Manitoba, Winnipeg, Canada in 2011.

Manitoba, Winnipeg, Canada in 2011. For the identification of homozygous
plants, leaf tissue samples from each BnFUS3 TILLING
mutant lines were flash frozen in liquid nitrogen and stored
at
80 C. Genomic DNA was extracted from each of the sampled
tissues using the cetyltrimethylammonium bromide (CTAB)
method (Keb-Llanes et al., 2002). The DNA was suspended in
50 ml TE buffer and its concentration was determined by a Nano
Drop spectrophotometer. Samples were adjusted to a final concentration
of 150 ng/ml H2O. Genomic DNA samples were then
amplified using primers bn36-4R and bn36-5L (Supplementary
Table 1). The PCR products were purified using the QIAquick PCR
Purification kit (Qiagen Gm bH, Hilden, Germany) and sequence
analysis was conducted by Macrogen USA. The homozygous mutations
were detected with the primer, bn36-4R for the M1 and M3
lines and bn36-2R for the M2 line. On the basis of the sequence
analysis, the homozygous mutant plants were selected and grown
in separate pots and covered with selfing bags to prevent crosspollination.
Nucleotide sequences were translated into amino acid
sequences using the ExPASy Proteomics Server (http://expasy.org/
tools/dna.html). The conserved domains and structure of the gene
were identified using the NCBI (The National Center for Biotechnology
Information) Search for Conserved Domains within a Protein
Sequence (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.
cgi). The plants were grown to maturity, at which point the seeds
from each individual plant derived from the independent mutant
lines were collected and grown for further investigation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Manitoba, Winnipeg, Canada in 2011. For the identification of homozygousplants, leaf tissue samples from each BnFUS3 TILLINGmutant lines were flash frozen in liquid nitrogen and storedat
80 C. Genomic DNA was extracted from each of the sampledtissues using the cetyltrimethylammonium bromide (CTAB)method (Keb-Llanes et al., 2002). The DNA was suspended in50 ml TE buffer and its concentration was determined by a NanoDrop spectrophotometer. Samples were adjusted to a final concentrationof 150 ng/ml H2O. Genomic DNA samples were thenamplified using primers bn36-4R and bn36-5L (SupplementaryTable 1). The PCR products were purified using the QIAquick PCRPurification kit (Qiagen Gm bH, Hilden, Germany) and sequenceanalysis was conducted by Macrogen USA. The homozygous mutationswere detected with the primer, bn36-4R for the M1 and M3lines and bn36-2R for the M2 line. On the basis of the sequenceanalysis, the homozygous mutant plants were selected and grownin separate pots and covered with selfing bags to prevent crosspollination.Nucleotide sequences were translated into amino acidsequences using the ExPASy Proteomics Server (http://expasy.org/tools/dna.html). The conserved domains and structure of the genewere identified using the NCBI (The National Center for BiotechnologyInformation) Search for Conserved Domains within a ProteinSequence (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi) พืชที่ปลูกครบกำหนด จุดที่เมล็ดจากแต่ละโรงงานแต่ละที่มา mutant อิสระบรรทัดถูกรวบรวม และเติบโตเพื่อการตรวจสอบเพิ่มเติม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แมนิโทบาวินนิเพกประเทศแคนาดาในปี 2011 สำหรับบัตรประจำตัวของ homozygous
พืชใบตัวอย่างเนื้อเยื่อจากแต่ละ BnFUS3
กระทั่งสายการกลายพันธุ์แฟลชถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่?
80? C ดีเอ็นเอถูกสกัดจากแต่ละตัวอย่างเนื้อเยื่อโดยใช้โบรไมด์ cetyltrimethylammonium นี้ (CTAB) วิธีการ (เคบลานส์-et al., 2002) ดีเอ็นเอถูกระงับใน50 มลบัฟเฟอร์ TE และความเข้มข้นของมันถูกกำหนดโดยนาโนspectrophotometer Drop ตัวอย่างถูกปรับให้มีความเข้มข้นสุดท้าย150 ng / ml H2O ตัวอย่างดีเอ็นเอจีโนมได้แล้วขยายโดยใช้ไพรเมอร์และ bn36-5L bn36-4R (เสริมตารางที่ 1) ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยใช้วิธี PCR QIAquick บริสุทธิ์ชุด (Qiagen Gm BH, ฮิลเดน, เยอรมนี) และลำดับการวิเคราะห์ได้ดำเนินการโดยMacrogen สหรัฐอเมริกา กลายพันธุ์ homozygous ตรวจพบด้วยไพรเมอร์, bn36-4R สำหรับ M1 และ M3 เส้นและ bn36-2R สำหรับสาย M2 บนพื้นฐานของลำดับการวิเคราะห์พืชกลายพันธุ์ homozygous ได้รับการคัดเลือกและปลูกในกระถางแยกต่างหากและปกคลุมด้วยถุงselfing เพื่อป้องกันไม่ให้ crosspollination. ลำดับเบสแปลเป็นกรดอะมิโนลำดับโดยใช้ ExPASy เซ็กเมนต์ Server (http://expasy.org/ เครื่องมือ / dna.html) โดเมนอนุรักษ์และโครงสร้างของยีนที่ถูกระบุโดยใช้ NCBI (ศูนย์เทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติเพื่อข้อมูล) ค้นหาการอนุรักษ์โดเมนภายในโปรตีนลำดับ (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb cgi) พืชที่ปลูกจนครบกำหนดจุดที่เมล็ดจากพืชแต่ละบุคคลที่ได้มาจากการกลายพันธุ์ที่เป็นอิสระเส้นถูกเก็บรวบรวมและปลูกเพื่อตรวจสอบต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แมนิโทบา , วินนิเพก , แคนาดา ในปี 2011 สำหรับการจำแนกชนิดพืช ส่วน
ใบตัวอย่างเนื้อเยื่อจากแต่ละ bnfus3 tilling
สายกลายพันธุ์เป็นแฟลชแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้
ที่
80  C สกัดดีเอ็นเอจากตัวอย่างเนื้อเยื่อแต่ละ
ใช้ cetyltrimethylammonium โบรไมด์ ( ctab )
วิธีเก็บแอลลาเนส et al . , 2002 ) ดีเอ็นเอที่ถูกระงับใน
บัฟเฟอร์ TE 50 ml และความเข้มข้นของถูกกำหนดโดยนาโน
วางวัสดุ ตัวอย่างการนำไป
ความเข้มข้นสุดท้าย 150 ng / ml H2O จีโนมดีเอ็นเอตัวอย่างแล้ว
bn36-4r ขยายใช้ไพรเมอร์ และ bn36-5l ( เสริม
ตารางที่ 1 ) ที่เพิ่มปริมาณการใช้เชื้อบริสุทธิ์ qiaquick
ฟอก Kit ( QIAGEN ( BH , ฮิลเดน , เยอรมนี ) และลำดับ
การวิเคราะห์ดำเนินการโดย macrogen สหรัฐอเมริกาตรวจพบการกลายพันธุ์แบบ
ด้วยไพรเมอร์ bn36-4r สำหรับ M1 และ M3
เส้น bn36-2r สำหรับ M2 และบรรทัด บนพื้นฐานของการวิเคราะห์ลำดับยีนกลายพันธุ์
, พืชที่ปลูกในกระถางแยก
และคลุมด้วยถุงผสมเพื่อป้องกัน crosspollination .
เบสถูกแปลเป็นลำดับกรดอะมิโน
ลำดับการใช้ expasy แสดงเซิร์ฟเวอร์ ( http : / / expasy . org /
เครื่องมือ HTML / DNA ) การอดออมโดเมนและโครงสร้างของยีน
ถูกระบุโดยใช้ ncbi ( ศูนย์สารสนเทศเทคโนโลยีชีวภาพ
แห่งชาติ ) ค้นหาเพื่อโดเมนภายในโปรตีน
ลำดับ ( http : / / www.ncbi . nlm . NIH . gov / โครงสร้าง / Commission / wrpsb .
CGI ) พืชที่ปลูกเพื่อเก็บเกี่ยว ที่จุดเมล็ด
จากแต่ละต้นที่ได้มาจากการเก็บรวบรวมสายพันธุ์กลายพันธุ์
อิสระและโต เพื่อทำการสืบสวนต่อไป