Collection and culture of snailsInd

Collection and culture of snails
Individuals of Helix aspersa were collected from local gardens in three ways. Eggs were collected in the field in November and brought to the laboratory where they were allowed to hatch. The following year adult snails were collected from the field and brought to the laboratory where they were maintained in aquaria on garden soil and fed lettuce. Eggs from these snails were collected before they hatched. Also, snails were collected in the field for immediate dissection in March (weight 0.35 g, 1.77 g, 2.74 g, 4.64 g, 10.6 g) and in June (2.55 g, 6.35 g, 9.82 g). Both field-collected eggs and eggs from aquaria were hatched in petri dishes. Limax maximus eggs were collected locally and cultured in the laboratory similarly to H. aspersa. Hatching in H. aspersa required about 16–20 days at room temperature, after which the snails were fed lettuce and maintained in petri dishes on moist filter paper. Filter paper and lettuce were changed daily. During the exponential growth phase, snails from three clutches hatched in the laboratory were weighed at 1, 9, 18, 35, and 49 days, n = 15, 16, 30, 23, and 14, respectively. In all cases, snail weight was wet weight with shell. In addition, laboratory-raised snails were maintained beyond the exponential growth phase until 71 days post-hatch for histological examination.

Histology
The cerebral ganglia and olfactory nerves of all snails were removed in Tris-buffered saline (80 mmol l–1 NaCl, 4 mmol l–1KCl, 8 mmol l–1CaCl2, 5 mmol l–1MgCl2, 5 mmol l–1Tris, pH 7.8) and fixed overnight in 4% formalin in 0.1 mol l–1 phosphate buffer (PB). After fixation, ganglia were stored for a day in PB containing 2% Triton X-100 and 0.1% sodium azide. Ganglia from all snails were processed to show fluorescence of the nuclear DNA. They were placed in 1% RNase (Sigma) in PBS at 30 °C for 1 h and then placed in Sytox Green (Molecular Probes/Invitrogen, 5 mmol l–1solution) diluted to 1:10,000 in 10 mmol l–1 Tris, 1 mmol l–1 EGTA, pH 7, for 30 min. Several of the Sytox-Green-stained ganglia were also processed using previously described techniques (Longley and Longley, 1986) with antibodies to anti-phospho-histone H3 (Upstate Biotechnology, cat. #06-570) and the peptide neurotransmitters SCP (University of Washington, Masinovsky et al., 1988), TPep (from Dennis Willows, Friday Harbor Laboratories), and FMRFamide (Immunostar) all diluted 1:200. The procerebrum of Limax maximus was dissected in HEPES buffered saline (70 mmol l–1 NaCl, 2 mmol l–1 KCl, 4.9 mmol l–1 CaCl2 4.7 mmol l–1 MgCl2, 5 mmol l–1 HEPES, pH 7.8), fixed overnight in 4% formalin in 0.1 mmol l–1 PB, and then processed with Sytox Green and TPep antibodies prior to anti-phospho-histone H3 antibodies. Secondary antibodies from Jackson ImmunoResearch were tetramethyl rhodamine isothiocyanate (TRITC) at 1:200 dilution. After treatment with Sytox Green and antibodies, ganglia were washed for one day in PBS containing 2% Triton X-100 and 0.1% sodium azide and then washed in reverse osmosis water to remove sodium azide. Ganglia were mounted in glycerol with 0.5% n-propyl gallate (Giloh and Sedat, 1982) for examination with a confocal microscope.

Microscopy
For consistency, all images are oriented as dorsal, right procerebrum views with anterior to the left or up. Microscopy of the green fluorescence of Sytox Green and the red fluorescence of TRITC, the secondary antibody for anti-phospho-histone H3, SCP, TPep, and FMRFamide, was with a Biorad Radiance 2000 confocal microscope. Confocal microscope stacks were analyzed using ImageJ ver. 1.41o and Photoshop Extended C3.

Estimate of neuronal volume
The volume occupied by the neuronal nucleus in the procerebrum was measured indirectly by first estimating the maximum nuclear area. Measurements of nuclear area were quantified with Photoshop C3 Extended software from confocal frames made with a 60× 1.4 na objective. To determine the maximum area of optically sectioned nuclei in a procerebrum, 80 randomly selected measurements of area were ranked in descending order and truncated to the largest 60 nuclei. These areas decreased linearly with rank and were fitted with a straight line to estimate the maximum area. Polar and equatorial axis lengths of a prolate spheroid approximating the shape of the nuclei were calculated from the mean of these maximum nuclear areas. From these lengths a nuclear volume was estimated. A maximum neuronal volume was estimated by multiplying the nuclear volume by the ratio of the frame area to the sum of in-focus areas of nuclei in the frame.

Measurement of procerebral volume
To calculate the neuronal volume of the procerebrum, confocal stacks in ganglia treated with Sytox Green were made with a 20× objective with z steps of 2 μm for small ganglia and 4 μm for larger ganglia. In large ganglia, laser intensity was varied during the scan to maintain a constant exposure. The procerebral area containing neurons could be recognized in each frame by the fluorescence of the densely packed neuronal nuclei (supplemental video 1 available at http://www.biobull.org/content/supplemental). The neuronal volume of the procerebrum was measured using ImageJ by summing the neuronal area of individual frames of the confocal stack and then multiplying by the z step of the stack. The number of neurons in each procerebrum was estimated by dividing the procerebral volume by the volume of an individual neuron. To avoid bias, measurements of procerebral areas were not repeated.

Statistics
Measurements were graphed with Graphpad Prism, ver. 5.0c, which gave statistics of curves fitted to the data.

Histology
The cerebral ganglia and olfactory nerves of all snails were removed in Tris-buffered saline (80 mmol l–1 NaCl, 4 mmol l–1KCl, 8 mmol l–1CaCl2, 5 mmol l–1MgCl2, 5 mmol l–1Tris, pH 7.8) and fixed overnight in 4% formalin in 0.1 mol l–1 phosphate buffer (PB). After fixation, ganglia were stored for a day in PB containing 2% Triton X-100 and 0.1% sodium azide. Ganglia from all snails were processed to show fluorescence of the nuclear DNA. They were placed in 1% RNase (Sigma) in PBS at 30 °C for 1 h and then placed in Sytox Green (Molecular Probes/Invitrogen, 5 mmol l–1solution) diluted to 1:10,000 in 10 mmol l–1 Tris, 1 mmol l–1 EGTA, pH 7, for 30 min. Several of the Sytox-Green-stained ganglia were also processed using previously described techniques (Longley and Longley, 1986) with antibodies to anti-phospho-histone H3 (Upstate Biotechnology, cat. #06-570) and the peptide neurotransmitters SCP (University of Washington, Masinovsky et al., 1988), TPep (from Dennis Willows, Friday Harbor Laboratories), and FMRFamide (Immunostar) all diluted 1:200. The procerebrum of Limax maximus was dissected in HEPES buffered saline (70 mmol l–1 NaCl, 2 mmol l–1 KCl, 4.9 mmol l–1 CaCl2 4.7 mmol l–1 MgCl2, 5 mmol l–1 HEPES, pH 7.8), fixed overnight in 4% formalin in 0.1 mmol l–1 PB, and then processed with Sytox Green and TPep antibodies prior to anti-phospho-histone H3 antibodies. Secondary antibodies from Jackson ImmunoResearch were tetramethyl rhodamine isothiocyanate (TRITC) at 1:200 dilution. After treatment with Sytox Green and antibodies, ganglia were washed for one day in PBS containing 2% Triton X-100 and 0.1% sodium azide and then washed in reverse osmosis water to remove sodium azide. Ganglia were mounted in glycerol with 0.5% n-propyl gallate (Giloh and Sedat, 1982) for examination with a confocal microscope.

Microscopy
For consistency, all images are oriented as dorsal, right procerebrum views with anterior to the left or up. Microscopy of the green fluorescence of Sytox Green and the red fluorescence of TRITC, the secondary antibody for anti-phospho-histone H3, SCP, TPep, and FMRFamide, was with a Biorad Radiance 2000 confocal microscope. Confocal microscope stacks were analyzed using ImageJ ver. 1.41o and Photoshop Extended C3.

Estimate of neuronal volume
The volume occupied by the neuronal nucleus in the procerebrum was measured indirectly by first estimating the maximum nuclear area. Measurements of nuclear area were quantified with Photoshop C3 Extended software from confocal frames made with a 60× 1.4 na objective. To determine the maximum area of optically sectioned nuclei in a procerebrum, 80 randomly selected measurements of area were ranked in descending order and truncated to the largest 60 nuclei. These areas decreased linearly with rank and were fitted with a straight line to estimate the maximum area. Polar and equatorial axis lengths of a prolate spheroid approximating the shape of the nuclei were calculated from the mean of these maximum nuclear areas. From these lengths a nuclear volume was estimated. A maximum neuronal volume was estimated by multiplying the nuclear volume by the ratio of the frame area to the sum of in-focus areas of nuclei in the frame.

Measurement of procerebral volume
To calculate the neuronal volume of the procerebrum, confocal stacks in ganglia treated with Sytox Green were made with a 20× objective with z steps of 2 μm for small ganglia and 4 μm for larger ganglia. In large ganglia, laser intensity was varied during the scan to maintain a constant exposure. The procerebral area containing neurons could be recognized in each frame by the fluorescence of the densely packed neuronal nuclei (supplemental video 1 available at http://www.biobull.org/content/supplemental). The neuronal volume of the procerebrum was measured using ImageJ by summing the neuronal area of individual frames of the confocal stack and then multiplying by the z step of the stack. The number of neurons in each procerebrum was estimated by dividing the procerebral volume by the volume of an individual neuron. To avoid bias, measurements of procerebral areas were not repeated.

Statistics
Measurements were graphed with Graphpad Prism, ver. 5.0c, which gave statistics of curves fitted to the data.

0/5000

จาก: -

เป็น: -

ผลลัพธ์ (ไทย) 1: [สำเนา]

คัดลอก!

Collection and culture of snailsIndividuals of Helix aspersa were collected from local gardens in three ways. Eggs were collected in the field in November and brought to the laboratory where they were allowed to hatch. The following year adult snails were collected from the field and brought to the laboratory where they were maintained in aquaria on garden soil and fed lettuce. Eggs from these snails were collected before they hatched. Also, snails were collected in the field for immediate dissection in March (weight 0.35 g, 1.77 g, 2.74 g, 4.64 g, 10.6 g) and in June (2.55 g, 6.35 g, 9.82 g). Both field-collected eggs and eggs from aquaria were hatched in petri dishes. Limax maximus eggs were collected locally and cultured in the laboratory similarly to H. aspersa. Hatching in H. aspersa required about 16–20 days at room temperature, after which the snails were fed lettuce and maintained in petri dishes on moist filter paper. Filter paper and lettuce were changed daily. During the exponential growth phase, snails from three clutches hatched in the laboratory were weighed at 1, 9, 18, 35, and 49 days, n = 15, 16, 30, 23, and 14, respectively. In all cases, snail weight was wet weight with shell. In addition, laboratory-raised snails were maintained beyond the exponential growth phase until 71 days post-hatch for histological examination.HistologyThe cerebral ganglia and olfactory nerves of all snails were removed in Tris-buffered saline (80 mmol l–1 NaCl, 4 mmol l–1KCl, 8 mmol l–1CaCl2, 5 mmol l–1MgCl2, 5 mmol l–1Tris, pH 7.8) and fixed overnight in 4% formalin in 0.1 mol l–1 phosphate buffer (PB). After fixation, ganglia were stored for a day in PB containing 2% Triton X-100 and 0.1% sodium azide. Ganglia from all snails were processed to show fluorescence of the nuclear DNA. They were placed in 1% RNase (Sigma) in PBS at 30 °C for 1 h and then placed in Sytox Green (Molecular Probes/Invitrogen, 5 mmol l–1solution) diluted to 1:10,000 in 10 mmol l–1 Tris, 1 mmol l–1 EGTA, pH 7, for 30 min. Several of the Sytox-Green-stained ganglia were also processed using previously described techniques (Longley and Longley, 1986) with antibodies to anti-phospho-histone H3 (Upstate Biotechnology, cat. #06-570) and the peptide neurotransmitters SCP (University of Washington, Masinovsky et al., 1988), TPep (from Dennis Willows, Friday Harbor Laboratories), and FMRFamide (Immunostar) all diluted 1:200. The procerebrum of Limax maximus was dissected in HEPES buffered saline (70 mmol l–1 NaCl, 2 mmol l–1 KCl, 4.9 mmol l–1 CaCl2 4.7 mmol l–1 MgCl2, 5 mmol l–1 HEPES, pH 7.8), fixed overnight in 4% formalin in 0.1 mmol l–1 PB, and then processed with Sytox Green and TPep antibodies prior to anti-phospho-histone H3 antibodies. Secondary antibodies from Jackson ImmunoResearch were tetramethyl rhodamine isothiocyanate (TRITC) at 1:200 dilution. After treatment with Sytox Green and antibodies, ganglia were washed for one day in PBS containing 2% Triton X-100 and 0.1% sodium azide and then washed in reverse osmosis water to remove sodium azide. Ganglia were mounted in glycerol with 0.5% n-propyl gallate (Giloh and Sedat, 1982) for examination with a confocal microscope.MicroscopyFor consistency, all images are oriented as dorsal, right procerebrum views with anterior to the left or up. Microscopy of the green fluorescence of Sytox Green and the red fluorescence of TRITC, the secondary antibody for anti-phospho-histone H3, SCP, TPep, and FMRFamide, was with a Biorad Radiance 2000 confocal microscope. Confocal microscope stacks were analyzed using ImageJ ver. 1.41o and Photoshop Extended C3.Estimate of neuronal volumeThe volume occupied by the neuronal nucleus in the procerebrum was measured indirectly by first estimating the maximum nuclear area. Measurements of nuclear area were quantified with Photoshop C3 Extended software from confocal frames made with a 60× 1.4 na objective. To determine the maximum area of optically sectioned nuclei in a procerebrum, 80 randomly selected measurements of area were ranked in descending order and truncated to the largest 60 nuclei. These areas decreased linearly with rank and were fitted with a straight line to estimate the maximum area. Polar and equatorial axis lengths of a prolate spheroid approximating the shape of the nuclei were calculated from the mean of these maximum nuclear areas. From these lengths a nuclear volume was estimated. A maximum neuronal volume was estimated by multiplying the nuclear volume by the ratio of the frame area to the sum of in-focus areas of nuclei in the frame.Measurement of procerebral volumeTo calculate the neuronal volume of the procerebrum, confocal stacks in ganglia treated with Sytox Green were made with a 20× objective with z steps of 2 μm for small ganglia and 4 μm for larger ganglia. In large ganglia, laser intensity was varied during the scan to maintain a constant exposure. The procerebral area containing neurons could be recognized in each frame by the fluorescence of the densely packed neuronal nuclei (supplemental video 1 available at http://www.biobull.org/content/supplemental). The neuronal volume of the procerebrum was measured using ImageJ by summing the neuronal area of individual frames of the confocal stack and then multiplying by the z step of the stack. The number of neurons in each procerebrum was estimated by dividing the procerebral volume by the volume of an individual neuron. To avoid bias, measurements of procerebral areas were not repeated.

Statistics
Measurements were graphed with Graphpad Prism, ver. 5.0c, which gave statistics of curves fitted to the data.

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:[สำเนา]

คัดลอก!

การเก็บและวัฒนธรรมของหอยทากบุคคลของ Helix aspersa ถูกเก็บรวบรวมจากสวนท้องถิ่นในสามวิธี
ไข่ถูกเก็บไว้ในสนามในเดือนพฤศจิกายนและนำไปยังห้องปฏิบัติการที่พวกเขาได้รับอนุญาตให้ฟักที่ หอยทากผู้ใหญ่ในปีต่อไปที่ถูกเก็บรวบรวมจากสนามและนำไปยังห้องปฏิบัติการที่พวกเขาถูกเก็บรักษาไว้ในตู้บนดินสวนผักกาดหอมและอาหาร ไข่จากหอยทากเหล่านี้ถูกเก็บก่อนที่พวกเขาฟัก นอกจากนี้หอยทากถูกเก็บไว้ในสนามสำหรับการผ่าทันทีในเดือนมีนาคม (น้ำหนัก 0.35 กรัม 1.77 กรัม 2.74 กรัม 4.64 กรัม 10.6 กรัม) และในเดือนมิถุนายน (2.55 กรัม 6.35 กรัม 9.82 กรัม) ทั้งไข่ภาคสนามเก็บรวบรวมและไข่จากตู้ฟักในอาหารเลี้ยงเชื้อ Limax สังฆไข่ที่ถูกเก็บรวบรวมในประเทศและเพาะเลี้ยงในห้องปฏิบัติการในทำนองเดียวกันกับเอช aspersa ฟักในเอช aspersa ต้องเกี่ยวกับ 16-20 วันที่อุณหภูมิห้องหลังจากที่หอยทากได้รับการเลี้ยงดูและการบำรุงรักษาผักกาดหอมในอาหารเลี้ยงเชื้อบนกระดาษกรองชื้น กระดาษกรองและผักกาดหอมมีการเปลี่ยนแปลงทุกวัน ในระหว่างขั้นตอนการเจริญเติบโตของหอยทากจากสามเงื้อมมือฟักในห้องปฏิบัติการได้รับการชั่งน้ำหนักที่ 1, 9, 18, 35, และ 49 วัน, n = 15, 16, 30, 23, และ 14 ตามลำดับ ในทุกกรณีน้ำหนักหอยทากเป็นน้ำหนักเปียกด้วยเปลือก นอกจากนี้หอยทากห้องปฏิบัติการยกถูกเก็บรักษาเกินกว่าระยะการเจริญเติบโตจนถึง 71 วันหลังฟักสำหรับการตรวจสอบเนื้อเยื่อ. จุลปมประสาทสมองและเส้นประสาทการดมกลิ่นของหอยทากทั้งหมดถูกถอดออกในน้ำเกลือทริบัฟเฟอร์ (80 มิลลิโมล l-1 โซเดียมคลอไรด์ 4 มิลลิโมล l-1KCl 8 มิลลิโมล l-1CaCl2 5 มิลลิโมล l-1MgCl2 5 มิลลิโมล l-1Tris ค่า pH 7.8) และคงค้างคืนในฟอร์มาลิน 4% ใน 0.1 mol l-1 ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PB) หลังจากที่ตรึงปมถูกเก็บไว้เป็นวันที่มี PB 2% Triton X-100 และ 0.1% โซเดียมเอไซด์ ปมจากหอยทากทั้งหมดที่ถูกประมวลผลเพื่อแสดงให้เห็นการเรืองแสงของดีเอ็นเอนิวเคลียร์ พวกเขาถูกวางไว้ใน 1% RNase (ซิกม่า) ในพีบีเอสที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงแล้ววางไว้ในกรีน Sytox (วัดระดับโมเลกุล / Invitrogen 5 มิลลิโมล l-1solution) ลดลงเหลือ 1: 10,000 ใน 10 มิลลิโมล l-1 ทริส, 1 มิลลิโมล l-1 EGTA พีเอช 7 เป็นเวลา 30 นาที หลายปม Sytox สีเขียวสีที่ถูกประมวลผลยังมีการใช้เทคนิคที่อธิบายไว้ก่อนหน้า (Longley และ Longley, 1986) ที่มีแอนติบอดีเพื่อต่อต้าน phospho-สโตน H3 (ตอนเหนือของมลรัฐเทคโนโลยีชีวภาพแมว. # 06-570) และสารสื่อประสาท SCP เปปไทด์ (มหาวิทยาลัย . วอชิงตัน Masinovsky, et al, 1988) TPep (จากเดนนิสวิลโลว์เดย์ฮาร์เบอร์ห้องปฏิบัติการ) และ FMRFamide (Immunostar) ทั้งหมดเจือจาง 1: 200 procerebrum ของ Limax สังฆถูกชำแหละใน HEPES บัฟเฟอร์น้ำเกลือ (70 มิลลิโมล l-1 โซเดียมคลอไรด์, 2 มิลลิโมล l-1 KCl 4.9 มิลลิโมล l-1 CaCl2 4.7 มิลลิโมล l-1 MgCl2 5 มิลลิโมล l-1 HEPES ค่า pH 7.8) คงค้างคืนในฟอร์มาลิน 4% ใน 0.1 มิลลิโมลต่อลิตร PB-1 และการประมวลผลแล้วกับ Sytox สีเขียวและแอนติบอดี TPep ก่อนที่จะ H3 แอนติบอดีต่อต้าน phospho-สโตน แอนติบอดีรองจากแจ็คสันเป็น ImmunoResearch tetramethyl rhodamine isothiocyanate (TRITC) 1: 200 เจือจาง หลังการรักษาด้วย Sytox สีเขียวและแอนติบอดีปมถูกล้างเป็นเวลาหนึ่งวันในพีบีเอสที่มี 2% Triton X-100 และโซเดียมเอไซด์ 0.1% และล้างแล้วในน้ำการ Reverse Osmosis การลบ azide โซเดียม ปมที่ถูกติดตั้งในกลีเซอรอล 0.5% gallate n-propyl (คือกิโลห์และ Sedat, 1982) สำหรับการตรวจสอบด้วยกล้องจุลทรรศน์ confocal. กล้องจุลทรรศน์สำหรับความสอดคล้องภาพทั้งหมดจะเน้นเป็นหลังขวา procerebrum มุมมองที่มีหน้าไปทางซ้ายหรือขึ้น กล้องจุลทรรศน์ของการเรืองแสงสีเขียวของ Sytox สีเขียวและสีแดงเรืองแสงของ TRITC, แอนติบอดีรองสำหรับการป้องกัน phospho-สโตน H3, SCP, TPep และ FMRFamide เป็นกับ Biorad Radiance 2000 กล้องจุลทรรศน์ confocal กองกล้องจุลทรรศน์ confocal ถูกวิเคราะห์โดยใช้ ImageJ เวอร์ชั่น 1.41o และ Photoshop ขยาย C3. ประมาณการของปริมาณประสาทปริมาณครอบครองโดยนิวเคลียสของเซลล์ประสาทใน procerebrum ถูกวัดทางอ้อมโดยการประเมินครั้งแรกในพื้นที่นิวเคลียร์สูงสุด การวัดพื้นที่นิวเคลียร์ถูกวัดด้วย Photoshop C3 ซอฟต์แวร์ขยายจากเฟรม confocal ทำกับ 60 × 1.4 วัตถุประสงค์นา เพื่อตรวจสอบพื้นที่มากที่สุดของนิวเคลียสแบ่งสายตาใน procerebrum 80 วัดการสุ่มเลือกพื้นที่ที่ถูกจัดอันดับอยู่ในลำดับถัดลงมาและตัดที่ใหญ่ที่สุด 60 นิวเคลียส พื้นที่เหล่านี้ลดลงเป็นเส้นตรงกับตำแหน่งและได้รับการติดตั้งเป็นเส้นตรงในการประเมินพื้นที่มากที่สุด ความยาวแกนขั้วโลกและเส้นศูนย์สูตรของลูกกลม prolate ใกล้เคียงกับรูปทรงของนิวเคลียสที่จะถูกคำนวณจากค่าเฉลี่ยของพื้นที่นิวเคลียร์สูงสุดเหล่านี้ จากความยาวเหล่านี้มีปริมาณนิวเคลียร์เป็นที่คาดกัน ปริมาณประสาทสูงสุดอยู่ที่ประมาณโดยการคูณปริมาณนิวเคลียร์โดยอัตราส่วนของพื้นที่กรอบผลรวมของพื้นที่ในจุดสำคัญของนิวเคลียสในกรอบ. วัดปริมาณ procerebral ในการคำนวณปริมาณเส้นประสาทของ procerebrum ที่กอง confocal ในปมประสาทรับการรักษา Sytox กับกรีนที่ทำกับ 20 ×วัตถุประสงค์ด้วยขั้นตอนของซี 2 ไมโครเมตรสำหรับปมขนาดเล็กและขนาด 4 ไมครอนสำหรับปมที่มีขนาดใหญ่ ในปมที่มีขนาดใหญ่ความเข้มของเลเซอร์ได้แตกต่างกันในระหว่างการสแกนการรักษาอย่างต่อเนื่องการสัมผัส พื้นที่ procerebral ที่มีเซลล์ประสาทจะได้รับการยอมรับในแต่ละเฟรมโดยการเรืองแสงของนิวเคลียสแน่นขนัดเส้นประสาท (วิดีโอเพิ่มเติมสามารถดูได้ที่ 1 http://www.biobull.org/content/supplemental) ปริมาณของเส้นประสาท procerebrum ถูกวัดโดยใช้ ImageJ จากข้อสรุปเขตพื้นที่ประสาทของเฟรมของแต่ละกอง confocal แล้วคูณด้วยขั้นตอนที่ซีของสแต็ค จำนวนของเซลล์ประสาทในแต่ละ procerebrum เป็นที่คาดกันโดยการหารปริมาณ procerebral โดยปริมาตรของเซลล์ประสาทของแต่ละบุคคล เพื่อหลีกเลี่ยงอคติวัดพื้นที่ procerebral ไม่ได้ซ้ำแล้วซ้ำอีก. สถิติวัดถูกกราฟกับ GraphPad ปริซึมเวอร์ชั่น 5.0c ซึ่งทำให้สถิติของเส้นโค้งพอดีกับข้อมูล

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:[สำเนา]

คัดลอก!

คอลเลกชันและวัฒนธรรมของหอยทาก Helix Aspersa
บุคคลที่เก็บจากสวนท้องถิ่นใน 3 วิธี ไข่ที่เก็บในฟิลด์ในเดือนพฤศจิกายน และนำตัวไปยังห้องปฏิบัติการที่พวกเขาได้รับอนุญาตให้ฟัก ปีต่อไปนี้ผู้ใหญ่หอยทากเก็บมาจากสนามและนำตัวไปยังห้องปฏิบัติการที่พวกเขาถูกเก็บรักษาไว้ใน วาเรียในดินสวนกินผักกาดหอมไข่หอยเหล่านี้ถูกเก็บก่อนที่จะฟักออกมา นอกจากนี้ หอย เก็บข้อมูลในฟิลด์การทันทีในเดือนมีนาคม ( น้ำหนัก 0.35 g 1.77 กรัม 2.74 กรัม 4.64 กรัม , 10.6 กรัม และในเดือนมิถุนายน ( 2.55 g , 6.35 กรัม 9.82 กรัม ) ทั้งสนามเก็บไข่และไข่จากวาเรียถูกฟักในจานเพาะเลี้ยง limax Maximus ไข่เก็บภายใน และเพาะเลี้ยงในห้องปฏิบัติการ 3 . Aspersa .ฟักในประมาณ 16 – 20 . Aspersa ต้องวัน ที่อุณหภูมิห้อง หลังจากที่หอยทากกินผักกาดหอม และรักษาไว้ในจานเลี้ยงเชื้อบนกระดาษกรองที่ชุ่มชื้น กระดาษกรอง และผักกาดหอมถูกเปลี่ยนทุกวัน ในระหว่างขั้นตอนการเจริญเติบโตของหอยทากจากสามก้านฟักในห้องปฏิบัติการมีน้ำหนัก 1 , 9 , 18 , 35 และ 49 วัน , n = 15 , 16 , 30 , 20 และ 14 ตามลำดับ ในทุกกรณีน้ำหนักน้ำหนักเปียกกับหอยทากมีเปลือก นอกจากนี้ ห้องปฏิบัติการเลี้ยงหอยทากยังคงเกินระยะการเจริญเติบโตจน 71 ฟักโพสต์วันครีบ

และเนื้อเยื่อสมองปมประสาทเส้นประสาทรับกลิ่นทั้งหมดถูกลบออกจากหอยทากในกรดเกลือ ( 80 mmol l ( 1 เกลือ , 4 mmol l ( 1kcl 8 mmol l ( 1cacl2 5 mmol l - 1mgcl2 5 mmol l ( 1tris pH 78 ) และการแก้ไขคืน 4% ฟอร์มาลินใน 0.1 โมล แอล– 1 ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PB ) หลังจากการดองเก็บไว้สำหรับวันที่ 1 , ตะกั่วที่มี 2 % Triton X-100 และ 0.1% sodium ไซด์ . ปมประสาทจากหอยทากที่ถูกประมวลผลเพื่อแสดงการเรืองแสงของดีเอ็นเอนิวเคลียร์ พวกเขาอยู่ใน 1% เลส ( Sigma ) ในช่องที่ 30 ° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง แล้ววางใน sytox สีเขียว ( โมเลกุล / Invitrogen ) ,

การแปล กรุณารอสักครู่..

ภาษาอื่น ๆ

การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.