In this analysis, 150 mL samples we

In this analysis, 150 mL samples were passed through a filter
with a diameter of 0.42 micron by the help of a vacuum pump.
To avoid possible contamination, it was conducted as class 2
laminar flow.
Separation of microbes from the filter paper was carried out in
two ways:
A - Washing with distilled water.
B - Washing with diethylpyrocarbonate (DEPC).
Filter paper was placed in 50 cc Iso glass and about 10 cc of
0.1% solution of autoclaved DEPC was added to the Iso glass.
Filter was properly washed three times with the help of sampler
in the Iso glass wall through immersion and extreme turbulence.
Then the solution resulted from washing were transferred into
centrifuge Falcon tubes. Then, the solution was centrifuged for 10 min with 14 000 r/min.
Supernatant was removed carefully with a sampler and about
10 cc of autoclaved saline was added to the deposits. Then it
was centrifuged after application of vortex and turbulence.
Thus, DEPC was washed from the deposits. About 300 micro liters
of the final deposits were transferred to a microtube 1.5 and
finally about 50 micro liters of the final deposit was transferred
as a bacterial mass to a microtube 1.5, after it was centrifuged
at 14 000 r/min for 2 min and at the next stage, it was analyzed
by PCR test. Moreover, a number of samples were comparatively
tested with or without DEPC to evaluate the necessity of its
application.
From 250 mL sample in the sample container, 100 cc was used
for doing MPN test, about 30 cc was used for doing turbidity test
and the rest was used for doing molecular filtrations.
In this study, three types of samples were studied:
1 - Wells and water distribution system samples: MPN culture
test were first performed as the gold standard tests, then the
samples were filtered and analyzed by PCR test.
2 - Standard bacteria: E. coli and CRM.
3 - Synthetic samples: In order to evaluate PCR, synthetic
samples were used as positive examples. These samples were
positive BGB (their microbial contamination with coliform was
confirmed) and they are kept and expanded for setting up PCR.
After isolation of bacteria, purified bacteria were added to the
negative MPN water sample. In this study, all water samples sent
to the laboratory culture were kept in a refrigerator for 24 h after
being cultured in a lauryl tryptose broth for doing MPN.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในการวิเคราะห์ ตัวอย่าง 150 mL ที่ผ่านตัวกรองมีเส้นผ่าศูนย์กลางของ 0.42 ไมครอนโดยใช้ปั๊มสุญญากาศเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนได้ จึงได้ดำเนินการเป็นคลาส 2กระแสของ laminarแยกจุลินทรีย์จากกระดาษกรองถูกดำเนินการในวิธีที่สอง:A - ล้าง ด้วยน้ำกลั่นB - ซักผ้า ด้วย diethylpyrocarbonate (DEPC)กระดาษกรองวางไว้ในขวดแก้ว 50 cc Iso และประมาณ 10 cc ของ0.1 โซลูชั่น%ของ autoclaved DEPC ถูกเพิ่มแก้ว Isoกรองได้อย่างถูกต้องล้างสามครั้ง โดยใช้แซมเพลอร์ผนังกระจก Iso แช่และความปั่นป่วนมากแล้วการแก้ปัญหาที่เป็นผลมาจากการซักผ้าได้ถูกโอนย้ายไปเครื่องหมุนเหวี่ยงท่อเหยี่ยว การแก้ปัญหาแล้ว ถูก centrifuged สำหรับ 10 นาทีกับ 14 000 r/minSupernatant ถูกเอาออกอย่างระมัดระวัง ด้วยการแซมเพลอร์ และเกี่ยวกับ10 ซีซีของน้ำเกลือ autoclaved ถูกเพิ่มเงินฝาก แล้วมันมี centrifuged หลัง vortex และความปั่นป่วนดังนั้น DEPC ถูกล้างจากการฝากเงิน ลิตร 300 ไมโครของฝากสุดท้ายถูกโอนย้ายไป microtube 1.5 และสุดท้าย ฝากสุดท้ายประมาณ 50 ลิตรขนาดเล็กมีการโอนย้ายเป็นมวลแบคทีเรียเพื่อ microtube 1.5 หลังจากที่มันถูก centrifugedr 14 000 นาทีในนาทีที่ 2 และ ในขั้นตอนต่อไป จะถูกวิเคราะห์โดยการทดสอบ PCR นอกจากนี้ จำนวนตัวอย่างดีอย่างหนึ่งทดสอบ หรือ ไม่ DEPC ประเมินความจำเป็นของแอพลิเคชันจากตัวอย่าง 250 mL ในตัวอย่างภาชนะบรรจุ 100 cc ใช้สำหรับการทำการทดสอบบริษัทเอ็มพีเอ็น ประมาณ 30 cc ใช้สำหรับทำการทดสอบความขุ่นและส่วนเหลือถูกใช้สำหรับการทำ filtrations โมเลกุลในการศึกษานี้ สามชนิดของตัวอย่างถูกศึกษา:1 - บ่อ และน้ำตัวอย่างระบบการแจกจ่าย: วัฒนธรรมบริษัทเอ็มพีเอ็นก่อนดำเนินการทดสอบเป็นการทดสอบมาตรฐาน นั้นตัวอย่างที่กรอง และวิเคราะห์ โดยการทดสอบ PCR2 - แบคทีเรียมาตรฐาน: E. coli และ CRM3 - ตัวอย่างสังเคราะห์: เพื่อประเมิน PCR สังเคราะห์ตัวอย่างที่ใช้เป็นตัวอย่างที่เป็นบวก ตัวอย่างเหล่านี้ได้BGB บวก (การปนเปื้อนจุลินทรีย์กับโคลิฟอร์มได้ยืนยัน) และมีเก็บ และขยายการตั้งค่า PCRหลังจากการแยกแบคทีเรีย แบคทีเรียบริสุทธิ์ถูกเพิ่มไปตัวอย่างน้ำของบริษัทเอ็มพีเอ็นลบ ในการศึกษานี้ ทั้งหมดน้ำตัวอย่างที่ส่งวัฒนธรรมการปฏิบัติที่ถูกเก็บไว้ในตู้เย็นใน 24 ชมหลังจากมีอ่างในซุป tryptose มี lauryl สำหรับทำบริษัทเอ็มพีเอ็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการวิเคราะห์นี้ 150
มิลลิลิตรตัวอย่างที่ถูกส่งผ่านตัวกรองที่มีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง0.42 ไมครอนโดยความช่วยเหลือของปั๊มสูญญากาศที่.
เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนที่เป็นไปได้ที่มันจะถูกดำเนินการเป็น 2
ชั้นไหล.
แยกจุลินทรีย์จากกระดาษกรองได้ดำเนินการ
ในสองวิธี.
-
การซักผ้าด้วยน้ำกลั่น. B - ซักผ้าที่มี diethylpyrocarbonate (DEPC)
กรองกระดาษวางอยู่ใน 50 ซีซีกระจก Iso และประมาณ 10
ซีซี. การแก้ปัญหา 0.1% ของ DEPC เบาถูกเพิ่มลงในแก้ว Iso
กรองเป็นอย่างถูกต้อง
ล้างสามครั้งด้วยความช่วยเหลือของแซมเพลอร์ในแก้วIso ผนังผ่านการแช่และความวุ่นวายมาก.
แล้วการแก้ปัญหาที่เกิดจากการซักผ้าที่ถูกโอนเข้ามาในท่อเหยี่ยวหมุนเหวี่ยง
จากนั้นการแก้ปัญหาที่ถูกปั่นเป็นเวลา 10 นาทีกับ 14 000 รอบ / นาที.
ใสถูกลบออกอย่างระมัดระวังด้วยตัวอย่างและประมาณ
10 ซีซีน้ำเกลือเบาถูกบันทึกอยู่ในเงินฝาก จากนั้นก็จะได้รับการหมุนเหวี่ยงหลังจากการประยุกต์ใช้น้ำวนและความวุ่นวาย. ดังนั้น DEPC ถูกล้างจากเงินฝาก เกี่ยวกับ 300 ลิตรขนาดเล็กของเงินฝากขั้นสุดท้ายที่ถูกโอนไปยังMicrotube 1.5 และในที่สุดก็ประมาณ50 ลิตรขนาดเล็กของเงินฝากขั้นสุดท้ายถูกย้ายเป็นมวลแบคทีเรียMicrotube 1.5 หลังจากที่มันถูกหมุนเหวี่ยงที่14 000 รอบ / นาทีเป็นเวลา 2 นาทีและใน ขั้นตอนต่อไปก็จะได้รับการวิเคราะห์โดยการทดสอบPCR นอกจากนี้จำนวนของตัวอย่างที่ถูกเมื่อเทียบกับการทดสอบที่มีหรือไม่มี DEPC ในการประเมินความจำเป็นในการที่แอพลิเคชัน. จาก 250 ตัวอย่างมิลลิลิตรในภาชนะตัวอย่าง 100 ซีซีถูกนำมาใช้สำหรับการทำMPN ทดสอบประมาณ 30 ซีซีที่ใช้สำหรับการทำแบบทดสอบความขุ่นและส่วนที่เหลือถูกนำมาใช้สำหรับการทำโมเลกุล filtrations. ในการศึกษานี้สามประเภทของตัวอย่างที่ถูกศึกษา: 1 - เวลส์และตัวอย่างระบบการกระจายน้ำวัฒนธรรม MPN ทดสอบได้ดำเนินการเป็นครั้งแรกที่การทดสอบมาตรฐานทองคำแล้วตัวอย่างที่ถูกกรองและการวิเคราะห์โดยการทดสอบ PCR . 2 - แบคทีเรียมาตรฐาน: เชื้อ E. coli และ CRM. 3 - ตัวอย่างสังเคราะห์: เพื่อประเมิน PCR สังเคราะห์ตัวอย่างถูกนำมาใช้เป็นตัวอย่างในเชิงบวก ตัวอย่างเหล่านี้เป็นบวก BGB (การปนเปื้อนของเชื้อจุลินทรีย์ของพวกเขากับโคลิฟอร์มได้รับการยืนยัน) และพวกเขาจะถูกเก็บไว้และขยายสำหรับการตั้งค่า PCR. หลังจากการแยกเชื้อแบคทีเรียเชื้อแบคทีเรียบริสุทธิ์ถูกเพิ่มเข้าไปในเชิงลบตัวอย่างน้ำ MPN ในการศึกษานี้ทุกตัวอย่างน้ำส่งไปยังห้องปฏิบัติการวัฒนธรรมที่ถูกเก็บไว้ในตู้เย็นเป็นเวลา 24 ชั่วโมงหลังจากที่ถูกเพาะเลี้ยงในน้ำซุปlauryl tryptose สำหรับการทำเอ็มพีเอ็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในการวิเคราะห์นี้ 150 ml จำนวนผ่านกรอง
ที่มีเส้นผ่าศูนย์กลาง 0.42 ไมครอน โดยความช่วยเหลือของปั๊มสูญญากาศ .
เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนที่เป็นไปได้ มันเป็นเหมือนการไหลแบบราบเรียบคลาส 2
.
การแยกจุลินทรีย์จากกระดาษกรองได้ดำเนินการใน 2 วิธี :

- ด้วยการล้างหน้า น้ำกลั่น .
b - ล้างด้วย diethylpyrocarbonate (
depc )กรองกระดาษถูกวางไว้ในแก้วและ ISO 50 cc ประมาณ 10 cc
0.1% สารละลายสังเคราะห์ depc เติมแก้ว ISO
กรองเป็นอย่างถูกต้องซักสามครั้งด้วยความช่วยเหลือของตัวอย่าง
ใน ISO และผ่านผนังกระจกแช่มากความปั่นป่วน .
แล้วการแก้ปัญหาที่เกิดจากการโอนใน
ท่อ ฟอลคอนเหวี่ยง . จากนั้นสารละลายไฟฟ้า 10 นาที 14 000 r / min
นำออกอย่างระมัดระวังด้วยตัวอย่างและเกี่ยวกับ
10 cc สามารถสังเคราะห์เพิ่มในเงินฝาก มันเป็นหลังจากการประยุกต์ใช้ไฟฟ้า

vortex และความวุ่นวาย ดังนั้น depc ล้างจากเงินฝาก เกี่ยวกับ 300 ไมโครลิตร
ของเงินฝากสุดท้ายถูกย้ายไป microtube 1.5
ในที่สุดประมาณ 50 ลิตร micro ของฝากสุดท้ายถูกย้าย
เป็นมวลแบคทีเรียไป microtube 1.5 , หลังจากที่มันถูกไฟฟ้า
ที่ 14 000 R / นาที 2 นาทีและในขั้นตอนต่อไปก็เป็นข้อมูล
โดยวิธี PCR นอกจากนี้จำนวนของกลุ่มตัวอย่าง โดยทดสอบกับ depc
หรือไม่มีการประเมินความจำเป็นของการประยุกต์ใช้
.
จาก 250 ml . ตัวอย่างในตัวอย่างภาชนะบรรจุ 100 ซีซี ใช้
สำหรับการทำทดสอบเมื่อประมาณ 30 ซีซี ใช้สำหรับทำ
ทดสอบความขุ่นและส่วนที่เหลือถูกใช้สำหรับการทำโมเลกุล filtrations .
ในการศึกษานี้สามประเภทของตัวอย่างศึกษา :
1 บ่อ และตัวอย่างระบบจ่ายน้ำ : วัฒนธรรมการทดสอบ
เมื่อถูกแสดงครั้งแรกโดยการทดสอบมาตรฐานทองคำแล้ว
ตัวอย่าง ถูกกรองและวิเคราะห์โดยการทดสอบ PCR .
2 E . coli แบคทีเรียมาตรฐาน :
และ CRM3 - ตัวอย่างสังเคราะห์ : เพื่อประเมินตรวจตัวอย่างสังเคราะห์
ถูกใช้เป็นตัวอย่างที่ดี ตัวอย่างเหล่านี้ถูก
bgb บวก ( การปนเปื้อนของจุลินทรีย์กับฟอร์มคือ
ยืนยัน ) และพวกเขาจะถูกเก็บไว้ และขยายการทำ PCR .
หลังจากการแยกแบคทีเรีย แบคทีเรียที่ถูกทำให้
ตัวอย่างเมื่อน้ำลบ . การศึกษาตัวอย่างน้ำส่ง