The binary vector used to produce 3

The binary vector used to produce 35S::D-LDH lines contained both CaMV35S::D-LDH and pNos::nptI, thereby allowing the comparative selection of a similar amount of T1 seeds on d-lactate or kanamycin (Fig. 4). RT-PCR analyses confirmed that the selected plants indeed harbored and expressed the transgenes (not shown). Using 10 mM d-lactate or 50 mg/l kanamycin, the transformation frequencies obtained 8 days after imbibition were 1% (total seeds plated: 1900; resistant individuals: 20) and 1.7% (total seeds plated: 1953; resistant individuals: 33), respectively. Furthermore, the difference in growth rate between transgenic and non-transgenic plants on plates containing d-lactate is sufficiently large to easily detect transformants by visual inspection (Fig. 4). This demonstrates that the selection of transformants grown on d-lactate, although resulting in a lower number of individuals compared to kanamycin, was highly stringent and as rapid as the selection on kanamycin. Moreover, when these plants were transferred to greenhouse conditions they showed no obvious phenotypic differences compared to wild-type plants (not shown), indicating that d-LDH overexpression did not affect further plant development. Finally, the effect of d-lactate and its physiological precursor MG on the growth of other species like tomato and tobacco was tested. As shown in Fig. 5, both compounds are also toxic for these species, indicating the potential use of d-lactate as a selection marker for plants of agricultural interest. Some conditional-positive selection systems are more effective in certain species and regeneration systems than others, e.g., kanamycin has lower selection efficiency in cereals than in dicots. However, very small differences in fitness that may be trivial under laboratory conditions can have significant effects on the total yield of a crop under field conditions. Thus, it remains to be tested whether overexpressing d-LDH might have any effects on crop yield.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เวกเตอร์แบบไบนารีที่ใช้ในการผลิต 35S::D-LDH บรรทัดอยู่ CaMV35S::D LDH และ pNos::nptI ซึ่งการเลือกเปรียบเทียบเมล็ด T1 จำนวนคล้ายแลคเตท d หรือกานามัยซิน (4 รูป) RT-PCR วิเคราะห์ยืนยันว่า พืชเลือกแน่นอน harbored และ transgenes (ไม่แสดง) โดยแสดง ใช้ 10 มม. d แลคเตทหรือกานามัยซิน 50 mg/l ความถี่ที่เปลี่ยนแปลงได้ 8 วันหลังจากที่ imbibition 1% (รวมเมล็ดชุบ: 1900 ทนบุคคล: 20) และ 1.7% (รวมเมล็ดชุบ: 1953 ทนบุคคล: 33), ตามลำดับ นอกจากนี้ ความแตกต่างในอัตราการเติบโตระหว่างพืชจำลอง และไม่จำลองบนแผ่นที่ประกอบด้วยแลคเตท d มีขนาดใหญ่เพียงพอที่สามารถตรวจจับ transformants โดยการตรวจสอบ (4 รูป) นี้อธิบายว่า การเลือกปลูกบน d-แลคเตท แม้ว่าในตัวเลขล่างของบุคคลเมื่อเปรียบเทียบกับกานามัยซิน transformants เป็นเข้มงวดสูง และเร็วเป็นการเลือกในกานามัยซิน นอกจากนี้ เมื่อพืชเหล่านี้ถูกย้ายไปสภาพเรือนกระจก จะพบไม่ชัดไทป์แตกต่างจากพืชชนิดป่า (ไม่แสดง), ระบุ overexpression d LDH ที่ไม่มีผลต่อการพัฒนาโรงงาน ในที่สุด ถูกทดสอบผลของแลคเตท d และปูชนียบุคคลทางสรีรวิทยาของ MG การเจริญเติบโตของสายพันธุ์อื่น ๆ ที่เช่นมะเขือเทศและยาสูบ ดังแสดงในรูปที่ 5 สารประกอบทั้งสองก็เป็นพิษสำหรับพันธุ์นี้ ระบุการใช้แลคเตท d อาจเป็นเครื่องหมายที่เลือกสำหรับพืชเกษตรสนใจ บางระบบมีเงื่อนไขบวกเลือกมีประสิทธิภาพมากขึ้นในบางสายพันธุ์และฟื้นฟูระบบอื่น ๆ เช่น กานามัยซินมีประสิทธิภาพเลือกต่ำธัญพืชกว่าใน dicots อย่างไรก็ตาม ความแตกต่างเล็ก ๆ ในออกกำลังกายที่อาจจะเล็ก ๆ น้อย ๆ ภายใต้สภาพห้องปฏิบัติการสามารถมีผลผลผลิตรวมของพืชภายใต้ฟิลด์เงื่อนไขสำคัญ ดังนั้น มันยังคงต้องการจะทดสอบว่า overexpressing d-LDH อาจมีผลใด ๆ ในผลผลิตพืช

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เวกเตอร์ไบนารีใช้ในการผลิต 35S :: สาย D-LDH มีทั้ง CaMV35S :: D-LDH และ pNos :: NPTI จึงทำให้การเลือกเปรียบเทียบจำนวนที่คล้ายกันของเมล็ด T1 D-น้ำนมหรือกานามัยซิ (รูปที่. 4) . RT-PCR วิเคราะห์ยืนยันว่าพืชที่เลือกเก็บงำความจริงและแสดงความ transgenes นี้ (ไม่แสดง) โดยใช้ขนาด 10 MM D-แลคเตทหรือ 50 mg / l กานามัยซิความถี่การเปลี่ยนแปลงที่ได้รับ 8 วันหลังจากที่ดูดเป็น 1% (เมล็ดรวมชุบ 1900; บุคคลทน: 20) และ 1.7% (เมล็ดรวมชุบ: 1953; บุคคลทน: 33 ) ตามลำดับ นอกจากนี้ความแตกต่างในอัตราการเจริญเติบโตระหว่างพืชดัดแปรพันธุกรรมและไม่ดัดแปรพันธุกรรมบนจานที่มี D-แลคเตทที่มีขนาดใหญ่พอที่จะตรวจสอบได้อย่างง่ายดาย transformants โดยการตรวจสอบภาพ (รูปที่. 4) นี้แสดงให้เห็นว่าการเลือก transformants ที่ปลูกใน D-แลคเตทแม้จะส่งผลให้ในจำนวนที่ต่ำกว่าของบุคคลเมื่อเทียบกับกานามัยซิเป็นอย่างมากที่เข้มงวดและเป็นอย่างรวดเร็วเป็นตัวเลือกในกานามัยซิ นอกจากนี้เมื่อพืชเหล่านี้ถูกโอนไปยังสภาพเรือนกระจกที่พวกเขาแสดงให้เห็นว่าไม่มีความแตกต่างที่เห็นได้ชัดฟีโนไทป์เมื่อเทียบกับพืชชนิดป่า (ไม่แสดง) แสดงให้เห็นว่า D-LDH แสดงออกไม่ได้ส่งผลกระทบต่อการพัฒนาของพืชต่อไป สุดท้ายผลของ D-น้ำนมและปูชนียบุคคลทางสรีรวิทยา MG ต่อการเจริญเติบโตของสายพันธุ์อื่น ๆ เช่นมะเขือเทศและยาสูบได้รับการทดสอบ ดังแสดงในรูป 5 สารทั้งสองนี้ยังเป็นพิษต่อสายพันธุ์เหล่านี้แสดงให้เห็นการใช้ศักยภาพของ D-แลคเตทเป็นเครื่องหมายเลือกสำหรับพืชทางการเกษตรที่น่าสนใจ บางเงื่อนไขบวกระบบเลือกมีประสิทธิภาพมากขึ้นในรูปแบบและระบบการฟื้นฟูกว่าคนอื่น ๆ บางอย่างเช่นกานามัยซิมีประสิทธิภาพที่ต่ำกว่าในการเลือกธัญพืชกว่าใน dicots อย่างไรก็ตามความแตกต่างที่มีขนาดเล็กมากในการออกกำลังกายที่อาจจะเล็กน้อยภายใต้เงื่อนไขการทดลองสามารถมีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญในผลผลิตรวมของพืชภายใต้สภาพสนาม ดังนั้นจึงยังคงที่จะทดสอบว่า overexpressing D-LDH อาจมีผลกระทบต่อผลผลิตพืช

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เวกเตอร์ฟรีเกี่ยวกับไบนารีที่ใช้ผลิต 35s : : d-ldh เส้นที่มีอยู่ทั้ง camv35s : : d-ldh และ pnos : : npti จึงทำให้การเปรียบเทียบจำนวนที่คล้ายกันของเมล็ดใน d-lactate T1 หรือทั้งสอง ( รูปที่ 4 ) วิธีวิเคราะห์ยืนยันว่าเลือกพืชแน่นอนยอมรับและแสดง transgenes ( ไม่แสดง ) ใช้ 10 มม. d-lactate หรือ 50 mg / l น การแปลงความถี่ได้ 8 วัน หลังจากการดูด 1 % ( เมล็ดรวมชุบ : 1900 ; บุคคล : ทน 20 ) และ 1.7% ( เมล็ดรวมชุบ : 2496 ; บุคคล : ทน 33 ) ตามลำดับ นอกจากนี้ ความแตกต่างในอัตราการเติบโตระหว่างพันธุกรรมและไม่ใช่พืชพันธุกรรมในจานที่มี d-lactate มีขนาดใหญ่พอเพื่อสามารถตรวจสอบ transformants โดยการตรวจสอบภาพ ( ภาพที่ 4 ) นี้แสดงให้เห็นว่าการเลือกของ transformants ที่ปลูกใน d-lactate แม้ว่าผลในการลดตัวเลขของแต่ละบุคคลเมื่อเทียบกับ kanamycin มีการเข้มงวดและเป็นอย่างรวดเร็วในขณะที่การเลือกทั้งสอง นอกจากนี้ เมื่อพืชเหล่านี้ได้ถูกโอนไปยังเรือนกระจกเงื่อนไขที่พวกเขาพบว่าไม่มีความแตกต่างชัดเจนเมื่อเทียบกับคุณสมบัติของพืช ( ไม่แสดง ) แสดงว่า d-ldh overexpression ไม่มีผลต่อการพัฒนาพืชต่อไป ในที่สุด ผลของ d-lactate Mg สารตั้งต้นของสรีรวิทยาต่อการเจริญเติบโตของชนิดอื่น ๆ เช่น มะเขือเทศ ยาสูบ คือ ทดสอบ ดังแสดงในรูปที่ 5 ทั้งสารที่ยังเป็นพิษชนิดเหล่านี้แสดงศักยภาพของ d-lactate เป็นเครื่องหมายสำหรับการเลือกพืชที่สนใจการเกษตร บางเงื่อนไขบวกระบบมีประสิทธิภาพมากขึ้นในการเลือกชนิดบาง และการฟื้นฟูระบบมากกว่าคนอื่น เช่น อาณาจักรมอญได้ลดประสิทธิภาพในการเลือกธัญพืชมากกว่าเป็น . อย่างไรก็ตาม ขนาดเล็กมาก ความแตกต่างในฟิตเนสอาจจะเล็กน้อยภายใต้สภาวะห้องปฏิบัติการสามารถมีความสัมพันธ์กับผลผลิตรวมของพืชภายใต้สภาพสนาม ดังนั้น จึงยังคงต้องทดสอบว่า overexpressing d-ldh อาจไม่มีผลกระทบต่อผลผลิตของพืช