the manufacturer. Other serum-speci

the manufacturer. Other serum-specific markers were estimated by LabGenomics Clinical Laboratories (Seoul, Korea). Total serum testosterone concentration was measured by electrochemilumino immunoassay (ECLIA) using an Elecsys Testosterone kit (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) by the Samkwang Medical Laboratory (Seoul, Korea).

2.5. Analysis of gene expressions by real-time RT-PCR in testicular tissues

To address the effects of SME on the steroidogenesis in Leydig cells, testicular mRNA levels of the steroidogenic pathway genes,
17b-hydroxysteroid dehydrogenase type 3 (17b-HSD3), 3b- hydroxysteroid dehydrogenase type 6 (3b-HSD6), steroidogenic acute regulatory protein (StAR), and NR5A1 [= steroidogenic factor
1(SF1)] were analyzed by real-time RT-PCR. Peroxiredoxin (Prdx) family genes function in the modulation of hydrogen peroxide sig- naling in response to stress factors. Prdx 4 is a thioredoxin-depen- dant peroxidase, expressed only in spermatogenic cells in the testis (Iuchi et al., 2009). To address the antioxidative response in male germ cells in response to stress factors testicular Prdx4 mRNA was examined. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) was used as an endogenous control.
Total RNA was extracted from frozen testis (n = 10) using TRI re- agent (Molecular Research Center, Cincinnati, OH). RNA samples (1 lg) were reverse transcribed using murine leukaemia virus re- verse transcriptase, according to the standard protocol of the sup-
plier (Applied Biosystems, Foster City, CA). Primers were presented in Table 1. All primer sets were validated to ensure efficient ampli- fication of a single product before use in assays. Real-time poly- merase chain reaction (PCR) was performed using SYBR Premix EX Taq kit according to the manufacturer’s instructions (Takara, Shiga, Japan) in the MyiQ real-time PCR detection system (Bio- rad, Hercules, CA). Relative mRNA levels were calculated using
the comparative 2 DDCt method.

2.6. Histological observation and analysis of testes

Testes were fixed in Bouin’s solution (Sigma) for 24 h. After dehydration, tissues were cleared with xylene and embedded in Paraplast (Leica Biosystems, DeMeen, Netherlands). Paraffin blocks were sectioned as 5 lm, and the sections onto poly-L-lysine-coated slides, deparaffinated and rehydrated in distiled water. After hema-
toxylin-eosin (HE) staining and clearing with a graded ethanol ser- ies and xylene, slides were permanently mounted. Observation and microphotography were conducted using a DM2000 microscope equipped with a DFC320 digital imaging system (Lieca, Heerbrugg, Switzerlend). Digital images of testis sections were tiled and recon- structed. Abnormal seminiferous tubules including Sertoli cells- only, spermatogenic arrest, and germ cell detachment were

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผู้ผลิต เครื่องหมายอื่น ๆ specific เซรั่มถูกประเมิน โดยห้องทดลองทางคลินิก LabGenomics (โซล เกาหลี) ความเข้มข้นของฮอร์โมนเพศชายรวมเซรั่มถูกวัด โดย electrochemilumino immunoassay (ECLIA) การใช้การชุด Elecsys ฮอร์โมนเพศชาย (วินิจฉัยโร มา เยอรมนี) โดยห้องปฏิบัติการ Samkwang ทางการแพทย์ (โซล เกาหลี)2.5 การวิเคราะห์ยีนนิพจน์โดย RT-PCR แบบเรียลไทม์ในเนื้อเยื่อ testicularที่อยู่ผลของ SME steroidogenesis ในเซลล์ Leydig, testicular ระดับ mRNA ของยีนทางเดิน steroidogenic17b hydroxysteroid dehydrogenase ชนิด 3 (17b-HSD3), 3b hydroxysteroid dehydrogenase พิมพ์ 6 (3b-HSD6), โปรตีนกำกับดูแล steroidogenic เฉียบพลัน (ดาว), และ NR5A1 [=ตัวคูณ steroidogenic1(SF1)] ได้วิเคราะห์ โดย RT-PCR แบบเรียลไทม์ ฟังก์ชั่นครอบครัวยีน Peroxiredoxin (Prdx) ในเอ็มของ naling sig ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในการตอบสนองความเครียดปัจจัย Prdx 4 เป็น peroxidase เป็น thioredoxin-depen-dant แสดงเฉพาะในเซลล์ spermatogenic ใน testis (Iuchi et al., 2009) Testicular Prdx4 mRNA ถูกตรวจสอบเพื่อการตอบสนอง antioxidative ชายเจิร์มเซลล์ตอบสนองต่อความเครียดปัจจัย Dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต (GAPDH) ถูกใช้เป็นตัวควบคุม endogenousอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจาก testis แช่แข็ง (n = 10) ใช้ตรีใหม่แทน (ศูนย์วิจัยโมเลกุล ซินซินนาติ OH) ตัวอย่างอาร์เอ็นเอ (1 lg) ถูกกลับใช้ murine leukaemia ไวรัสใหม่ข้อ transcriptase ทับศัพท์ตามโพรโทคอลมาตรฐานดื่ม-plier (Biosystems ใช้ ฟอสเตอร์ซิตี้ CA) ไพรเมอร์ได้แสดงในตารางที่ 1 ชุดรองพื้นทั้งหมดถูกตรวจสอบเพื่อให้ fication ampli efficient ผลิตภัณฑ์เดียวก่อนใช้ใน assays ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลี merase แบบเรียลไทม์ (PCR) ถูกดำเนินการโดยใช้ SYBR Premix EX Taq ชุดตามคำแนะนำของผู้ผลิต (Takara ชิงะ ญี่ปุ่น) ใน MyiQ แบบ real-time PCR ตรวจหาระบบ (Bio rad เฮอร์คิวลิส แคลิฟอร์เนีย) สัมพันธ์ระดับ mRNA ถูกคำนวณโดยใช้เปรียบเทียบ 2 DDCt วิธีการ2.6. สรีรวิทยาการสังเกตและวิเคราะห์ของลิ้มลิ้มลองได้ fixed ในโซลูชันของ Bouin (ซิกมา) ใน 24 ชม หลังจากการคายน้ำ เนื้อเยื่อถูกล้างกับพารา และฝังตัวอยู่ใน Paraplast (Biosystems ไล DeMeen เนเธอร์แลนด์) บล็อก Paraffin ได้จัดแบ่งเป็นส่วน ๆ 5 lm และส่วนภาพนิ่งโพลี-L-ไลซีนเคลือบ deparaffinated และ rehydrated ในน้ำ distiled หลังจาก hema-toxylin-eosin (เขา) ย้อมสี และล้างกับ ies-ser ที่มีการจัดระดับเอทานอล และไซ ภาพนิ่งถูกติดตั้งอยู่อย่างถาวร สังเกตและ microphotography ได้ดำเนินการโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ DM2000 พร้อมกับ DFC320 ดิจิตอลถ่ายภาพระบบ (Lieca, Heerbrugg, Switzerlend) ภาพดิจิตอลของ testis ส่วนถูกเรียงแบบกระเบื้องและบรรทัดการกระทบยอด-structed ปกติ seminiferous tubules ที่ Sertoli เซลล์-เท่านั้น จับ spermatogenic และปลดเจิร์มเซลล์ได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผู้ผลิต. ไฟซีรั่มที่ระบุเครื่องหมายคอื่น ๆ ที่ถูกประเมินโดย LabGenomics ห้องปฏิบัติการทางคลินิก (กรุงโซลประเทศเกาหลี) ซีรั่มเข้มข้นของฮอร์โมนเพศชายทั้งหมดโดยวัดจาก immunoassay electrochemilumino (ECLIA) โดยใช้ชุดฮอร์โมนเพศชาย Elecsys (Roche Diagnostics, ไฮม์, เยอรมนี) โดย Samkwang ห้องปฏิบัติการทางการแพทย์ (กรุงโซลประเทศเกาหลี). 2.5 การวิเคราะห์ยีนของการแสดงออกโดย real-time RT-PCR ในเนื้อเยื่ออัณฑะเพื่อแก้ไขผลกระทบของSME ใน steroidogenesis ในเซลล์ Leydig ระดับ mRNA อัณฑะของยีนเดิน steroidogenic, ประเภท dehydrogenase-17b hydroxysteroid 3 (17b-HSD3) 3b- ประเภท dehydrogenase hydroxysteroid 6 (3b-HSD6) steroidogenic เฉียบพลันโปรตีนการกำกับดูแล (ดาว) และ NR5A1 [= ปัจจัย steroidogenic 1 (SF1)] การวิเคราะห์แบบ real-time RT-PCR peroxiredoxin (Prdx) ยีนครอบครัวทำงานในการปรับ naling ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ลายเซ็นในการตอบสนองต่อความเครียดปัจจัย Prdx 4 เป็น Thioredoxin-depen- peroxidase Dant แสดงเฉพาะในเซลล์ spermatogenic ในอัณฑะ (Iuchi et al., 2009) ที่อยู่ในการตอบสนองต้านอนุมูลอิสระในเซลล์สืบพันธุ์ชายในการตอบสนองต่อความเครียดปัจจัยอัณฑะ Prdx4 mRNA ถูกตรวจสอบ dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต (GAPDH) ถูกใช้เป็นตัวควบคุมภายนอก. รวม RNA ถูกสกัดจากลูกอัณฑะแช่แข็ง (n = 10) โดยใช้ตัวแทน TRI ใหม่ (โมเลกุลศูนย์วิจัย Cincinnati, OH) ตัวอย่างอาร์เอ็นเอ (1 จี) ได้รับการถ่ายทอดกลับใช้ transcriptase ไวรัสโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวหมากลอนใหม่ตามโปรโตคอลมาตรฐานของสนับสนุนคีม(Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) ไพรเมอร์ที่มีการนำเสนอในตารางที่ 1 ชุดไพรเมอร์ที่ได้รับการตรวจสอบทั้งหมดเพื่อให้แน่ใจว่า EF ไฟเพียงพอตะแกรงไอออนบวกของสายผลิตภัณฑ์เดียวก่อนที่จะใช้ในการตรวจ Real-time ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลี merase (PCR) ได้รับการดำเนินการโดยใช้ SYBR พรีมิกซ์ EX ชุด Taq ตามคำแนะนำของผู้ผลิต (Takara ชิ, ญี่ปุ่น) ใน MyiQ แบบ real-time PCR ระบบตรวจจับ (Bio- ล้อ, ดาว, CA) ระดับ mRNA ญาติถูกคำนวณโดยใช้เปรียบเทียบ2 วิธี DDCt. 2.6 เนื้อเยื่อสังเกตและการวิเคราะห์ของอัณฑะอัณฑะถูกไฟ xed ในการแก้ปัญหาของ Bouin (ซิกม่า) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากการคายน้ำเนื้อเยื่อเคลียร์กับไซลีนและฝังตัวอยู่ใน Paraplast (Leica Biosystems, DeMeen, เนเธอร์แลนด์) Paraf ไฟบล็อก n ถูกแบ่งเป็น 5 ไมครอนและส่วนบนโพลี-L-ไลซีนเคลือบสไลด์ deparaf ไฟจากเศษและคืนรูปในน้ำ distiled หลังจาก hema- toxylin-Eosin (HE) การย้อมสีและการล้างด้วยโอบอุ้มเอทานอลอย่างช้า ๆ เซิฟเวอร์ไซลีนและภาพนิ่งที่ถูกติดตั้งถาวร การสังเกตและ microphotography ถูกดำเนินการโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ DM2000 พร้อมกับระบบการถ่ายภาพดิจิตอล DFC320 (Lieca, Heerbrugg, Switzerlend) ภาพดิจิตอลส่วนอัณฑะถูกกระเบื้องและ recon- structed หลอดสร้างอสุจิผิดปกติรวมทั้ง Sertoli cells- เท่านั้นจับกุม spermatogenic และออกเซลล์สืบพันธุ์ได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผู้ผลิต อื่น ๆจึงได้ประมาณ C เซรั่มกาเครื่องหมายโดย labgenomics ห้องปฏิบัติการทางคลินิก ( โซล เกาหลี ) เซรั่มเข้มข้นฮอร์โมนเพศชายถูกวัดโดย electrochemilumino Immunoassay ( eclia ) โดยใช้ Elecsys ฮอร์โมนเพศชาย Kit ( โรชวินิจฉัย Mannheim , เยอรมัน ) โดย samkwang ห้องปฏิบัติการทางการแพทย์ ( โซล เกาหลี

2.5การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนด้วยเทคนิคเรียลไทม์ในเนื้อเยื่ออัณฑะ

ที่อยู่ผลกระทบของ SME ใน steroidogenesis ใน cells , ลูกอัณฑะ mRNA ของยีนในระดับทางเดิน steroidogenic
17 , hydroxysteroid เนส 3 ชนิด ( 17b-hsd3 ) 3B - hydroxysteroid dehydrogenase 6 ชนิด ( 3b-hsd6 steroidogenic เฉียบพลัน ) , โปรตีน ( ดาว ) และ nr5a1 [ =
steroidogenic ปัจจัย1 ( SFI ) วิเคราะห์ข้อมูลโดยวิธี RT-PCR ) แบบเรียลไทม์ peroxiredoxin ( prdx ) ยีนครอบครัวฟังก์ชันในการปรับของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ Sig - naling ในการตอบสนองต่อความเครียด ปัจจัย prdx 4 เป็น thioredoxin depen - dant peroxidase , แสดงเฉพาะในการย้อมเซลล์ในอัณฑะ ( iuchi et al . , 2009 )ที่อยู่ในการต้านเชื้อโรค เซลล์เพศผู้ในการตอบสนองต่อความเครียดปัจจัยที่ลูกอัณฑะ prdx4 mRNA ถูกตรวจสอบ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ( gapdh ) ถูกใช้เป็นระบบควบคุมภายใน .
อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากอัณฑะแช่แข็ง ( N = 10 ) ใช้เป็นสารไตร ( โมเลกุลศูนย์วิจัยซินซินนาติ โอ )ตัวอย่าง RNA ( 1 ) กลับใช้ LG ) และ ~ ลูคีเมียไวรัส Re - กลอนอาการตามโปรโตคอลมาตรฐานของ sup -
คีม ( Applied Biosystems ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย ) ไพรเมอร์ถูกนำเสนอในตารางที่ 1 ชุดรองพื้นทั้งหมดถูกตรวจสอบเพื่อให้แน่ใจว่า EF จึง cient ampli - จึงประจุบวกของผลิตภัณฑ์เดียวก่อนใช้ ) .เวลาจริงโพลี - ปฏิกิริยาลูกโซ่ ( PCR ) คือการใช้ merase SYBR รวมชุดอดีตได้ดีตามคำแนะนำของผู้ผลิต ( Takara ชิงะ , ญี่ปุ่น , myiq PCR แบบเรียลไทม์ในระบบตรวจจับ ( Bio - Rad , Hercules , CA ) ระดับของญาติ ) คำนวณโดยใช้วิธีการเปรียบเทียบ 2 ddct


2.6 จากการสังเกตและการวิเคราะห์ของอัณฑะ

ตัวจึง xed Bouin โซลูชั่น ( Sigma ) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังการล้างด้วย เนื้อเยื่อมีไซลีนและฝังตัวในพาราพลาสต์ ( Leica Biosystems demeen , เนเธอร์แลนด์ ) paraf จึง n บล็อกตัดเป็น 5 อิมและส่วนบนภาพนิ่ง poly-l-lysine-coated deparaf nated , จึงได้ทำการ รีไฮเดรทม distiled และในน้ำ อาชีวศึกษา -
หลังจากtoxylin โอซิน ( เขา ) คราบและล้างด้วยระดับเอทานอลเซอร์ - IES และไซลีน สไลด์ติดอย่างถาวร การสังเกตและการถ่ายภาพที่ขนาดเล็กมากในการใช้ dm2000 กล้องจุลทรรศน์พร้อม dfc320 Digital Imaging System ( ไลก้า heerbrugg switzerlend , , ) ภาพดิจิตอลส่วนอัณฑะเป็นกระเบื้องและสืบจาก . ท่ออัณฑะผิดปกติรวมทั้งเซอโตไลเซลล์ - เท่านั้นประกอบด้วยจับและปลดเซลล์เชื้อโรคถูก