1. Pipet between 10 and 100 μg of p

1. Pipet between 10 and 100 μg of protein in 100 μL total volume into a test tube. If the approximate sample concentration is unknown, assay a range of dilutions (1, 1:10, 1:100, 1:1000) . Prepare duplicates of each sample.
2. For the calibration curve, pipet duplicate volumes of 10, 20, 40, 60, 80, and 100 μL of 1 mg/mL γ-globulin standard solution into test tubes, and make each up to 100 μL with distilled water. Pipet 100 μL of distilled water into a further tube to provide the reagent blank.
3. Add 5 mL of protein reagent to each tube and mix well by inversion or gentle vortexmixing. Avoid foaming, which will lead to poor reproducibility.
4. Measure the A595 of the samples and standards against the reagent blank between 2 min and 1 h after mixing (see Note 7). The 100 μg standard should give an A595 value of about 0.4 . The standard curve is not linear, and the precise absorbance varies depending on the age of the assay reagent. Consequently, it is essential to construct a calibration curve for each set of assays (see Note 8).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1. pipet ระหว่าง 10 และ 100 μg โปรตีนในปริมาณรวม μL 100 ลงในหลอดทดสอบ ถ้าความเข้มข้นโดยประมาณอย่างไม่เป็นที่รู้จัก assay dilutions ช่วง (1, 1:10, 1: 100, 1:1000) ทำซ้ำของแต่ละอย่าง2. โค้งเทียบ pipet ซ้ำจำนวน 10, 20, 40, 60, 80 และ μL 100 ของสารละลายมาตรฐานของγกลอบูลิน 1 mg/mL ในหลอดทดสอบ และละถึง 100 μL น้ำกลั่น Pipet 100 μL น้ำกลั่นลงในหลอดไปให้รีเอเจนต์ว่าง3. เพิ่ม 5 mL ของรีเอเจนต์โปรตีนแต่ละท่อ และผสมดี ด้วยกลับหรือ vortexmixing อ่อนโยน หลีกเลี่ยงการมีฟอง ซึ่งจะนำไปสู่ reproducibility ดี4. วัด A595 ของตัวอย่างและมาตรฐานกับรีเอเจนต์ที่ว่างระหว่าง 2 นาทีและ 1 ชั่วโมงหลังจากผสม (ดูหมายเหตุ 7) Μg 100 มาตรฐานควรให้ค่า A595 ของเกี่ยวกับ 0.4 ไม่เชิงเส้นโค้งมาตรฐาน และ absorbance แม่นยำแตกต่างกันไปตามอายุของรีเอเจนต์ทดสอบ ดังนั้น มันเป็นสิ่งสำคัญเพื่อสร้างเส้นโค้งเทียบสำหรับแต่ละชุดของ assays (ดูหมายเหตุ 8)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1. Pipet ระหว่าง 10 และ 100 ไมโครกรัมของโปรตีนใน 100 ไมโครลิตรปริมาณรวมลงในหลอดทดสอบ ถ้าความเข้มข้นของกลุ่มตัวอย่างโดยประมาณเป็นที่รู้จัก assay ช่วงของการเจือจาง (ที่ 1, 1:10, 1: 100, 1: 1000) เตรียมความพร้อมที่ซ้ำกันของแต่ละตัวอย่าง.
2 สำหรับเส้นโค้งการสอบเทียบปิเปตปริมาณที่ซ้ำกัน 10, 20, 40, 60, 80, และ 100 ไมโครลิตร 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรγ-โกลบูลิสารละลายมาตรฐานลงในหลอดทดลองและทำให้แต่ละถึง 100 ไมโครลิตรด้วยน้ำกลั่น ปิเปต 100 ไมโครลิตรของน้ำกลั่นลงในหลอดต่อไปเพื่อให้ว่างเปล่าสาร.
3 เพิ่ม 5 มลสารโปรตีนแต่ละหลอดและผสมอย่างดีจากการผกผันหรือ vortexmixing อ่อนโยน หลีกเลี่ยงการเกิดฟองซึ่งจะนำไปสู่การทำสำเนาที่ไม่ดี.
4 วัด A595 ของกลุ่มตัวอย่างและมาตรฐานกับสารว่างเปล่าระหว่าง 2 นาทีและ 1 ชั่วโมงหลังจากการผสม (ดูหมายเหตุ 7) 100 ไมโครกรัมมาตรฐานควรให้ค่า A595 ประมาณ 0.4 โค้งมาตรฐานไม่เป็นเชิงเส้นและการดูดกลืนแสงที่แม่นยำแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับอายุของน้ำยาทดสอบที่ ดังนั้นจึงเป็นสิ่งสำคัญที่จะสร้างเส้นโค้งการสอบเทียบสำหรับชุดของการตรวจแต่ละ (ดูหมายเหตุ 8)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 . ไปเปตระหว่าง 10 และ 100 กรัมของโปรตีนในμ 100 μ L ปริมาณในหลอดทดลอง ถ้าปริมาณตัวอย่างโดยประมาณเป็นที่รู้จักในช่วงเจือจาง ( 1 : 10 1 : 100 , 1 , 000 ) เตรียมสำเนาของแต่ละตัวอย่าง .
2 สำหรับการปรับเส้นโค้ง , ปิเปตซ้ำปริมาณ 10 , 20 , 40 , 60 , 80 และ 100 μ L 1 มก. / มล. ที่γ - มาตรฐานโซลูชั่นเข้าไปในหลอดทดสอบและให้แต่ละคนได้ถึง 100 μ L ด้วยน้ำกลั่น ไปเปตน้ำกลั่น 100 μผมเป็นหลอดต่อไปที่จะให้สารเคมีเปล่า .
3 เพิ่ม 5 ml ของรีเอเจนต์โปรตีนแต่ละหลอด และผสมได้ดีโดยการผกผันหรืออ่อนโยน vortexmixing . หลีกเลี่ยงฟอง ซึ่งจะนำไปสู่การตรวจสอบไม่ดี .
4วัด a595 ของตัวอย่างและมาตรฐานกับสารเคมีที่ว่างระหว่าง 2 นาที และ 1 ชั่วโมงหลังจากผสม ( ดูหมายเหตุ 7 ) 100 กรัมμมาตรฐานควรให้ a595 มูลค่าประมาณ 0.4 เส้นโค้งมาตรฐานไม่ได้เป็นเส้นตรง และค่าความแม่นยำจะแตกต่างกันขึ้นอยู่กับอายุของแบคทีเรียเกิดปฏิกิริยา ดังนั้น จึงจำเป็นที่ต้องสร้างเป็นรูปโค้ง สำหรับแต่ละชุดของยีน ( ดูหมายเหตุ
8 )