของกระบวนการเป็น 3-min ยืดระยะเวลา 72 เมตร C .