Isolation of Escherichia coliMeat w

Isolation of Escherichia coli
Meat with hard pieces or bony samples was first trimmed with sterile knife. Isolation and identification procedure in bacteriological analysis manual (Feng et al., 2002) was followed with slight modification for the isolation and identification of Escherichia coli, whereas serological kit was used to confirm the pathogenic strain O157. The meat samples (25 g) were first transferred to the sterile flask containing 225 ml of sterile Tryptic Soy Broth (TSB) (Merck, Germany). The samples were then homogenized with stomacher machine (Bag Mixer, Interscience) for 10 min, and incubated at 37oC for 16-24 h. Following the incubation, part (two wireloop full) of the TSB was transferred to Macconkey Agar (MKA) (Himedia, India) and incubated at 37oC for 24 h. The lactose fermenting colonies on MKA were transferred to Eosin Methylene Blue Agar (EMBA) (Himedia, India) and incubated at 37oC for further 24 h. Suspected colonies (with a green metallic sheen) were then confirmed by API 20E Kit (Biomerieux, France) along with api web. The pathogenic strain O157 was confirmed with the help of latex agglutination kit (Oxoid, UK) from the preliminary confirmed E. coli
isolates. Escherichia coli (TISTR 780) were used as control strains for the validation of nutritional media and immunological kits.
Antimicrobial susceptibility test
All the E. coli isolates were exposed to different antibiotics for its antimicrobial susceptibility and drug resistance pattern determination using disk diffusion assay following the guidelines of clinical and laboratory standard institute. Pre-incubated 24 h cultures of E. coli in sterile buffer peptone water with bacterial count 108 CFU/ml was swabbed over Mueller-Hinton agar (Merck, Germany). After placing the antibiotic discs aseptically, the plates were incubated at 37oC for 18-24 h and zone of inhibition were measured subsequently. The commercial antibiotics used in the study were: ciprofloxacin (5 μg), ampicillin (10 μg), tetracycline (30 μg), sulfamethoxazole/trimethoprim (25 μg), gentamicin (10 μg), chloramphenicol (30 μg), nalidixic acid (30 μg), streptomycin (10 μg) and kanamycin (30 μg) (Oxoid, UK).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกของ Escherichia coli
เนื้อชิ้นยากหรือ bony ตัวอย่างแรกถูกตัด ด้วยมีดฆ่าเชื้อ กระบวนการแยกและระบุในคู่มือวิเคราะห์ bacteriological (เฟิงและ al., 2002) ถูกตาม ด้วยปรับเปลี่ยนเล็กน้อยสำหรับการแยกและระบุของ Escherichia coli ในขณะที่ใช้ชุดสภาวะการยืนยันสายพันธุ์ O157 อุบัติ ตัวอย่างเนื้อ (25 กรัม) มีการถ่ายโอนก่อนจะหนาวใส่ประกอบด้วย 225 ml ของกอซ Tryptic ถั่วเหลืองซุป (TSB) (เมอร์ค เยอรมนี) ตัวอย่างมีแล้ว homogenized เป็นกลุ่มกับเครื่องแผงประดับหน้าอก (ถุงผสม Interscience) ใน 10 นาที และ incubated ที่ 37oC สำหรับ h 16-24 ต่อคณะทันตแพทยศาสตร์ ส่วนหนึ่ง (สอง wireloop เต็ม) ของ TSB จะถูกโอนย้ายไป Macconkey Agar (MKA) (Himedia อินเดีย) และ incubated ที่ 37oC ใน 24 ชม อาณานิคม fermenting แล็กโทสใน MKA ถูกโอนย้ายไป Eosin บลูเมทิลีนได Agar (EMBA) (Himedia อินเดีย) และ incubated ที่ 37oC สำหรับเพิ่มเติม 24 h. Suspected อาณานิคม (กับชีนการจองสีเขียวโลหะการ) ถูกแล้วยืนยัน โดยชุด API 20E (Biomerieux ฝรั่งเศส) กับเว็บ api สายพันธุ์ O157 อุบัติได้ยืนยัน ด้วยความช่วยเหลือของชุดยาง agglutination (Oxoid, UK) จากเบื้องต้นยืนยัน E. coli
แยก Escherichia coli (วว 780) ใช้เป็นสายพันธุ์ควบคุมสำหรับการตรวจสอบสื่อโภชนาการและชุดภูมิคุ้มกัน
ภูมิไวรับยับยั้งจุลินทรีย์ทดสอบ
อีทั้งหมด coli ที่แยกได้มีสัมผัสกับยาปฏิชีวนะแตกต่างกันสำหรับการของจุลินทรีย์ภูมิไวรับและยาต่อต้านรูปแบบกำหนดใช้ดิสก์แพร่วิเคราะห์ตามแนวทางของทางคลินิก และห้องปฏิบัติการมาตรฐานสถาบันการ ก่อน incubated 24 ชมวัฒนธรรมของ E. coli ในบัฟเฟอร์กอซ peptone น้ำแบคทีเรีย 108 CFU/ml ที่ swabbed ผ่าน Mueller Hinton agar (เมอร์ค เยอรมนี) หลังจากวางแผ่นยาปฏิชีวนะ aseptically แผ่นถูก incubated ที่ 37oC สำหรับ h 18-24 และโซนของยับยั้งถูกวัดในเวลาต่อมา ได้ยาปฏิชีวนะทางการค้าที่ใช้ในการศึกษา: ciprofloxacin (5 μg), แอมพิซิลลิน (10 μg), เตตราไซคลีน (30 μg), ซัลฟาเมโทซาโซล/ไตรเมโทพริม (25 μg), gentamicin (10 μg), chloramphenicol (30 μg) กรดนาลิดิซิก (30 μg), กานามัยซิน (30 μg) และ streptomycin (10 μg) (Oxoid, UK)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยก Escherichia coli
เนื้อกับชิ้นยากหรือตัวอย่างกระดูกถูกตัดด้วยมีดเป็นครั้งแรกผ่านการฆ่าเชื้อ ขั้นตอนการแยกและระบุในคู่มือการวิเคราะห์แบคทีเรีย (ฮ et al., 2002) ตามมาด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยในการแยกและระบุ Escherichia coli ขณะที่ชุดทางภูมิคุ้มกันถูกใช้ในการยืนยัน O157 สายพันธุ์ที่ทำให้เกิดโรค ตัวอย่างเนื้อ (25 กรัม) เป็นครั้งแรกโอนไปยังขวดผ่านการฆ่าเชื้อที่มี 225 มิลลิลิตรหมัน Tryptic ถั่วเหลืองน้ำซุป (TSB) (เมอร์ค, เยอรมนี) กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการหดหายแล้วด้วยเครื่อง Stomacher (กระเป๋าและผสม, Interscience) เป็นเวลา 10 นาทีและบ่มที่อุณหภูมิ 37oC สำหรับ 16-24 ชั่วโมง ต่อไปนี้การบ่มเพาะเป็นส่วนหนึ่ง (สอง wireloop เต็ม) ของ TSB ถูกย้ายไป MacConkey วุ้น (MKA) (HIMEDIA, อินเดีย) และบ่มที่อุณหภูมิ 37oC เป็นเวลา 24 ชั่วโมง แลคโตสในการหมักอาณานิคม MKA ถูกย้ายไป Eosin Methylene สีน้ำเงินวุ้น (EMBA) (HIMEDIA, อินเดีย) และบ่มที่อุณหภูมิ 37oC สำหรับเพิ่มเติม 24 ชั่วโมง อาณานิคมสงสัย (มีเงาโลหะสีเขียว) ได้รับการยืนยันแล้วโดย API 20E Kit (Biomerieux, ฝรั่งเศส) พร้อมกับเว็บ API O157 สายพันธุ์ที่ทำให้เกิดโรคได้รับการยืนยันด้วยความช่วยเหลือของชุดน้ำยางเกาะติดกัน (Oxoid, UK) จากเบื้องต้นได้รับการยืนยันเชื้ออีโคไล
สายพันธุ์ Escherichia coli (วว 780) ถูกนำมาใช้เป็นสายพันธุ์ควบคุมสำหรับการตรวจสอบของสื่อทางโภชนาการและชุดภูมิคุ้มกัน
ทดสอบความไวต่อยาต้านจุลชีพ
ทั้งหมดอีโคไลสายพันธุ์ที่ถูกสัมผัสกับยาปฏิชีวนะที่แตกต่างกันสำหรับความอ่อนแอและความต้านทานยาเสพติดการกำหนดรูปแบบของยาต้านจุลชีพโดยใช้ดิสก์การแพร่ทดสอบดังต่อไปนี้ แนวทางของสถาบันทางคลินิกและมาตรฐานห้องปฏิบัติการ ก่อนบ่ม 24 ชั่วโมงวัฒนธรรมของอีโคไลในการฆ่าเชื้อน้ำเปปโตนบัฟเฟอร์กับการนับเชื้อแบคทีเรีย 108 CFU / มิลลิลิตร swabbed กว่ามูลเลอร์ฮินตัน-agar (เมอร์ค, เยอรมนี) หลังจากที่วางแผ่นยาปฏิชีวนะในขวดทดลอง, จานที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37oC สำหรับ 18-24 ชั่วโมงและเขตการยับยั้งการวัดต่อมา ยาปฏิชีวนะในเชิงพาณิชย์ใช้ในการศึกษาคือ ciprofloxacin (5 ไมโครกรัม) ampicillin (10 ไมโครกรัม) tetracycline (30 ไมโครกรัม) sulfamethoxazole / trimethoprim (25 ไมโครกรัม), gentamicin (10 ไมโครกรัม) chloramphenicol (30 ไมโครกรัม), กรด Nalidixic ( 30 ไมโครกรัม), streptomycin (10 g) และ KANAMYCIN (30 ไมโครกรัม) (Oxoid, สหราชอาณาจักร)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกเชื้อ Escherichia coli
เนื้อหนักหรือตัวอย่างกระดูกชิ้นแรกตัดด้วยมีด เป็นหมัน การแยกและระบุในคู่มือขั้นตอนการวิเคราะห์แบคทีเรีย ( ฟง et al . , 2002 ) ตามมาด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยเพื่อแยกและจำแนกเชื้อ Escherichia coli และผลิตชุดถูกใช้เพื่อยืนยันการเป็นสมาชิกสายพันธุ์ก่อโรค .อาหารตัวอย่าง ( 25 กรัม ) ก่อนย้ายไปฆ่าเชื้อขวดบรรจุ 225 ml ของการฆ่าเชื้ออาหารถั่วเหลือง ซุป ( TSB ) ( Merck , เยอรมัน ) จำนวนแล้วบดด้วยเครื่องแผงประดับหน้าอก ( ผสม กระเป๋า interscience ) เป็นเวลา 10 นาทีและบ่มที่ 37oc 16-24 ชั่วโมง ต่อไปนี้ เพื่อบ่มเพาะ ส่วน ( 2 wireloop เต็ม ) ของ TSB ย้ายไป Lynx ( ( himedia mka ) ,อินเดีย ) บ่มที่ 37oc 24 ชั่วโมงการหมักแล็กโตสอาณานิคมบน mka ที่ถูกโอนไปยัง eosin ีนวุ้นสีฟ้า ( EMBA ) ( himedia อินเดีย ) และบ่มที่ 37oc ต่อไป 24 ชั่วโมง สงสัยอาณานิคม ( มีสีเขียวเมทัลลิเงา ) แล้ว ยืนยันโดย API 20e Kit ( biomerieux , ฝรั่งเศส ) ร่วมกับ API ของเว็บการเป็นสมาชิกสายพันธุ์เชื้อโรคถูกยืนยันด้วยความช่วยเหลือของชุดเกาะติดกันน้ำยางข้น ( oxoid , UK ) จากเชื้อ E . coli
เบื้องต้นยืนยันเชื้อ Escherichia coli ( วว. 780 ) ที่ใช้ควบคุมสายพันธุ์การตรวจสอบของสื่อและโภชนาการภูมิคุ้มกันชนิดติดตั้งอิสระ ต้านจุลชีพกลุ่มทดสอบ

ทั้งหมดเช่นโคไลสายพันธุ์ได้รับยาปฏิชีวนะที่แตกต่างกันของพฤติกรรมและรูปแบบการดื้อยาต้านจุลชีพที่ใช้ในการแพร่กระจายดิสก์ตามแนวทางของทางคลินิก และทางห้องปฏิบัติการ สถาบันมาตรฐาน 24 ชั่วโมงก่อนโดยวัฒนธรรมของ E . coli ในบัฟเฟอร์ด้วยจุลินทรีย์น้ำหมัน extract 108 CFU / ml เป็นเช็คผ่าน มูลเลอร์ ฮินตัน ( สหรัฐ , เยอรมัน )หลังจากวางแผ่นยาปฏิชีวนะ aseptically จาน 37oc อุณหภูมิระหว่าง H และโซนของการยับยั้งได้ในภายหลัง พาณิชย์ ยาปฏิชีวนะ ที่ใช้ในการวิจัย ได้แก่ : ซิโปรฟลอกซาซิน ( 5 μกรัม ) , แอมพิซิลลิน ( μ 10 กรัม ) , เตตราไซคลิน ( μ 30 กรัม ) , ซัลฟาเมโทซาโซล / นักเรียนμ 25 กรัม ) เจนตาไมซิน ( μ 10 กรัม ) , chloramphenicol ( μ 30 กรัม ) , สะพานกรุงธน ( μ 30 กรัม )สเตรปโตมัยซิน ( μ 10 กรัม ) และ kanamycin ( μ 30 กรัม ) ( oxoid , UK )