Protoplast isolation and culture. N

Protoplast isolation and culture. Newly expanded young leaves of 2-, 4-, and 6-wk-old plants, and hypocotyls from 1- to 2-wk-old seedlings were used. In both cases, 1 g of plant tissue was placed on a glass Petri dish in the presence of 0.5 M mannitol at pH 5.8 (plasmolysis solution), was cut into fine pieces and incubated for 1 h in the dark at 25°C. The suspension was then treated with the selected enzyme solution and incubated for 16–18 h in the dark at 25°C with gentle shaking (30 rpm). For digestion of protoplasts from mesophyll and hypocotyls of tested cultivars, ES enzyme solution consisting of KM (Kao and Michayluk 1975) medium, 0.1% (w/v) macerozyme R-10 (Duchefa Biochemie, Netherlands), 1.0% (w/v) cellulase Onozuka R-10 (Duchefa Biochemie), and 0.8 M sucrose pH 5.6 was used. For protoplast isolation from mesophyll of the DH lines, beside ES enzyme solution, ES IVand D solutions were used. The ES IV enzyme solution consisted of 1.0% (w/v) cellulase Onozuka R-10, 0.1% (w/v) pectolyase Y-23 (Duchefa Biochemie, NL), 0.6 M mannitol, 20 mM 2-(N-morpholino) ethanesulfonic acid (MES; Sigma), 5.0 mM MgCl2·6 H20, pH 5.6; D solution consisted of 1.0% (w/v), cellulase Onozuka R-10, 0.5% (w/v) Driselase® (Duchefa Biochemie), 1.0% (w/v) macerozyme R-10, 0.6 M mannitol, 20 mM MES, 5.0 mM MgCl2·6H20, pH 5.6. All enzyme solutions were filter-sterilized (0.22 μm, Millipore, Durham, UK).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยก protoplast และวัฒนธรรม ขยายใบอ่อน 2- 4- และ 6 wk อายุพืชใหม่ และใช้ hypocotyls จาก 1 ไป 2-wk-อายุกล้าไม้ ในทั้งสองกรณี 1 กรัมของเนื้อเยื่อพืชถูกวางบนแก้วจานเพาะเชื้อในต่อหน้าของ mannitol 0.5 M ที่ pH 5.8 (โซลูชัน plasmolysis), ถูกตัดเป็นชิ้นดี และ incubated สำหรับ h 1 ในมืดที่ 25 องศาเซลเซียส การระงับได้แล้วรักษา ด้วยเอนไซม์เลือกโซลูชัน และ incubated สำหรับ h 16-18 ในมืดที่ 25° C ด้วยอ่อนโยนสั่น (30 รอบต่อนาที) การย่อยอาหารของโปจาก mesophyll hypocotyls ทดสอบพันธุ์ มีใช้โซลูชั่นเอนไซม์ ES ประกอบด้วย KM (เก่าและ Michayluk 1975) กลาง 0.1% (w/v) macerozyme R-10 (Duchefa Biochemie ประเทศเนเธอร์แลนด์), 1.0% (w/v) cellulase Onozuka R-10 (Duchefa Biochemie), และ 0.8 M ซูโครส pH 5.6 แยก protoplast จาก mesophyll ของบรรทัด DH ข้าง ES เอนไซม์โซลูชัน D IVand เอสโซลูชั่นที่ใช้ โซลูชั่นเอนไซม์ ES IV ประกอบด้วย 1.0% (w/v) cellulase Onozuka R-10, 0.1% (w/v) pectolyase Y-23 (Duchefa Biochemie, NL), 0.6 M mannitol กรด ethanesulfonic 2-(N-morpholino) 20 มม. (MES ซิกมา), 5.0 mM MgCl2·6 เอท 20, pH 5.6 โซลูชั่น D ประกอบด้วย 1.0% (w/v), cellulase Onozuka R-10, 0.5% (w/v) Driselase? (Duchefa Biochemie), 1.0% (w/v) macerozyme R-10, mannitol 0.6 M, 20 มม. MES, MgCl2·6H20, pH 5.6 5.0 มม. โซลูชั่นทั้งหมดของเอนไซม์ sterilized กรอง (0.22 μm มาก เดอแรม UK) ได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกโปรโตพลาและวัฒนธรรม ขยายตัวใหม่ของใบอ่อน 2, 4 และ 6 สัปดาห์เก่าพืชและ hypocotyls จาก 1 ไป 2 สัปดาห์อายุต้นกล้าที่ถูกนำมาใช้ ในทั้งสองกรณี 1 กรัมของเนื้อเยื่อพืชถูกวางลงบนแก้วจานเลี้ยงเชื้อในการปรากฏตัวของ 0.5 M แมนนิทอลที่ pH 5.8 (สารละลาย plasmolysis) ถูกหั่นเป็นชิ้นดีและบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงในที่มืดที่อุณหภูมิ 25 ° C ระงับได้รับการรักษาด้วยวิธีการแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ที่เลือกและบ่มเป็นเวลา 16-18 ชั่วโมงในที่มืดที่ 25 ° C กับอ่อนโยนสั่น (30 รอบต่อนาที) สำหรับการย่อยอาหารของโปรโตพลาจาก mesophyll และ hypocotyls พันธุ์ทดสอบวิธีการแก้ปัญหาของเอนไซม์ ES ประกอบด้วย KM (เก่าและ Michayluk 1975) กลาง 0.1% (w / v) macerozyme R-10 (Duchefa Biochemie, เนเธอร์แลนด์) 1.0% (w / v ) เซลลู Onozuka R-10 (Duchefa Biochemie) และพีเอช 0.8 M ซูโครส 5.6 ถูกนำมาใช้ การแยกโปรโตพลาจาก mesophyll ของสายเอชข้างแก้ปัญหาเอนไซม์ ES, ES IVand D ถูกนำมาใช้แก้ปัญหา วิธีการแก้ปัญหาของเอนไซม์ ES IV ประกอบด้วย 1.0% (w / v) เซลลู Onozuka R-10 0.1% (w / v) pectolyase Y-23 (Duchefa Biochemie, NL) 0.6 M แมนนิทอล, 20 มิลลิ 2- (N-morpholino ) กรด ethanesulfonic (MES; ซิกม่า) 5.0 มิลลิ MgCl2 · 6 H20 ค่า pH 5.6; D วิธีการแก้ปัญหาประกอบด้วย 1.0% (w / v), เซลลู Onozuka R-10, 0.5% (w / v) Driselase® (Duchefa Biochemie) 1.0% (w / v) macerozyme R-10 0.6 M แมนนิทอล, 20 มิลลิ MES 5.0 มิลลิ MgCl2 · 6H20 ค่า pH 5.6 การแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ทั้งหมดถูกกรองผ่านการฆ่าเชื้อ (0.22 ไมโครเมตรร์คเดอร์แฮมสหราชอาณาจักร)