cDNA was synthesized from 0.5 lg ex

cDNA was synthesized from 0.5 lg extracted DNA-free RNA with
M-MLV reverse transcriptase (Promega) and random hexamer.
cDNA (2 ll) was then quantified with QuantiFast SYBR Green PCR
kits (Qiagen) in an ABI7300 real time PCR system. Serial 10-fold dilution
of sRAGE (WT) or sRAGE(OP) plasmid from 101 to 105 ng/ml
were used as templates to establish a standard curve to calculate
the half-life of mRNA, as described [30]. Primers sequence specific
to sRAGE(WT) are: forward: 50-AGCCACTGGTGCTGAAGTGT-30 ,
reverse: 50-GAATCTGGTAGACACGGACTC-30; primers sequence specific
to sRAGE(OP) are: forward: 50- CCGAGTTCATGGCCTCTATG-30 ,
reverse: 50-GAGGACTCAGCACCTTCCAG-30 .

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีสังเคราะห์ cDNA จาก lg แยกอิสระดีเอ็นเออาร์เอ็นเอด้วย 0.5
transcriptase กลับ M MLV (Promega) และ hexamer สุ่ม
cDNA (2 จะ) quantified ถูกแล้วกับ QuantiFast SYBR Green PCR
ชุด (Qiagen) ใน ABI7300 เวลาจริงระบบ PCR เจือจางประจำ 10-fold
sRAGE (WT) หรือ sRAGE(OP) plasmid 10 1 10 5 ng/ml
ใช้เป็นแม่แบบในการสร้างเส้นโค้งมาตรฐานเพื่อคำนวณ
half-life ของ mRNA อธิบาย [30] ไพรเมอร์ลำดับเฉพาะ
sRAGE(WT) มี: ไปข้างหน้า: 50-AGCCACTGGTGCTGAAGTGT-30,
ย้อน: 50-GAATCTGGTAGACACGGACTC-30 ไพรเมอร์ลำดับเฉพาะ
sRAGE(OP) มี: ไปข้างหน้า: 50-CCGAGTTCATGGCCTCTATG-30,
ย้อน: 50-GAGGACTCAGCACCTTCCAG-30

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

cDNA ที่ถูกสังเคราะห์จากแอลจี 0.5 สกัดดีเอ็นเออาร์เอ็นเอฟรีกับ
M-MLV transcriptase ย้อนกลับ (Promega) และ hexamer สุ่ม
ยีน (2 LL) เป็นวัดแล้วกับ QuantiFast SYBR เขียว PCR
ชุด (Qiagen) ใน ABI7300 เวลาจริงระบบ PCR อนุกรมการเจือจาง 10 เท่า
ของ sRAGE (WT) หรือ sRAGE (OP) พลาสมิดจาก 10? 1 ถึง 10? 5 ng / ml
ถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบในการสร้างกราฟมาตรฐานในการคำนวณ
ครึ่งชีวิตของ mRNA ตามที่อธิบายไว้ [30] . ไพรเมอร์ลำดับที่เฉพาะเจาะจง
ที่จะ sRAGE (WT) มีดังนี้: ไปข้างหน้า: 50 AGCCACTGGTGCTGAAGTGT-30,
ย้อนกลับ: 50 GAATCTGGTAGACACGGACTC-30; ไพรเมอร์ลำดับที่เฉพาะเจาะจง
ที่จะ sRAGE (OP) มีดังนี้: ไปข้างหน้า: 50 - CCGAGTTCATGGCCTCTATG-30,
ย้อนกลับ: 50 GAGGACTCAGCACCTTCCAG-30

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ยีนสังเคราะห์จากสารสกัด DNA RNA 0.5 LG ฟรีด้วย
m-mlv reverse transcriptase ( promega ) และสุ่มเฮกเซอเมอร์ .
cDNA ( จะ ) เป็นวัดที่มี quantifast SYBR กรีน PCR
ชุด ( เพิ่ม ) ใน abi7300 เวลาจริงโดยระบบ หมายเลข 10 เท่าของเดิม
srage ( WT ) หรือ srage ( OP ) พลาสมิดจาก 10  1 ถึง 10  5 ng / ml
ถูกใช้เป็นแม่แบบในการสร้างกราฟมาตรฐาน คำนวณ
ครึ่งชีวิตของ mRNA ตามที่อธิบายไว้ [ 30 ] ดีเอ็นเอลำดับเฉพาะ
เพื่อ srage ( WT ) : ส่งต่อ : 50-agccactggtgctgaagtgt-30
: 50-gaatctggtagacacggactc-30 ; ไพรเมอร์ , ย้อนกลับลำดับเฉพาะ
เพื่อ srage ( OP ) : ส่งต่อ : 50 - ccgagttcatggcctctatg-30
: 50-gaggactcagcaccttccag-30 , ย้อนกลับ .