2.2. Encapsulation procedure
All glasswares and solutions used in the protocols were sterilized at 121 C for 15 min. Alginate beads were produced using a modified encapsulation method originally reported by Sheu and Marshall (1993) and Sultana et al. (2000). A 2% alginate mixture in distilled water was prepared containing 2% Hi-maize resistant starch (Merck, Darmstadt, Germany) and 0.1% culture (18 h old culture grown in MRS-broth). The mixture was added into 200 mL canola oil (Ladan, Behshahr Oil Industry, Behshahr, Iran) containing 0.2% lecithin (Nazgol Oil Industry, Mahidasht, Kermanshah, Iran). The mixture was stirred vigorously (400 rpm for 20 min, Heydolph Stirrer, Germany) until it was fully emulsified. Then 200 mL of 0.1 M calcium chloride solution were added. The mixture was allowed to stand 30 min to separate prepared calciumalginate beads in the bottom of beaker at the calcium chloride layer. The oil layer was drained and beads were collected in the calcium chloride solution which was then washed with 0.9% saline containing 5% glycerol and stored at 4 C.
2.2 ขั้นตอนการห่อหุ้ม
เครื่องแก้วทั้งหมดและการแก้ปัญหาที่ใช้ในโปรโตคอลได้รับการฆ่าเชื้อที่ 121 คเป็นเวลา 15 นาที เม็ดอัลจิเนตที่ผลิตโดยใช้วิธีการห่อหุ้มแก้ไขรายงานโดย sheu และมาร์แชลล์ (1993) และชายาสุลต่านตอัล (2000) ผสมอัลจิเนต 2% ในน้ำกลั่นได้เตรียมที่มี 2% hi-ข้าวโพดแป้งทน (เมอร์ค, ดาร์มสตัด, เยอรมนี) และ 0(18 ชั่วโมงวัฒนธรรมเก่าที่ปลูกในน้ำซุป mrs-) วัฒนธรรม 1% ส่วนผสมที่ถูกเพิ่มเข้าไปใน 200 มล. น้ำมันคาโนลา (ลาดาน, Behshahr อุตสาหกรรมน้ำมัน Behshahr, อิหร่าน) ที่มี 0.2% เลซิติน (อุตสาหกรรมน้ำมัน nazgol, mahidasht, Kermanshah, อิหร่าน) ส่วนผสมที่ถูกกวนอย่างจริงจัง (400 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 20 นาที, heydolph stirrer, เยอรมนี) จนกว่ามันจะถูก emulsified อย่างเต็มที่ 200 มล. 0.1 เมตรแคลเซียมคลอไรด์โซลูชั่นที่มีการเพิ่มส่วนผสมที่ถูกอนุญาตให้ยืน 30 นาทีที่จะแยกลูกปัด calciumalginate เตรียมในด้านล่างของถ้วยแก้วที่ชั้นแคลเซียมคลอไรด์ ชั้นน้ำมันได้ถูกระบายออกและลูกปัดถูกเก็บรวบรวมในสารละลายแคลเซียมคลอไรด์ที่ถูกล้างแล้วกับ 0.9% น้ำเกลือที่มีกลีเซอรีน 5% และเก็บไว้ที่ 4 ค.
การแปล กรุณารอสักครู่..
