Materials and MethodThe present stu

Materials and Method
The present study was carried out in the Biotechnology Laboratory of the Bangladesh Agricultural Research Institute (BARI), Joydebpur, Gazipur-1701, Bangladesh during the period from September 2004 to June 2005. The planting materials of BARI Banana-I were collected from Biotechnology Division, BARI, Joydebpur, Gazipur. The meristem was obtained from developing suckers of about four months of age grown under field conditions and was brought to the preparation room. The suckers were washed thoroughly under running tap water. The roots and outer tissues of the suckers were removed with the help of a sharp knife. A number of outer leaves were removed until the shoot measured about 1.0-2.0 cm in length and 1.0 cm width at the base. The meristem used for establishment of culture was prepared through dissection and removal of leaf sheath under the microscope. Then the initial explant was prepared under stereomicroscope by removal of outer tissue of meristem with the help of sterile scalpel, which was about 5x5 mm in size.
Two experiments were conducted to assess the effect of different concentrations of BAP, NAA, IAA and IBA on shoot proliferation and subsequent rooting of the multiplied shoot. In the frist experiment, in vitroderived banana cv. BARI Banana-I plantlets were used as sources of meristem to investigate the effect of BAP, NAA each at different concentrations alone or in combinations on shoot proliferation. Five levels of BAP (0.0, 2.5, 5.0, 7.5, and 10.0 mg/l) and 5 levels of NAA (0.0, 0.5, 1.0, 1.5 and 2.0 mg/l were used. All the combinations of both BAP and NAA were used as treatments. In the second experiment, there were 3 levels of IAA (0.0, 0.5 and 1.0 mg/l) and 4 levels of IBA (0.0, 0.5, 1.0, and 1.5 mg/l) were used as treatments. The experiments were arranged in completely randomized design (CRD) with 4 replications. Each treatment consisted of 10 culture tubes per replication. Data were collected on the effect of different treatments on shoot proliferation and rooting.
Murashige and Skoog (1962) medium supplemented with different phytohormones as per treatments were used as culture medium for shoot induction, shoot multiplication and maintenance and regeneration of roots from multiplied shoot. Hormones were added separately to different media according to the requirements. For the preparation of media, stock solutions were prepared at the beginning and stored at 9±1°C temperature. The respective medium was prepared from the stock solutions. The culture tubes with media were then autoclaved at 1.06 kg/cm2 pressure at 121°C for 25 minutes. The medium was then cooled at room temperature before use.
The pale white tissue block (l.0 × 2.0 cm) containing meristem and rhizomatous base were taken in a beaker. Surface sterilization was done under laminar Airflow Cabinet with 70% ethyl alcohol, the explants were surface sterilized with 0.1% mercuric chloride and a few drops of Tween 20 for 15 minutes. Finally, the explants were then rinsed three to four times with steriledistilled water.
The isolated and surface sterilized explants were collected carefully under the stereomicroscope through maintaining aseptic condition inside the laminar air flow cabinet to use those as explants. The individual meristems were directly inoculated to each of the culture tube containing 20 ml of MS medium supplemented with different concentrations of hormones as per treatment covered with aluminium foil.
The culture tubes were transferred to growth room and allowed to grow in controlled environment. The temperature of the growth room was maintained within 25±1°C by an air conditioner. A 16-hour light period was maintained with light intensity of 2000 lux for the growth and development of culture.
Some explants become black in colour within 6-7 days after inoculation. To control blackening after about one week, the blackish tissues on the explants were removed and the meristematic tissues were, transferred to similar fresh medium. It was repeated 10 days interval for about one month to minimize further blackening of the tissues.sub-culturing, the entire samples of in vitro shoot were cut into small pieces so that each piece would contain about one shoot. Leaf and blackish or brownish basal tissues were removed to expose the meristems. Each piece was inoculated into a similar fresh medium. It was practiced at the interval of every one month.
When the shoots grew about 3-5 cm in length with 3-6 well developed leaves, they were rescued aseptically from the culture tubes and were separated from each other and again cultured on freshly prepared medium containing different combinations of hormonal supplements for root induction.
Potting mixture containing ground soil and cowdung in the ratio of 1:1 was mixed thoroughly and were placed into a 10 × 15 cm polythene bag for growing in vitro grown plantlets under ex vitro conditions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการการศึกษาปัจจุบันได้ดำเนินการในห้องปฏิบัติการเทคโนโลยีชีวภาพของประเทศบังกลาเทศเกษตรวิจัยสถาบัน (บา รี่), Joydebpur, Gazipur-นี้ บังกลาเทศในระหว่างรอบระยะเวลาตั้งแต่เดือน 2547 กันยายนถึง 2548 มิถุนายน วัสดุปลูกกล้วยบา-ฉันถูกรวบรวมจาก ฝ่ายเทคโนโลยีชีวภาพ บารี Joydebpur, Gazipur Meristem ได้รับจากการพัฒนา suckers เติบโตขึ้นภายใต้เงื่อนไขที่มีฟิลด์อายุประมาณ 4 เดือน และถูกนำตัวไปห้อง Suckers ที่ถูกล้างอย่างละเอียดภายใต้การใช้น้ำประปา รากและเนื้อเยื่อด้านนอกของ suckers ที่ถูกเอาออก โดยใช้มีดคม จำนวนใบไม้นอกถูกเอาออกจนกว่าการถ่ายภาพวัดประมาณ 1.0-2.0 ซม.ความยาวและความกว้าง 1.0 ซม.ที่ฐาน Meristem ที่ใช้สำหรับการก่อตั้งวัฒนธรรมได้เตรียมชำแหละและเอาใบไม้ sheath ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ แล้ว explant เริ่มต้นเตรียมไว้ภายใต้ stereomicroscope โดยเอาเนื้อเยื่อด้านนอกของ meristem ช่วยใส่ scalpel ซึ่งมีขนาดประมาณ 5 x 5 mmทดลองได้ดำเนินการประเมินผลของความเข้มข้นแตกต่างกันของ BAP, NAA, IAA และอิบาในการงอกยิงและ rooting ยิงคูณตามมา ในทดลองโร ในพันธุ์กล้วย vitroderived บาบานาน่า-ฉัน plantlets ถูกใช้เป็นแหล่งของ meristem เพื่อตรวจสอบผลของ BAP, NAA แต่ละ ที่ความเข้มข้นแตกต่างกันเพียงอย่างเดียว หรือรวมกันบนยิงแพร่หลาย ระดับห้าของ BAP (0.0, 2.5, 5.0, 7.5 และ 10.0 mg/l) และระดับ 5 ของ NAA (0.0, 0.5, 1.0, 1.5 และ 2.0 mg/l ก็ใช้ ชุดทั้งหมดของ BAP และ NAA ถูกใช้เป็นการรักษา ในการทดลองที่สอง มี 3 ระดับของ IAA (0.0, 0.5 และ 1.0 mg/l) และระดับ 4 ของอิบา (0.0, 0.5, 1.0 และ 1.5 mg/l) ที่เคยเป็นรักษา การทดลองถูกจัดแบบ randomized สมบูรณ์ (CRD) กับระยะที่ 4 ทรีตเมนท์ประกอบด้วย 10 หลอดวัฒนธรรมต่อการจำลองแบบ ได้รวบรวมข้อมูลเกี่ยวกับผลของการรักษาแตกต่างกันในการงอกยิง rootingMurashige และ Skoog (1962) สื่อเสริม ด้วย phytohormones ต่าง ๆ ตามรักษาถูกใช้เป็นสื่อวัฒนธรรมเหนี่ยวนำยิง ยิงคูณบำรุง และฟื้นฟูรากจากยิงคูณ ฮอร์โมนมีเพิ่มแยกต่างหากไปยังสื่อต่าง ๆ ตามความต้องการ สำหรับการจัดเตรียมสื่อ โซลูชั่นหุ้นถูกเตรียมไว้ในตอนต้น และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ° C 9±1 สื่อที่เกี่ยวข้องถูกเตรียมจากโซลูชั่นหุ้น หลอดวัฒนธรรมกับสื่อได้แล้ว autoclaved ที่ 1.06 kg/cm2 ดันที่ 121° C 25 นาที สื่อได้แล้วระบายความร้อนด้วยอุณหภูมิห้องก่อนใช้บล็อกเนื้อเยื่อสีขาวซีด (l.0 × 2.0 cm) ประกอบด้วย meristem และ rhizomatous ฐานที่ถ่ายในบีกเกอร์ ฆ่าเชื้อพื้นผิวถูกทำภายใต้ laminar ตู้ไหลของอากาศด้วยเอทิลแอลกอฮอล์ 70% ใน explants ถูกผิว sterilized คลอไรด์ 0.1% mercuric และหยด Tween 20 15 นาที สุดท้าย ใน explants ถูกแล้ว rinsed สามถึงสี่เท่าน้ำ steriledistilledExplants sterilized แยก และพื้นผิวถูกรวบรวมอย่างระมัดระวังภายใต้ stereomicroscope ผ่านรักษาเงื่อนไขเข้มข้นภายในตู้ไหลอากาศ laminar เพื่อใช้เป็น explants Meristems ละได้โดยตรง inoculated แต่ละหลอดวัฒนธรรมประกอบด้วย 20 ml ของ MS กลางเสริม ด้วยความเข้มข้นแตกต่างกันของฮอร์โมนตามรักษาครอบคลุม ด้วยอลูมิเนียมฟอยล์หลอดวัฒนธรรมถูกโอนย้ายไปห้องพักเจริญเติบโต และสามารถเติบโตในสภาพแวดล้อมการควบคุม มีรักษาอุณหภูมิห้องเติบโตภายใน 25±1 ° C โดยเครื่องปรับอากาศ เป็นรักษาระยะแสง 16 ชั่วโมงกับความเข้มแสงของ lux 2000 สำหรับการเจริญเติบโตและการพัฒนาวัฒนธรรมExplants บางเป็นสีภายใน 6-7 วันหลังจาก inoculation ดำ การควบคุม blackening หลังจากหนึ่งสัปดาห์ เนื้อเยื่อ blackish ใน explants ถูกเอาออก และเนื้อเยื่อ meristematic ได้ โอนสดปานกลางคล้าย ก็ซ้ำ 10 วันช่วงประมาณหนึ่งเดือนเพื่อลด blackening เพิ่มเติม ของการ tissues.sub-culturing ตัวอย่างทั้งหมดของเครื่องมือยิงถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ เพื่อให้แต่ละชิ้นจะประกอบด้วยยิงเดียว ใบและเนื้อเยื่อโดยโรค blackish หรือน้ำตาลถูกเอาออกผึ่ง meristems แต่ละชิ้นถูก inoculated เป็นสื่อสดคล้าย มันเป็นประสบการณ์ในช่วงของเดือนที่หนึ่งยอดการเติบโตประมาณ 3-5 ซม.ความยาวมี 3-6 ใบดี พวกเขาได้รับ aseptically จากหลอดวัฒนธรรมถูกแยกออกจากกัน และอ่างอีกครั้ง บนลิ้มขนาดกลางที่มีรวมกันเสริมฮอร์โมนสำหรับหลักการเหนี่ยวนำPotting ผสมที่ประกอบด้วยพื้นดินและ cowdung ในอัตราส่วน 1:1 ผสมอย่างละเอียด และได้อยู่ใน 10 × 15 ซม. polythene กระเป๋าสำหรับเจริญเติบโตการเพาะเลี้ยงปลูก plantlets ภายใต้อดีตสภาพเครื่อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการศึกษาครั้งนี้ได้ดำเนินการในห้องปฏิบัติการเทคโนโลยีชีวภาพของประเทศบังคลาเทศสถาบันวิจัยเกษตร (บารี) Joydebpur, Gazipur-1701, บังคลาเทศในช่วงระยะเวลาตั้งแต่เดือนกันยายน 2004 ถึงมิถุนายน 2005 วัสดุปลูกกล้วยบารี-I ที่ถูกเก็บรวบรวม เทคโนโลยีชีวภาพจากกองบารี, Joydebpur, Gazipur
เนื้อเยื่อที่ได้รับจากการพัฒนาหน่อประมาณสี่เดือนของอายุการเจริญเติบโตในสภาพสนามและถูกนำตัวไปที่ห้องเตรียม หน่อถูกล้างให้สะอาดภายใต้การทำงานของน้ำประปา รากและเนื้อเยื่อด้านนอกของหน่อที่ถูกถอดออกด้วยความช่วยเหลือของมีดคม จำนวนใบนอกที่ถูกถอดออกจนยิงที่วัดได้ประมาณ 1.0-2.0 เซนติเมตรยาวและความกว้าง 1.0 ซม. ที่ฐาน เนื้อเยื่อที่ใช้สำหรับสถานประกอบการของวัฒนธรรมถูกจัดทำขึ้นผ่านการตัดและการกำจัดของกาบใบภายใต้กล้องจุลทรรศน์ จากนั้นชิ้นเริ่มต้นที่ถูกจัดทำขึ้นภายใต้สเตอริโอโดยการกำจัดของเนื้อเยื่อด้านนอกของเนื้อเยื่อด้วยความช่วยเหลือของมีดผ่าตัดปลอดเชื้อซึ่งเป็นเรื่องเกี่ยวกับมม 5x5 ในขนาด.
สองทดลองเพื่อประเมินผลกระทบของความเข้มข้นแตกต่างกันของ BAP, NAA, IAA และ IBA บน การเพิ่มจำนวนยอดและรากที่ตามมาของการถ่ายคูณ ในการทดลองเฟิในพันธุ์กล้วย vitroderived บารีต้นกล้วยที่ผมใช้เป็นแหล่งที่มาของเนื้อเยื่อเพื่อตรวจสอบผลกระทบของ BAP, NAA แต่ละที่ความเข้มข้นที่แตกต่างกันเพียงอย่างเดียวหรือรวมกันในการขยายการถ่าย ห้าระดับของ BAP (0.0, 2.5, 5.0, 7.5 และ 10.0 มิลลิกรัม / ลิตร) และ 5 ระดับ NAA (0.0, 0.5, 1.0, 1.5 และ 2.0 มิลลิกรัม / ลิตรถูกนำมาใช้. ทั้งหมดรวมกันของทั้งสอง BAP และ NAA ถูกนำมาใช้ กับการรักษา. ในการทดลองที่สองมี 3 ระดับของ IAA (0.0, 0.5 และ 1.0 mg / l) และ 4 ระดับของไอบีเอ (0.0, 0.5, 1.0 และ 1.5 mg / l) ถูกนำมาใช้กับการรักษา. การทดลองได้ จัดในการออกแบบแบบสุ่มสมบูรณ์ (CRD) มี 4 ซ้ำ. การรักษาแต่ละประกอบด้วย 10 หลอดวัฒนธรรมต่อการจำลองแบบ. เก็บรวบรวมข้อมูลเกี่ยวกับผลของการรักษาที่แตกต่างกันในการขยายการถ่ายและการขจัด.
Murashige และ Skoog (1962) เสริมขนาดกลางที่มี phytohormones แตกต่างกันตาม การรักษาที่ถูกนำมาใช้เป็นสื่อกลางในวัฒนธรรมสำหรับการเหนี่ยวนำการยิงยิงคูณและการบำรุงรักษาและการฟื้นฟูของรากจากการถ่ายคูณ. ฮอร์โมนที่ถูกเพิ่มเข้าแยกไปยังสื่อที่แตกต่างกันตามความต้องการ. สำหรับการเตรียมสื่อการแก้ปัญหาหุ้นได้จัดทำที่จุดเริ่มต้นและเก็บไว้ที่ 9 ± 1 ° C อุณหภูมิ สื่อที่เกี่ยวข้องได้รับการจัดทำขึ้นจากการแก้ปัญหาสต็อก หลอดวัฒนธรรมกับสื่อมวลถูกแล้วที่ 1.06 กก. / cm2 ความดันที่ 121 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 25 นาที สื่อที่ได้รับการระบายความร้อนด้วยแล้วที่อุณหภูมิห้องก่อนการใช้งาน.
บล็อกเนื้อเยื่อสีขาวซีด (l.0 × 2.0 ซม.) ที่มีเนื้อเยื่อและฐาน rhizomatous ถูกถ่ายในถ้วยแก้ว การฆ่าเชื้อที่พื้นผิวได้ทำภายใต้คณะรัฐมนตรีราบเรียบไหลเวียนของอากาศที่มีแอลกอฮอล์ 70% ที่ได้รับชิ้นส่วนพื้นผิวที่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยคลอไรด์ 0.1% ปรอทและไม่กี่หยดของ Tween 20 เป็นเวลา 15 นาที สุดท้ายชิ้นที่ถูกล้างแล้ว 3-4 ครั้งด้วยน้ำ steriledistilled.
ที่แยกและพื้นผิวชิ้นผ่านการฆ่าเชื้อที่ถูกเก็บรวบรวมอย่างระมัดระวังภายใต้สเตอริโอผ่านการรักษาสภาพปลอดเชื้อภายในตู้ชั้นการไหลของอากาศที่จะใช้ชิ้นส่วนที่เป็น meristems บุคคลที่ถูกเชื้อโดยตรงกับแต่ละหลอดวัฒนธรรมที่มี 20 มล MS เสริมขนาดกลางที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันของฮอร์โมนเป็นต่อการรักษาที่ปกคลุมไปด้วยอลูมิเนียม.
หลอดวัฒนธรรมถูกย้ายไปที่ห้องของการเจริญเติบโตและได้รับอนุญาตที่จะเติบโตในสภาพแวดล้อมที่ควบคุม อุณหภูมิของห้องพักการเจริญเติบโตถูกเก็บรักษาไว้ภายใน 25 ± 1 องศาเซลเซียสโดยเครื่องปรับอากาศ ระยะเวลาแสง 16 ชั่วโมงก็ยังคงมีความเข้มแสง 2,000 ลักซ์ของการเจริญเติบโตและการพัฒนาของวัฒนธรรม.
ชิ้นส่วนบางคนกลายเป็นสีดำภายใน 6-7 วันหลังจากการฉีดวัคซีน เพื่อควบคุมการใส่ร้ายป้ายสีหลังจากนั้นประมาณหนึ่งสัปดาห์เนื้อเยื่อดำบนชิ้นถูกถอดออกและเนื้อเยื่อเจริญที่ถูกถ่ายโอนไปยังสื่อสดที่คล้ายกัน มันเป็นช่วงเวลาที่ซ้ำแล้วซ้ำอีก 10 วันประมาณหนึ่งเดือนเพื่อลดการใส่ร้ายป้ายสีต่อไปของ tissues.sub-เลี้ยง, ตัวอย่างทั้งในหลอดทดลองยิงถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ เพื่อให้แต่ละชิ้นจะมีประมาณหนึ่งยิง ใบและเนื้อเยื่อฐานสีดำหรือสีน้ำตาลที่ถูกถอดออกเพื่อแสดง meristems แต่ละชิ้นได้รับเชื้อเป็นสื่อสดที่คล้ายกัน มันได้รับการฝึกฝนในช่วงเวลาของทุกเดือนหนึ่ง.
เมื่อหน่อขยายตัวประมาณ 3-5 เซนติเมตรยาวที่มีใบ 3-6 การพัฒนาที่ดีที่พวกเขาได้รับการช่วยเหลือจากหลอดปลอดเชื้อวัฒนธรรมและถูกแยกออกจากกันและเพาะเลี้ยงอีกครั้งในวันที่ปรุงสดใหม่ ขนาดกลางที่มีแตกต่างกันของผลิตภัณฑ์เสริมอาหารของฮอร์โมนในการชักนำราก.
เติมส่วนผสมที่มีพื้นดินและ cowdung ในอัตราส่วน 1: 1 ผสมอย่างละเอียดและถูกวางไว้เป็น 10 × 15 ซมถุงพลาสติกสำหรับการเจริญเติบโตในหลอดทดลองปลูกต้นภายใต้เงื่อนไขอดีตหลอดทดลอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
การศึกษาเป็นการทดลองในห้องปฏิบัติการวิจัยเทคโนโลยีชีวภาพสถาบันวิจัยเกษตรบังคลาเทศ ( บารี ) , joydebpur gazipur-1701 , บังคลาเทศ , ในช่วงระยะเวลาตั้งแต่เดือนกันยายน 2547 - มิถุนายน 2548 การปลูกพืชวัตถุดิบของบารี banana-i รวบรวมจากเทคโนโลยีชีวภาพหมวด , บารี , joydebpur Gazipur , .เยื่อที่ได้จากการพัฒนาหน่อประมาณสี่เดือนของอายุที่ปลูกภายใต้สภาพสนามและถูกนำตัวไปที่ห้องเตรียมตัว หน่อคือ ล้างให้สะอาด ภายใต้คลื่นน้ำ เนื้อเยื่อของราก และภายนอกหน่อออกด้วยความช่วยเหลือของมีดคม หมายเลขของใบนอกออกจนยิงวัดประมาณ 1.0-2.0 เซนติเมตรและ 10 เซนติเมตร ความกว้างที่ฐาน เยื่อที่ใช้สำหรับการจัดตั้งกระทรวงวัฒนธรรมเตรียมผ่านการชำแหละและเอากาบใบภายใต้กล้องจุลทรรศน์ แล้วต่อเริ่มต้นถูกเตรียมภายใต้ stereomicroscope โดยการกำจัดเนื้อเยื่อชั้นนอกของเนื้อเยื่อเจริญด้วยความช่วยเหลือของมีดผ่าตัดหมันประมาณ 5x5 มม. ในขนาด
การทดลองที่ 1 ศึกษาผลของระดับความเข้มข้นของ NAA และ BAP IAA , IBA ในการยิงและการเชียร์ของคูณยิง ในการทดลองแรก ใน vitroderived กล้วยพันธุ์ บารี banana-i ต้นที่ถูกใช้เป็นแหล่งของเนื้อเยื่อเจริญเพื่อศึกษาผลของบังNAA ที่ความเข้มข้นต่างๆกันอย่างเดียวหรือผสมในการยิง . ห้าระดับของบาป ( 0 , 2.5 , 5.0 , 7.5 และ 10.0 มิลลิกรัมต่อลิตรและ NAA ( 5 ) ระดับ 0.0 , 0.5 , 1.0 , 1.5 และ 2.0 มิลลิกรัมต่อลิตร ใช้ ทั้งชุดทั้งบาปและ NAA ที่ใช้ในการรักษา ในการทดลองที่สอง มี 3 ระดับของ IAA ( 0.0 , 0.5 และ 1.0 มิลลิกรัมต่อลิตร ) และระดับ 4 ของ IBA ( 0.0 , 0.5 , 1.0 และ 15 มิลลิกรัม / ลิตร ) ใช้ในการรักษา การทดลองจัด in Completely Randomized Design ( CRD ) มี 4 ซ้ำ การรักษาแต่ละประกอบด้วย 10 วัฒนธรรมหลอดต่อการทำซ้ำ รวบรวมข้อมูลเกี่ยวกับผลกระทบของการรักษาที่แตกต่างกันในการยิง และเชียร์
อาหารสูตร Murashige and Skoog ( 1962 ) ที่เติม phytohormones แตกต่างกันตามการรักษาที่ถูกใช้เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อสำหรับเหนี่ยวยิง การคูณและการบำรุงรักษาและการฟื้นฟูของรากจากคูณยิง ฮอร์โมนเพิ่มต่างหากที่จะสื่อต่าง ๆตามความต้องการ สำหรับการเตรียมการของสื่อหุ้นโซลูชั่นเตรียมที่จุดเริ่มต้นและเก็บไว้ที่ 9 ± 1 ° C อุณหภูมิ สื่อที่เกี่ยวข้องเตรียมได้จากหุ้นโซลูชั่น วัฒนธรรมหลอดกับสื่อแล้วสังเคราะห์ที่ 1.06 kg / cm2 แรงดันที่ 121 ° C เป็นเวลา 25 นาที อาหารก็เย็นที่อุณหภูมิห้องก่อนที่จะใช้ .
ซีดบล็อกเนื้อเยื่อสีขาว ( l.0 × 20 เซนติเมตร ) และประกอบด้วยเนื้อเยื่อเจริญ rhizomatous ฐานถ่ายในบีกเกอร์ . ฆ่าเชื้อที่พื้นผิวถูกทำภายใต้ตู้ลามินาร์ของ 70% เอธิลแอลกอฮอล์ , อาหารถูกฆ่าเชื้อที่ผิวด้วยเมอร์คิวริกคลอไรด์ 0.1% และไม่กี่หยด Tween 20 เป็นเวลา 15 นาที ในที่สุด อาหารสามสี่ครั้ง แล้วล้างด้วยน้ำ steriledistilled
.การแยกและฆ่าเชื้อที่ผิวอาหาร ศึกษาอย่างรอบคอบ ภายใต้ stereomicroscope ผ่านการรักษาสภาวะปลอดเชื้อภายในการไหลของอากาศ ตู้ ใช้เป็นอาหาร .การ meristems บุคคลได้โดยตรงจากแต่ละวัฒนธรรมหลอดบรรจุ 20 ml ของ MS ที่ระดับความเข้มข้นของฮอร์โมนต่อการปกคลุมด้วยอลูมิเนียมฟอยล์ .
วัฒนธรรมหลอดถูกย้ายห้อง การเจริญเติบโต และได้รับอนุญาตให้เติบโตในสภาพแวดล้อมการควบคุม อุณหภูมิของห้องที่การรักษาภายใน 25 ± 1 ° C โดยแอร์16 ชั่วโมงระยะเวลาที่ถูกรักษาด้วยแสงความเข้มแสง 2 , 000 ลักซ์สำหรับการเจริญเติบโตและการพัฒนาของวัฒนธรรม อาหารกลายเป็นสีดำ
บางสีภายใน 6-7 วัน หลังการฉีดวัคซีน ควบคุม blackening หลังจากที่ประมาณหนึ่งสัปดาห์ เนื้อเยื่อหม่นบนอาหารออกและเนื้อเยื่อ meristematic ถูกโอนไปยังสื่อสดเหมือนกันมันซ้ำ 10 วัน ช่วงเวลาประมาณหนึ่งเดือนเพื่อลดเพิ่มเติม blackening ของ tissues.sub-culturing , ทั้งหมดตัวอย่างของการยิงที่ถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆเพื่อให้แต่ละชิ้นจะประกอบด้วยหนึ่งยิง ใบ และดำ หรือสีน้ำตาล เนื้อเยื่อพื้นฐานถูกลบออกเพื่อแสดง meristems . แต่ละชิ้นเป็นเชื้อสดที่คล้ายกัน )มันเป็นท่าในช่วงเวลาของทุกหนึ่งเดือน .
เมื่อหน่อโตประมาณ 3-5 ซม. ยาว 3-6 พัฒนาดีใบ พวกเขาได้รับการช่วยเหลือจากวัฒนธรรม aseptically ท่อและถูกแยกออกจากแต่ละอื่น ๆและอีกครั้งที่เพาะเลี้ยงบนอาหารที่เตรียมสดแตกต่างกันของฮอร์โมนอาหารเสริมสําหรับเหนี่ยว
รากกระถางที่มีดินผสมดินและ cowdung ในอัตราส่วน 1 : 1 ผสมให้ทั่ว และถูกวางไว้ใน 10 × 15 ซม. กระเป๋า Polythene เพื่อปลูกในหลอดทดลองปลูกต้นภายใต้สภาวะปลอดเชื้อเช่น