MATERIALS AND METHODSOrganism. P. a

MATERIALS AND METHODS
Organism. P. aeruginosa PA103, isolated by Liu (23), was
selected for this study. This strain is naturally elastase
deficient (28). We found that all protease activity in culture
supernatants of strain PA103 was neutralized by specific
alkaline protease antisera, demonstrating that the only extracellular
Isolation of mutants. EMS (methanesulfonic acid ethyl
ester; Sigma) was employed by the method of Carlton and
Brown (2). A solution of Vogel-Bonner minimal medium (36)
containing 4% EMS was equilibrated at 37°C. To this solution
was added an equal volume of a late-exponential-phase
culture of P. aeruginosa PA103 grown in nutrient broth. This
mixture was incubated with shaking for 90 min at 37°C, and
then cells were washed with phosphate-buffered saline
(PBS), grown overnight in nutrient broth, and used to
inoculate skim milk plates at dilutions sufficient to result in
ca. 100 colonies per plate. The conditions of EMS mutagenesis
employed resulted in ca. 90% lethality. After incubation
of these plates at 37°C for 48 h, colonies were examined for
zones of clearing indicative of alkaline protease production.
Colonies which did not produce zones of clearing after 48 h
were chosen for further study.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการสิ่งมีชีวิต P. aeruginosa PA103 แยกต่างหาก โดยหลิว (23), ถูกเลือกสำหรับการศึกษานี้ ต้องใช้นี้เป็นธรรมชาติ elastaseไม่ (28) เราพบว่าทุกกิจกรรมรติเอสในวัฒนธรรมsupernatants ต้องใช้ PA103 ถูก neutralized โดยเฉพาะรติเอสด่าง antisera เห็นที่ extracellular เท่านั้นแยกของสายพันธุ์ EMS (methanesulfonic กรดเอทิลเอส ซิก) ถูกจ้าง โดยวิธีการของคาร์ลตัน และน้ำตาล (2) โซลูชันของโวเกล Bonner น้อยกลาง (36)ประกอบด้วย EMS 4% ถูก equilibrated ที่ 37 องศาเซลเซียส การแก้ไขปัญหานี้เพิ่มปริมาตรการเท่าของสายเนนเฟสวัฒนธรรมของ P. aeruginosa ปลูกธาตุอาหารซุป PA103 นี้ส่วนผสมคือ incubated กับสั่นสำหรับ 90 นาทีที่ 37° C และจากนั้น เซลล์ถูกล้าง ด้วยน้ำเกลือฟอสเฟต buffered(PBS), โตค้างคืนในซุปธาตุอาหาร และใช้ฉีดนม skim แผ่นที่ dilutions เพียงพอที่จะทำให้ca. 100 อาณานิคมต่อแผ่น เงื่อนไขของ EMS mutagenesisเจ้าของทำให้เกิด ca 90% lethality หลังจากบ่มของเหล่านี้แผ่นที่ 37° C สำหรับ 48 h อาณานิคมถูกตรวจสอบสำหรับโซนของล้างชี้ของรติเอสอัลคาไลน์ผลิตอาณานิคมที่ไม่ได้ผลิตของหักหลัง 48 hถูกเลือกสำหรับการศึกษาต่อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
มีชีวิต P. aeruginosa PA103 แยกโดยหลิว (23) ได้รับ
เลือกสำหรับการศึกษาครั้งนี้ สายพันธุ์นี้เป็นธรรมชาติ elastase
ขาด (28) เราพบว่ากิจกรรมโปรติเอสทั้งหมดในวัฒนธรรม
supernatants ของ PA103 สายพันธุ์ได้รับการเป็นกลางโดยเฉพาะ
antisera โปรติเอสอัลคาไลน์แสดงให้เห็นว่าเพียง extracellular
การแยกการกลายพันธุ์ EMS (เอทิลกรด Methanesulfonic
เอสเตอร์; Sigma) ถูกจ้างโดยวิธีการของคาร์ลตันและ
บราวน์ (2) วิธีการแก้ปัญหาของกลาง Vogel-บอนเนอร์น้อยที่สุด (36)
ที่มี 4% EMS ถูก equilibrated ที่ 37 ° C เพื่อแก้ปัญหานี้
ถูกบันทึกอยู่ในปริมาณที่เท่ากันของปลายเฟสชี้แจง
วัฒนธรรมของเชื้อ P. aeruginosa PA103 ปลูกในน้ำซุปสารอาหาร นี้
ส่วนผสมที่ถูกบ่มกับเขย่าเป็นเวลา 90 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและ
จากนั้นเซลล์ถูกล้างด้วยสารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์
(PBS) เติบโตค้างคืนในน้ำซุปสารอาหารและใช้ในการ
ฉีดวัคซีนแผ่นนมพร่องมันเนยที่เจือจางเพียงพอที่จะส่งผลใน
แคลิฟอร์เนีย 100 โคโลนีต่อแผ่น เงื่อนไขของการกลายพันธุ์ EMS
ลูกจ้างผลในแคลิฟอร์เนีย ตาย 90% หลังจากการบ่ม
ของแผ่นเปลือกโลกเหล่านี้ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงอาณานิคมถูกตรวจสอบสำหรับ
โซนของการล้างที่บ่งบอกถึงการผลิตเอนไซม์โปรติเอด่าง.
อาณานิคมที่ไม่ได้ผลิตโซนของสำนักหักบัญชี 48 ชั่วโมงหลังจาก
ได้รับการคัดเลือกในการศึกษาต่อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
สิ่งมีชีวิต . P . aeruginosa pa103 , แยกโดยหลิว ( 23 ) ,
ศึกษา . สายพันธุ์นี้เป็นธรรมชาติ elastase
ขาด ( 28 ) เราพบว่า protease activity ในวัฒนธรรม
supernatants ของ pa103 สายพันธุ์กลางโดยเฉพาะ
ด่างแอนติโปรแสดงให้เห็นว่าแค่ภายนอก
แยกของพวกกลายพันธุ์ EMS ( กรดมีเทนซัลโฟนิก เอทิลเอสเทอร์
;Sigma ) ถูกว่าจ้างโดยวิธีการของคาร์ลตันและ
สีน้ำตาล ( 2 ) โซลูชั่นของโวเกล บอนเนอร์กลางน้อยที่สุด ( 36 )
4 % EMS คือ equilibrated ที่มีอุณหภูมิ 37 องศา จะแก้ไขปัญหานี้ได้เพิ่มปริมาณเท่ากัน

ชี้แจงระยะสายวัฒนธรรมของพี aeruginosa pa103 ปลูกในน้ำสารอาหาร ส่วนผสมนี้
ถูกบ่มกับสั่นสำหรับ 90 นาทีที่ 37 ° C และ
แล้วเซลล์ก็ล้างด้วยน้ำเกลือ
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์( PBS ) ที่ปลูกในชั่วข้ามคืนน้ำสารอาหารและใช้
ปลูกฝีหางนมจานที่เจือจางเพียงพอที่จะส่งผล
แคลิฟอร์เนีย 100 โคโลนี ต่อจาน เงื่อนไขของการจ้างงาน ส่งผลให้ EMS
ประมาณ 90% ไรสีน้ำตาล หลังจากบ่ม
ของแผ่นเหล่านี้ที่ 37 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง อาณานิคมมีวัตถุประสงค์เพื่อแสดงให้เห็นถึงโซนล้าง

การผลิตอัลคาไลน์โปรติเอสอาณานิคมซึ่งไม่ได้สร้างโซนล้างหลังจาก 48 ชั่วโมง
ถูกเลือกสำหรับการศึกษาเพิ่มเติม