Enrichment culture for host and virus isolation—Samples collected
either in anaerobic tubes or filled centrifuge tubes are
diluted 1:50 or 1:100 in Sulfolobus growth medium (Zillig et al.
1994) containing either yeast extract (0.1% w/v) and sucrose
(0.2% w/v) as carbon sources or Tryptone (0.2% w/v) in longnecked
Erlenmeyer flasks (see Fig. 1B inset), and incubated at
80°C with shaking (150 rpm) for up to 2 weeks. The salts in
Sulfolobus growth medium are, per liter: 3 g (NH4)2SO4, 0.5 g
K2HPO4 × 3 H2O, 0.1 g KCl, 0.5 g MgSO4 × 7 H2O, 0.01 g
Ca(NO3)2 × 4 H2O, 1.8 mg MnCl2 × 4 H2O, 4.5 mg Na2B4O7 ×
10 H2O, 0.22 mg ZnSO4 × 7 H2O, 0.05 mg CuCl2 × 2 H2O, 0.03
mg Na2MoO4 × 2 H2O, 0.03 mg VOSO4 × 5 H2O, 0.01 mg
CoSO4 × 7 H2O. The medium was buffered with 0.7 g glycine
per liter and the pH was adjusted to pH 3–3.5 with 1:2 diluted
sulfuric acid. For long-term 80°C growth, our favorite bath liquid
is PEG 400, which is a noncorrosive, nontoxic, water soluble
compound that does not evaporate (see Fig. 1B); mineral
oil and water can be used as bath liquid but are suboptimal
due to cleanup and evaporation, respectively. When growth is
detected by either an increase in turbidity or production of a
characteristic “damp sock” odor (W. Zillig pers. comm.), samples
are plated on Gelrite® plates (see below and Fig. lC), rediluted
1:50, and screened for VLP production by a spot-onlawn
assay (see below and Fig. 1D) or electron microscopy (see
below and Fig. 2). The second round of enrichment culture is
also plated and screened for virus production.
วัฒนธรรมที่โดดเด่นสำหรับแยกโฮสต์และไวรัสซึ่งรวบรวมตัวอย่างในหลอดที่ไม่ใช้ออกซิเจนหรือเครื่องหมุนเหวี่ยงเต็มหลอดอยู่แตกออก 1:50 หรือ 1: 100 ใน Sulfolobus เชื้อ (Zillig et al1994) ประกอบด้วยทั้งยีสต์สกัด (0.1% w/v) และซูโครส(0.2% w/v) เป็นแหล่งคาร์บอนหรือ Tryptone (0.2% w/v) ใน longneckedนำ Erlenmeyer (ดูแทรก 1B Fig.), และ incubated ที่80° C มีสั่น (150 รอบต่อนาที) ถึง 2 สัปดาห์ เกลือในเชื้อ Sulfolobus ได้ ต่อลิตร: 3 g (NH4) 2SO4, 0.5 gK2HPO4 × 3 H2O, KCl 0.1 g, 0.5 g MgSO4 × 7 H2O, 0.01 gCa (NO3) 2 × 4 H2O, H2O 1.8 มิลลิกรัม MnCl2 × 4, 4.5 มิลลิกรัม Na2B4O7 ×10 H2O, 0.22 มิลลิกรัม ZnSO4 × 7 H2O, H2O × 2 0.05 มิลลิกรัม CuCl2, 0.03มิลลิกรัม H2O Na2MoO4 × 2, 0.03 mg VOSO4 × 5 H2O, 0.01 มิลลิกรัมเอชทูโอ× 7 CoSO4 สื่อถูก buffered กับ glycine 0.7 gต่อลิตรและ pH มีปรับค่า pH 3-3.5 1:2 ผสมกรดซัลฟิวริก สำหรับการเติบโตระยะยาว 80° C น้ำยาอาบน้ำโปรดของเราตรึง 400, noncorrosive พิษทั้ง น้ำละลายน้ำซึ่งเป็นสารประกอบที่ไม่ระเหย (ดู Fig. 1B); แร่น้ำและน้ำมันสามารถใช้เป็นน้ำเหลว แต่มีสภาพล้างและระเหย ตามลำดับ เมื่อมีการเจริญเติบโตตรวจพบ โดยการเพิ่มความขุ่นหรือผลิตเป็นกลิ่นลักษณะ "ชื้นถุงเท้า" (Zillig ตะวันตกอาทิสื่อ) ตัวอย่างชุบบน Gelrite ®แผ่น (ดูด้านล่างและ Fig. lC), rediluted1:50 และฉาย VLP ผลิต โดยจุด-onlawnทดสอบ (ดูด้านล่างและ Fig. 1D) หรืออิเล็กตรอน microscopy (ดูด้านล่าง และ Fig. 2) รอบสองของวัฒนธรรมโดดเด่นเป็นนอกจากนี้ไวรัสชุบ และตรวจสอบการผลิต
การแปล กรุณารอสักครู่..
วัฒนธรรมการตกแต่งสำหรับโฮสต์และไวรัสที่แยกเก็บตัวอย่าง
ทั้งในหลอดแบบไม่ใช้ออกซิเจนหรือเต็มไปด้วยหลอด centrifuge จะ
เจือจาง 1:50 หรือ 1: 100 ในสื่อการเจริญเติบโต Sulfolobus (. Zillig et al,
1994) ที่มีทั้งสารสกัดจากยีสต์ (0.1% w / v) และ น้ำตาลซูโครส
(0.2% w / v) เป็นแหล่งคาร์บอนหรือ Tryptone (0.2% w / v) ใน longnecked
ขวดรูปกรวย (ดูรูป. 1B ภาพประกอบ) และบ่มที่อุณหภูมิ
80 องศาเซลเซียสเขย่า (150 รอบต่อนาที) ถึง 2 สัปดาห์ เกลือใน
สื่อการเจริญเติบโต Sulfolobus มีต่อลิตร: 3 กรัม (NH4) 2SO4, 0.5 กรัม
K2HPO4 × 3 H2O, 0.1 กรัมโพแทสเซียมคลอไรด์, 0.5 กรัม MgSO4 × 7 H2O, 0.01 กรัม
Ca (NO3) 2 × 4 H2O, 1.8 มิลลิกรัม MnCl2 × 4 H2O, 4.5 มิลลิกรัม Na2B4O7 ×
10 H2O, 0.22 มิลลิกรัม ZnSO4 × 7 H2O, 0.05 มิลลิกรัม CuCl2 × 2 H2O, 0.03
มิลลิกรัม Na2MoO4 × 2 H2O, 0.03 มิลลิกรัม VOSO4 × 5 H2O, 0.01 มิลลิกรัม
CoSO4 × 7 H2O กลางถูกเป็นกลางกับ 0.7 กรัม Glycine
ต่อลิตรและค่า pH ที่ถูกปรับค่า pH 3-3.5 1: 2 เจือจาง
กรดซัลฟูริก สำหรับในระยะยาว 80 ° C การเจริญเติบโตเหลวอาบน้ำของเราที่ชื่นชอบ
เป็น PEG 400 ซึ่งเป็นสนิม, ปลอดสารพิษ, ที่ละลายน้ำได้
สารที่ไม่ระเหย (ดูรูปที่ 1B.); แร่
น้ำมันและน้ำที่สามารถใช้เป็นน้ำยาอาบน้ำ แต่ไม่ก่อให้เกิดผลลัพธ์
อันเนื่องมาจากการทำความสะอาดและการระเหยตามลำดับ เมื่อเจริญเติบโตเป็นที่
ตรวจพบโดยการเพิ่มขึ้นของความขุ่นหรือการผลิต
ลักษณะ "ถุงเท้าชื้น" กลิ่น (ดับบลิว Zillig ข่าวสาร. COMM.) ตัวอย่าง
เป็นชุบบนจานGelrite® (ดูด้านล่างและรูป. lc), ความ rediluted
01:50 และคัดกรองสำหรับการผลิต VLP โดยจุด onlawn
ทดสอบ (ดูด้านล่างและรูป. 1D) หรือกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (ดู
ด้านล่างและรูป. 2) รอบที่สองของวัฒนธรรมการตกแต่งจะ
ยังชุบและคัดกรองหาการผลิตไวรัส
การแปล กรุณารอสักครู่..
วัฒนธรรมและการโฮสต์ไวรัสที่แยกการเก็บตัวอย่างทั้งในท่ออากาศ หรือเติม
ขายขาดจะเจือจาง 1 : 50 หรือ 100 ในอาหารเลี้ยงเชื้อ sulfolobus ( zillig et al .
1994 ) ที่มีทั้งยีสต์สกัด 0.1 % w / v ) และซูโครส
( 0.2% w / v ) เป็นแหล่งคาร์บอน หรือ ทริพโทน ( 0.2 % w / v ) ใน longnecked
เออร์เลนเมเยอร์ flasks ( ดูภาพประกอบภาพประกอบ 1B ) และอุณหภูมิ
80 ° C ( 150 รอบต่อนาที ) เขย่า นานถึง 2 สัปดาห์ เกลือใน
อาหารเลี้ยงเชื้อ sulfolobus , ต่อลิตร : 3 g ( NH4 ) 2so4 0.5 g
k2hpo4 × 3 H2O , ปริมาณ 0.1 กรัม 0.5 กรัม MgSO4 ใ× 7 H2O , 0.01 g
CA ( 3 ) 2 × 4 × 4 1.8 มิลลิกรัม mncl2 h2o , h2o , 4.5 มิลลิกรัม na2b4o7 × 10
H2O 0.22 มิลลิกรัม znso4 × 7 h2o , h2o 0.05 มก. cucl2 × 2 × 2 0.03 มิลลิกรัม na2moo4
H2O , 0.03 มิลลิกรัม voso4 × 5 H2O , 0.01 มิลลิกรัม
coso4 × 7 h2o กลางคือ 2 กับ 07 กรัมต่อลิตรและ pH ไกลซีน
ปรับ pH 3 – 3.5 กับเจือจาง 1 : 2
กรดกำมะถัน สำหรับในระยะยาว 80 ° C ต่อนํ้าโปรด
ของเราเป็นของเหลว PEG 400 ซึ่งได้ ไม่เป็นสนิม , ปลอดสารพิษ , สารประกอบที่ไม่ละลายน้ำ
ระเหย ( ดูรูปที่ 1B ) ; น้ำมัน
และน้ำ สามารถใช้น้ำอาบ แต่ suboptimal
เนื่องจากการทำความสะอาดและแห้ง ตามลำดับ เมื่อการเจริญเติบโต
ตรวจพบ โดยให้เพิ่มความขุ่นหรือการผลิตของ
ลักษณะ " เปียกถุงเท้า " กลิ่น ( W . zillig ได้ที่ . Comm . ) ตัวอย่าง
ชุบบน gelrite ®แผ่น ( ดูด้านล่างและมะเดื่อ LC ) , rediluted
1 : 50 และเพิ่มการผลิต vlp โดยจุด onlawn
assay ( ดูด้านล่างและมะเดื่อ 1D ) หรือกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ( ดู
ด้านล่างและรูปที่ 2 ) รอบที่สองของการเป็น
วัฒนธรรมยังชุบและเพิ่มการผลิตไวรัส
การแปล กรุณารอสักครู่..