2.5.3. ELISA properFor the ELISA te

2.5.3. ELISA proper
For the ELISA test, polystyrene high binding plate (Griener, Germany) wells were used. These were covered individually with 50 L of P. multocida (P52 strain) antigen, coated with 50 L buffer (pH 9.6) and incubated at 4◦C in a refrigerator for 24 h. Next day, the plates were washed and then 200 L blocking buffer (casein, 20 g/L) was added in all the wells to block the unoccupied protein binding sites of the wells and incubated at room temperature for 1 h. The plates were again washed and 100 L of 1:50 diluted negative and positive serum were added in A–D and in E–F wells of the first row, respectively.Plates were again washed and then 100 L of the diluted Horseradish peroxidase conjugated antibodies were dispensed into each assay well and incubated at 37◦C for 2 h. Again the plates were washed, 100 L of substrate solution was pipetted into each test well and incubated at room temperature in dark for 20 min later 50 L of reaction stopping solution (125 mL/LH2SO4) was added to each well.In each washing of the plate, the liquid was tapped out from each well and then washed with washing solution (phosphate buffer saline: Tween-20 (pH 7.4). A soaking time of 3 min was allowed each time and the procedure was repeated thrice.The ELISA plates were read with the ELISA reader (ECIL, Hyderabad, India) at 492 nm and absorbance was noted.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5.3 การ ELISA เหมาะสมสำหรับการทดสอบ ELISA มีใช้โฟมสูงผูกบ่อจาน (Griener เยอรมนี) เหล่านี้ได้ครอบคลุมแต่ละกับ 50 L ตรวจหา P. multocida (ต้องใช้ P52) เคลือบ ด้วย 50 L บัฟเฟอร์ (pH 9.6) และ incubated ที่ 4◦C ในตู้เย็นใน 24 ชม วันถัดไป แผ่นถูกล้าง และบัฟเฟอร์การบล็อคขนาด 200 ลิตร (เคซีน 20 g/L) ถูกเพิ่มในบ่อทั้งหมดสกัดโปรตีนเดินไซต์ของบ่อผูก และ incubated ที่อุณหภูมิห้องใน 1 ชั่วโมง แผ่นถูกล้างอีก 100 L 1:50 ยกเว้นลบ และซีรั่มที่บวกเพิ่ม ใน A – D และ E – F บ่อของแถวแรก ตามลำดับ แผ่นถูกล้างอีกครั้งแล้ว คำถามวิเคราะห์แต่ละดี และ incubated ที่ 37◦C สำหรับ 2 h L 100 ของแอนตี้ peroxidase กลวง Horseradish แตกออก อีกแผ่นถูกล้าง L 100 ของพื้นผิว pipetted ในแต่ละการทดสอบอย่างดี และ incubated ที่อุณหภูมิห้องในที่มืดสำหรับ 20 นาทีหลัง 50 L ของปฏิกิริยาหยุดโซลูชัน (125 mL/LH2SO4) ถูกเพิ่มไปด้วยละ ในแต่ละซักผ้าแผ่น ของเหลวถูกเคาะออกมาจากบ่อแต่ละแล้ว ล้างกับโซลูชัน (น้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์: Tween-20 (pH 7.4) แบบเวลา 3 นาทีได้รับอนุญาตแต่ละครั้ง และขั้นตอนไม่ซ้ำกันเลย มีอ่านแผ่น ELISA กับ ELISA อ่าน (ECIL ไฮเดอราบัด อินเดีย) ที่ 492 nm และ absorbance ไว้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5.3 วิธี ELISA
ที่เหมาะสมสำหรับการทดสอบELISA, สไตรีนแผ่นสูงที่มีผลผูกพัน (Griener, เยอรมนี) หลุมถูกนำมาใช้ เหล่านี้ถูกปกคลุมไปเป็นรายบุคคลกับ 50 ลิตรพี multocida (สายพันธุ์ P52) สารเคลือบด้วย 50 L บัฟเฟอร์ (pH 9.6) และบ่มที่4◦Cในตู้เย็นเป็นเวลา 24 ชั่วโมง วันถัดไป, จานถูกล้างแล้ว 200 L ปิดกั้นกันชน (เคซีน 20 กรัม / ลิตร) ถูกเพิ่มเข้ามาในบ่อทุกบ่อเพื่อป้องกันโปรตีนว่างผูกพันเว็บไซต์ของหลุมและบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง แผ่นถูกล้างอีกครั้งและ 100 ลิตร 01:50 เจือจางเชิงลบและซีรั่มบวกเพิ่มเข้ามาใน A-D และในหลุม E-F ของแถวแรก respectively.Plates ถูกล้างอีกครั้งแล้ว 100 L ของมะรุมเจือจาง peroxidase แอนติบอดีผันถูกจ่ายเข้ากันดีทดสอบและบ่มที่37◦Cเป็นเวลา 2 ชั่วโมง อีกจานที่ถูกล้าง 100 L ของการแก้ปัญหาพื้นผิวได้รับการปิเปตเข้ามาในการทดสอบแต่ละอย่างดีและบ่มที่อุณหภูมิห้องในที่มืดเป็นเวลา 20 นาทีต่อมา 50 ลิตรวิธีการแก้ปัญหาการหยุดปฏิกิริยา (125 มิลลิลิตร / LH2SO4) ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละ well.In แต่ละ ล้างจานของเหลวถูกทาบทามออกจากกันได้ดีและล้างแล้วกับการแก้ปัญหาการซักผ้า (น้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์:. Tween-20 (pH 7.4) เวลาแช่ 3 นาทีได้รับอนุญาตในแต่ละเวลาและขั้นตอนซ้ำ thrice.The แผ่นวิธี ELISA ถูกอ่านด้วยเครื่องอ่านวิธี ELISA (ECIL, Hyderabad, อินเดีย) ที่ 492 นาโนเมตรและการดูดกลืนแสงที่ได้ระบุไว้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5.3 . วิธีที่เหมาะสมสำหรับการทดสอบแอนติบอดี
ีนสูงรวมจาน ( griener , เยอรมนี ) บ่อมาใช้ เหล่านี้ถูกปกคลุมด้วย  ทีละ 50 ลิตรพี. ซีรัม ( p52 เมื่อย ) แอนติเจนที่เคลือบด้วย 50  ชั้นบัฟเฟอร์ pH 9.6 ) บ่มที่ 4 ◦ C ในตู้เย็นเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ในวันถัดไป , จานถูกล้างและ 200 แล้ว  ผมบล็อกบัฟเฟอร์ ( เคซีน20 กรัมต่อลิตร ) เพิ่มในบ่อทุกบ่อ บล็อกร้างโปรตีนเว็บไซต์จากบ่อบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง แผ่นเป็นอีกซัก 100  ล. เจือจางซีรั่ม 50 ลบ และบวกเพิ่มใน– D และ E และ F บ่อของแถวแรก ตามลำดับแผ่นเป็นอีกซัก 100  L . ) เป็นเอนไซม์ conjugated เจือจางจ่ายในแต่ละการทดสอบอย่างดีและบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ◦อีกจานถูกล้าง 100  L ( pipetted สารละลายในแต่ละการทดสอบอย่างดีและบ่มที่อุณหภูมิห้องในที่มืดนาน 20 นาทีต่อมา  50 ล. ปฏิกิริยาหยุดโซลูชั่น ( 125 มล. / lh2so4 ) คือการเพิ่มแต่ละครั้งได้อีกด้วยในแต่ละล้างจาน , ของเหลวที่ถูกเคาะออกมาจากแต่ละคนและจากนั้นล้างด้วยสารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( ล้างเกลือ : tween-20 ( pH 7.4 ) แช่เวลา 3 นาทีได้รับอนุญาตในแต่ละครั้งและกระบวนการทำซ้ำ 3 ครั้ง โดยวิธี ELISA แผ่นอ่านด้วยเครื่องอ่านอีไลซ่า ( ecil , Hyderabad , อินเดีย ) ที่ 20 nm และค่าถูกตั้งข้อสังเกต