Primary DNA damage test in E. coli

Primary DNA damage test in E. coli PQ37 (SOS-chromotest):

The SOS-chromotest in E. coli PQ37 was used to determine the potential for noni seed extract to induce primary DNA damage.

This test was carried out according to a previously developed method .

E. coli PQ37 was incubated at 37ºC in the presence of the extract at a concentration of 1000 ug/mL in a 96-well plate.

Samples, both with and without S9 mix, were evaluated in triplicate. Following incubation, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-$-D-galactopyranoside was added to the wells to detect $-galactosidase enzyme activity, which is induced during SOS repair of damaged DNA.

Nitrophenyl phosphate is also added to the wells to measure alkaline phosphatase activity, an indicator of cell viability.

The samples were again incubated and the absorbances of the samples, blanks and controls were measured at 410 and 620 nm with a microplate reader.

Vehicle blanks and positive controls, 5 :g/mL 4- nitroquinoline 1-oxide (4NQO) and 100 :g/mL 2- aminoanthracene (2AA), were included in this test.

The induction factor of each material was calculated by dividing the absorbance of the sample at 620 nm by that of the blank, while also correcting for cell viability.

Induction factors less than two indicate an absence of genotoxic activity.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หลักดีเอ็นเอเสียทดสอบใน E. coli PQ37 (SOS-chromotest):Chromotest SOS ใน E. coli PQ37 ถูกใช้เพื่อดูโอกาสที่เมล็ดลูกยอสกัดเพื่อก่อให้เกิดความเสียหายหลักของดีเอ็นเอ การทดสอบนี้ถูกดำเนินตามวิธีการพัฒนาก่อนหน้านี้PQ37 e. coli ถูก incubated ที่ 37ºC ในต่อหน้าของสารสกัดที่ความเข้มข้นของยูจี 1000/มล. ในจานดี 96ตัวอย่าง ทั้งมี และไม่ มีส่วน ผสมของ S9 ถูกประเมินใน triplicate ต่อไปนี้คณะทันตแพทยศาสตร์ 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-$-D-galactopyranoside ถูกเพิ่มบ่อตรวจ $-galactosidase เอนไซม์ ซึ่งเกิดระหว่าง SOS ซ่อมแซมดีเอ็นเอที่เสียหายยังมีเพิ่ม Nitrophenyl ฟอสเฟตลงบ่อวัดอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสกิจกรรม ตัวบ่งชี้ของเซลล์ชีวิต ตัวอย่างมีอีก incubated และ absorbances ตัวอย่าง ช่องว่าง และตัวควบคุมถูกวัดที่ 620 และ 410 nm กับอ่าน microplateช่องว่างรถและตัวควบคุมบวก 5: g/mL 4-nitroquinoline 1-ออกไซด์ (4NQO) และ 100: g/mL 2-aminoanthracene (2AA), รวมอยู่ในการทดสอบนี้ ตัวเหนี่ยวนำของแต่ละวัสดุถูกคำนวณ โดยการหาร absorbance ของตัวอย่างที่ 620 nm โดยที่ว่างเปล่า ในขณะที่ยัง มีการแก้ไขในเซลล์นี้น้อยกว่า 2 ปัจจัยเหนี่ยวนำระบุการขาดงานของกิจกรรม genotoxic

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เสียหายของดีเอ็นเอหลักในการทดสอบเชื้อ E. coli PQ37 (SOS-chromotest). โดย SOS-chromotest ในเชื้อ E. coli PQ37 ถูกใช้ในการตรวจสอบที่มีศักยภาพสำหรับสารสกัดจากเมล็ดโนนิที่จะทำให้เกิดความเสียหายดีเอ็นเอหลักการทดสอบนี้ได้ดำเนินการตามที่ได้รับการพัฒนาก่อนหน้านี้วิธี. อี coli PQ37 ได้รับการบ่มที่37ºCในการปรากฏตัวของสารสกัดที่ความเข้มข้น 1,000 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรในแผ่น 96 หลุมที่. ตัวอย่างทั้งที่มีและไม่มีการผสม S9, ได้รับการประเมินในเพิ่มขึ้นสามเท่า ต่อไปนี้การบ่ม 5 โบรโม-4-chloro-3-indolyl - $ - D-galactopyranoside ถูกบันทึกอยู่ในหลุมในการตรวจสอบ $ ​​-galactosidase เอนไซม์ซึ่งจะเหนี่ยวนำให้เกิดในระหว่างการซ่อมแซม SOS ดีเอ็นเอที่เสียหาย. ฟอสเฟต Nitrophenyl ยังจะถูกเพิ่มใน หลุมในการวัดกิจกรรม phosphatase อัลคาไลน์เป็นตัวบ่งชี้ของการมีชีวิตเซลล์. กลุ่มตัวอย่างที่ถูกบ่มอีกครั้งและ absorbances ของกลุ่มตัวอย่างช่องว่างและการควบคุมการวัดที่ 410 และ 620 นาโนเมตรที่มีผู้อ่าน microplate. ช่องว่างยานพาหนะและการควบคุมในเชิงบวกที่ 5: g / มิลลิลิตร 4 nitroquinoline 1 ออกไซด์ (4NQO) และ 100: กรัม / มิลลิลิตร 2- aminoanthracene (2AA) ถูกรวมอยู่ในการทดสอบนี้. ปัจจัยการเหนี่ยวนำของวัสดุแต่ละคนถูกคำนวณโดยการหารการดูดกลืนแสงของกลุ่มตัวอย่างที่ 620 นาโนเมตรโดยที่ ว่างในขณะที่ยังแก้ไขสำหรับการมีชีวิตเซลล์. การเหนี่ยวนำปัจจัยน้อยกว่าสองบ่งบอกถึงตัวตนของกิจกรรม genotoxic

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หลักความเสียหายของดีเอ็นเอการทดสอบใน E . coli pq37 ( SOS chromotest ) :

chromotest SOS ใน E . coli pq37 ศึกษาศักยภาพสำหรับสารสกัดจากเมล็ดโนนิเพื่อก่อให้เกิดความเสียหาย DNA หลัก

แบบทดสอบนี้ได้ดำเนินการตามวิธีการที่พัฒนาก่อนหน้านี้

) E . coli pq37 ถูกบ่มที่ 37 º C ในการปรากฏตัวของสารที่ระดับความเข้มข้น 1 , 000 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตรใน 96 ดีจาน

ตัวอย่างทั้งผสมและไม่ผสมเมื่อมีการประเมินทั้งสามใบ ต่อไปนี้ระยะเวลา 5-bromo-4-chloro-3-indolyl - $ - d-galactopyranoside ถูกเพิ่มลงในบ่อเพื่อตรวจหา $ - galactosidase เอนไซม์ ซึ่งเกิดใน SOS ซ่อมแซมดีเอ็นเอที่เสียหาย

nitrophenyl ฟอสเฟตจะถูกเพิ่มไปยังบ่อวัด อัลคาไลน์ ฟอสฟาเตส กิจกรรม ตัวบ่งชี้เซลล์ .

จำนวนอีกครั้ง ) และ absorbances ของตัวอย่าง , ช่องว่างและการควบคุมชนิดและ 620 nm กับผู้อ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย .

รถว่างและการควบคุม บวก 5 : g / ml 4 - nitroquinoline 1-oxide ( 4nqo ) และ 100 : g / ml 2 - aminoanthracene ( 2aa ) ถูกรวมอยู่ในการทดสอบ นี้

เหนี่ยวนำองค์ประกอบของวัสดุแต่ละชนิดถูกคำนวณโดยการหารค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างที่ 620 นาโนเมตรโดยใช้ของที่ว่างเปล่าในขณะที่ยังแก้ไขสำหรับเซลล์ .

เหนี่ยวปัจจัยน้อยกว่าสองบ่งชี้การขาดกิจกรรมต่อย .