[0072] In รุรุอธิบายประกอบ of such

[0072] In รุรุอธิบายประกอบ of such a composition, skim milk is present in a concentration of about 3 % (w/v) to about 8 % (w/v), กลีเซอรอล is present in a concentration of about 0.5% (w/v) to about 2 % (w/v) and the carbohydrate is present in a concentration of about 5 % (w/v) to about 13 % (w/v). In one further รุรุอธิบายประกอบ, a freezing composition of the การประดิษฐ์ contains about 5% (w/v) skimmed milk, about 1% (w/v) กลีเซอรอล and about 10% (w/v) of the carbohydrate. For the sake of illustration it is noted here that such a solution may be prepared by weighing out lg of กลีเซอรอล, 5g of skim milk powder and 10g of ทรีฮาโลส into a 100m1 graduated measuring device. Then, the volume of the solution is made up to 100m1 with double distilled sterile water.
[0073] In line with the above disclosure, a composition of the การประดิษฐ์ that contains skim milk, กลีเซอรอล and a carbohydrate can be used for the freezing of เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม as disclosed herein. However, such a composition of the การประดิษฐ์ that contains skim milk, กลีเซอรอล and a carbohydrate can also be used for preparing เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม for freeze-
drying, meaning in the consecutive incubation of เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม with increasing concentrations of ไครโอโพรเทกแทนต์ as disclosed herein. Accordingly, the การประดิษฐ์ is also directed to a method of preparing เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม for การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, โดยที่ the method ประกอบรวมด้วย incubating the เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม in a composition of the การประดิษฐ์ that contains skim milk, กลีเซอรอล and a carbohydrate.
[0074] The การประดิษฐ์ will now be further illustrated by the following non-limiting experimental examples.

EXAMPLES
Example 1: การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง with stepwise addition of ไครโอโพรเทกแทนต์ to the สารละลาย บ่ม.

[0075] Experimental data:
[0076] Lactobacillus acidophilus probiotic bacteria were encapsulated, freeze-dried,
rehydrated and tested for metabolic activity as a measure of การอยู่รอดและเติบโตได้. The capsules were analysed for structural integrity after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง and rehydration.
[0077] Bacterial encapsulation

[0078] A bacteria culture of Lactobacillus acidophilus at an optical density of 1 OD at a
wavelength of 600 nm was harvested and encapsulated in sodium cellulose sulphate and poly-ไดอัลลิล ไดเมธิล ammonium chloride (pDADMAC — also known under its International
Nomenclature Cosmetic Ingredient (INCI) name Ge18). Encapsulated bacteria were cultured in de Man, Rogosa and Sharpe (MRS) medium at 37°C with shaking at 50rpm.
[0079] การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง (Lyophilisation)
[0080] Encapsulated bacteria and free bacteria were frozen in an ethanol/dry ice bath
using stepwise addition of 5% skim milk, 1% กลีเซอรอล or DMSO in double distilled, sterile water as a ไครโอโพรเทกแทนต์ and then stored at -80°C. The freeze medium for the free bacteria is the same as for the encapsulated bacteria except that it is not added in a stepwise manner.
[0081] For the encapsulated bacterial cells, ไครโอโพรเทกแทนต์s were added in step-wise fashion as follows:
[0082] General procedure (for "serial dilution" of the culture media):
[0083] Using a maximum of 1,000 capsules per ml of or any multiple thereof the capsules
(containing the bacteria) were placed in a 50m1 falcon tube containing fresh MRS medium. To this cell สารแขวนลอย (สารละลาย บ่ม), 0.5 ml/nal of the freezing medium was added as ไครโอโพรเทกแทนต์ to yield a freezing medium with 50 % concentration of the ไครโอโพรเทกแทนต์ (v/v). In illustrative terms, if the total volume of the cell สารแขวนลอย was 1 ml, then 0.5m1 medium were removed and 0.5m1 of freezing media was added to yield a 50% dilution of both). The เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม were incubated for 25 minutes and then further 50 % (v/v) of the สารละลาย บ่ม was swapped for cryopreservation media (i.e. in case of a total volume of 1 ml, then 0.5m1 were removed and 0.5m1 of freezing media were added to yield a concentration of 75% (v/v) of the freezing media. The incubation was again carried out again for 25 minutes before in subsequent steps again 50% of the incubation media was replaced by freezing media. In the last incubation step, the medium on the capsules is 100% freezing medium.

(A) Step-wise addition of DMSO ไครโอโพรเทกแทนต์

[0084] 16 capsules were placed in a 50m1 falcon tube containing 9m1 of fresh MRS
medium. To this cell สารแขวนลอย (สารละลาย บ่ม), 2000 of DMSO were added as
ไครโอโพรเทกแทนต์ to yield an initial DMSO concentration of approximately 2 % (v/v). The เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม were incubated for 25 minutes and then further 200111 DMSO were added to yield a DMSO concentration of about 4.2 % (v/v). The incubation was again carried out for

25 minutes before in 3 subsequent steps additional 200u1 DMSO were added to reach a final DMSO concentration of 10% (1 ml DMSO in 10 ml สารละลาย บ่ม).
(B) Step-wise addition of a skim milk/กลีเซอรอล ของผสม as ไครโอโพรเทกแทนต์ (5% skim milk and 1% กลีเซอรอล in water)
[00851 In this example, 100 large hand made capsules were placed in a 50m1 falcon tube containing 9m1 of fresh MRS medium. 5m1 of the MRS medium were taken out from falcon tube and 5m1 of an สารละลาย บ่ม containing skim milk as ไครโอโพรเทกแทนต์ (5 % skim milk (w/v) and 1 % กลีเซอรอล (w/v) in water) was added in the subsequent consecutive incubation steps. In this experiment six incubation steps were performed, in which the concentration of the ไครโอโพรเทกแทนต์ was increased in order of 50%, 75%, 87.5%, 93.75%, 97%, and 100%, meaning in the last incubation step the เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม are in the freezing media. The incubation period in each step after addition of the skim milk ไครโอโพรเทกแทนต์ was approximately 25 minutes. At the end of each incubation step the capsules settle down via gravity, thereby allowing the incubation medium to be removed via pipetting. After the last incubation step with 5 % skim milk (w/v) and 1 % กลีเซอรอล (w/v) in water both frozen encapsulated bacteria and free bacteria were then directly subjected in this freezing solution (i.e. without any washing step) to lyophilisation overnight. For การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, firstly the capsules plus 100% freezing medium are shock-frozen using a 96% ethanol/dry ice bath. The shock-frozen pellet can then be stored at -80°C or sent for การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง immediately. Any การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง machine can be used for the lyophilisation process by following the manufacturer's instructions. For the present experiments, the Thermo Scientific ModulyoD-
230 device was used. The results of these experiments are shown in รูป 1 to รูป 9. As can be seen from the bright field microscopic images of capsules of รูป 1, the consecutive incubation of the capsules in the method of the การประดิษฐ์นี้ provide, after re-hydration, an intact encapsulation and thus enhances the structural integrity of the encapsulation. See in this regard also the images shown in รูป 4 and รูป 5 that show that the cellulose sulphate capsules that were treated using an รุรุ of the inventive method (using increasing concentrations of skim milk in the incubation steps) and then freeze-dried either in liquid
nitrogen or an ethanol/dry ice maintain their original spherical shape with smooth surface after rehydration while, as evident from the images shown in Figs. 6 to 9 capsules that were freeze-dried in various buffers without ไครโอโพรเทกแทนต์ are to a large extent damaged or destroyed.


[0086] In addition to maintaining the structural integrity of the capsules with the cells
contained therein, the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง method of the การประดิษฐ์ also provides for a significantly higher survival rate of the เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม. รูป 2 shows the protective effect of the (intact) capsules on the tested bacteria during การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, when using, in preparation of the freezing, an สารละลาย บ่ม containing increasing amounts of skim milk and กลีเซอรอล as ไครโอโพรเทกแทนต์. The protective effect was examined by a การอยู่รอดและเติบโตได้ test that was done one day after free-drying following rehydration of the freeze-dried bacteria. The การอยู่รอดและเติบโตได้ was compared to freshly encapsulated bacterial cells as reference and is expressed in % การอยู่รอดและเติบโตได้. As illustrated in รูป 2, after being subjected to the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง method of the การประดิษฐ์ capsules protect the bacteria from การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง (98% การอยู่รอดและเติบโตได้ in encapsulated bacteria compared to 25% การอยู่รอดและเติบโตได้ in free cells), meaning the การอยู่รอดและเติบโตได้ of encapsulated bacteria is significantly higher than that of free bacteria.
[0087] รูป 3 shows the comparison of the two different /สา

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

[0072] ในรุรุอธิบายประกอบขององค์ประกอบดังกล่าว skim นมอยู่ในความเข้มข้นประมาณ 3% (w/v) ไปประมาณ 8% (w/v), กลีเซอรอลอยู่ในความเข้มข้นประมาณ 0.5% (w/v) ประมาณ 2% (w/v) และคาร์โบไฮเดรตอยู่ในความเข้มข้นประมาณ 5% (w/v) ประมาณ 13% (w/v) ในรุรุอธิบายประกอบเพิ่มเติมหนึ่ง ส่วนการตรึงการประดิษฐ์ประกอบด้วยประมาณ 5% (w/v) นมขาดมันเนย ประมาณ 1% (w/v) กลีเซอรอล และประมาณ 10% (w/v) ของคาร์โบไฮเดรต เพื่อภาพ มันจะตั้งข้อสังเกตที่นี่ว่า การแก้ไขปัญหาที่อาจเตรียม โดยชั่งออก lg กลีเซอรอล skim นมผง 5 กรัม และ 10 กรัมของทรีฮาโลสเป็น 100 เมตร 1 จบศึกษาอุปกรณ์การวัด แล้ว ปริมาตรของโซลูชันจะทำถึง 100m 1 กับคู่น้ำกอซกลั่นบรรทัดใน [0073] มีการเปิดเผยข้อมูลข้างต้น ส่วนประกอบของการประดิษฐ์ที่ประกอบด้วยนม skim กลีเซอรอล และคาร์โบไฮเดรตสามารถใช้สำหรับแช่ของเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มเปิดเผยนี้ อย่างไรก็ตาม เช่นเป็นองค์ประกอบการประดิษฐ์ที่ประกอบด้วยนม skim กลีเซอรอล และคาร์โบไฮเดรตสามารถใช้สำหรับเตรียมการเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มสำหรับการแช่แข็ง-แห้ง หมายถึงบ่มต่อเนื่องของเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มด้วยการเพิ่มความเข้มข้นของไครโอโพรเทกแทนต์เปิดเผยนี้ ตาม การประดิษฐ์จะยังถูกนำไปวิธีการเตรียมเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มสำหรับการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง โดยที่ประกอบรวมด้วยวิธีที่ incubating เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มในองค์ประกอบของการประดิษฐ์ที่ประกอบด้วยนม skim กลีเซอรอล และคาร์โบไฮเดรต[0074] การประดิษฐ์จะตอนนี้ได้เพิ่มเติมภาพประกอบไม่จำกัดทดลองอย่างตัวอย่างตัวอย่างที่ 1: การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งไครโอโพรเทกแทนต์การสารละลายบ่ม stepwise บวกข้อมูลทดลอง [0075]:[0076] แบคทีเรียโปรไบโอติกส์ acidophilus แลคโตบาซิลลัสที่นึ้ กรอบrehydrated กิจกรรม และ การทดสอบสำหรับเผาผลาญเป็นวัดการอยู่รอดและเติบโตได้ แคปซูลถูก analysed เพื่อความสมบูรณ์ของโครงสร้างการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งและ rehydrationEncapsulation แบคทีเรีย [0077]วัฒนธรรม [0078] A แบคทีเรียแลคโตบาซิลลัส acidophilus ที่มีความหนาแน่นออปติคัลของ OD 1 ที่เป็นความยาวคลื่นของ 600 nm ถูกเก็บเกี่ยว และนึ้ในโซเดียมเซลลูโลสซัลเฟตและโพลีไดอัลลิลไดเมธิลแอมโมเนียคลอไรด์ (pDADMAC — รู้จักกันภายใต้ของนานาชาติระบบการตั้งชื่อส่วนผสมเครื่องสำอาง (INCI) ชื่อ Ge18) สรุปแบคทีเรียมีอ่างในเดอแมน Rogosa และ Sharpe (นาง) ที่ 37° C ด้วยการสั่นที่ 50 รอบต่อนาทีการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง [0079] (Lyophilisation)[0080] Encapsulated แบคทีเรียและแบคทีเรียฟรีถูกแช่แข็งในน้ำน้ำแข็งเป็นเอทานอลรูมโดยใช้ stepwise เพิ่ม 5% skim นม กลีเซอรอล 1% หรือ DMSO ในคู่ กลั่น น้ำใส่เป็นแบบไครโอโพรเทกแทนต์แล้ว เก็บไว้ที่-80 องศาเซลเซียส ปานกลางการตรึงแบคทีเรียฟรีจะเหมือนกับแบคทีเรียสรุปยกเว้นว่ามันจะไม่เพิ่มวิธี stepwise [0081] สำหรับแบคทีเรียเซลล์สรุป ไครโอโพรเทกแทนต์s เพิ่มในแฟชั่น step-wise เป็นดังนี้:[0082] ทั่วไปกระบวนการ (สำหรับ "ประจำเจือจาง" สื่อวัฒนธรรม):[0083] ใช้ได้สูงสุด 1000 แคปซูลต่อมล.ของหรือหลายนั้นแคปซูล(ประกอบด้วยแบคทีเรีย) ไว้ในหลอดเหยี่ยว 50m 1 ประกอบด้วยสื่อนางสด การสารแขวนลอยนี้เซลล์ (สารละลายบ่ม), มล. 0.5 nal กลางตรึงได้เพิ่มเป็นไครโอโพรเทกแทนต์ให้ผลผลิตปานกลางตรึงกับความเข้มข้น 50% ของไครโอโพรเทกแทนต์ (v/v) ในเงื่อนไขการแสดง ปริมาณรวมของสารแขวนลอยเซลล์ถูก 1 ml แล้วออกกลาง 0.5m1 แล้ว 0.5m1 ของแช่แข็งสื่อถูกเพิ่มเจือจาง 50% ของผลผลิต) เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มถูก incubated 25 นาทีแล้ว อีก 50% (v/v) สารละลายบ่มถูกสลับ cryopreservation สื่อ (เช่นในกรณีของปริมาณรวมของ 1 ml แล้ว 0.5m1 ถูกเอาออก และ 0.5m1 ของแช่แข็งสื่อเพิ่มให้เข้มข้น 75% (v/v) ของสื่อตรึง การบ่มอีกทำออกอีก 25 นาทีก่อนในขั้นตอนต่อไป อีก 50% ของสื่อบ่มถูกแทนที่ ด้วยสื่อแช่แข็ง ในขั้นตอนสุดท้ายที่คณะทันตแพทยศาสตร์ สื่อในแคปซูลเป็น 100% แช่แข็งปานกลาง(A) แห่ง DMSO ไครโอโพรเทกแทนต์ step-wise[0084] ไว้ในหลอดเหยี่ยว 1 50 เมตรประกอบด้วย 9m 1 ของนางสด 16 แคปซูลสื่อ สารแขวนลอยนี้เซลล์ (สารละลายบ่ม), 2000 ของ DMSO มีเพิ่มเป็นไครโอโพรเทกแทนต์ให้การเริ่มต้น DMSO เข้มข้นประมาณ 2% (v/v) เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มถูก incubated 25 นาทีแล้ว มีเพิ่มเติม 200111 DMSO ให้ DMSO เข้มข้นประมาณ 4.2% (v/v) การบ่มอีกทำออกสำหรับ25 นาทีก่อนใน 3 ขั้นตอนต่อไปเพิ่มเติม 200u1 DMSO ถูกเพิ่มเข้ามาถึงตัวสุดท้าย DMSO เข้มข้น 10% (1 ml DMSO ใน 10 ml บ่มสารละลาย)(ข) step-wise แห่งของผสมนม skim/กลีเซอรอล เป็นไครโอโพรเทกแทนต์ (skim นม 5% และ 1% กลีเซอรอลในน้ำ)[00851 ในตัวอย่างนี้ 100 แคปซูลขนาดใหญ่มือถูกวางในหลอดเหยี่ยว 1 50 เมตรประกอบด้วย 9m 1 ของสดนางกลาง 5 เมตร 1 นางกลางได้นำออกมา จากหลอดเหยี่ยว และ 5m 1 ของการบ่มสารละลายประกอบด้วย skim นมเป็นไครโอโพรเทกแทนต์ (skim นม 5% (w/v) และกลีเซอรอล 1% (w/v) ในน้ำ) ถูกเพิ่มในขั้นตอนการบ่มต่อเนื่อง ในนี้ทดลอง 6 คณะทันตแพทยศาสตร์ ขั้นตอนมีดำเนินการ ที่ความเข้มข้นของไครโอโพรเทกแทนต์เพิ่มขึ้นตามลำดับ ของ 50%, 75%, 87.5%, 93.75%, 97%, 100% หมายถึงขั้นตอนฟักตัวสุดท้ายที่เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มอยู่ในสื่อตรึง ระยะฟักตัวในแต่ละขั้นตอนหลังจากนี้ของไครโอโพรเทกแทนต์ skim นมได้ประมาณ 25 นาที ทำให้กลางคณะทันตแพทยศาสตร์ออกผ่าน pipetting ที่ท้ายของแต่ละขั้นตอนบ่มแคปซูลปักผ่านแรงโน้มถ่วง หลังจากขั้นตอนการฟักตัวสุดท้ายกับนม skim 5% (w/v) และกลีเซอรอล 1% (w/v) ในน้ำ ทั้งแช่แข็งสรุปแบคทีเรียและแบคทีเรียฟรีถูกแล้วตรงต้องในโซลูชันนี้ตรึง (เช่นไม่มีขั้นตอนการซักผ้า) lyophilisation ค้างคืน สำหรับการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง ประการแรกแคปซูลพลัส 100% กลางตรึงได้ช็อก-แช่เย็นโดยใช้น้ำ 96% เอทานอล/แห้งแข็ง เม็ดช็อคแช่แข็งสามารถแล้วสามารถเก็บไว้ที่-80 ° C หรือส่งในการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งทันที สามารถใช้เครื่องการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งใด ๆ สำหรับกระบวนการ lyophilisation ตามคำแนะนำของผู้ผลิต สำหรับการนำเสนอการทดลอง การเทอร์โมวิทยาศาสตร์ ModulyoD-ใช้อุปกรณ์ 230 ผลการทดลองเหล่านี้จะแสดงในรูป 1 กับรูปที่ 9 สามารถมองเห็นภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์สว่างฟิลด์ของแคปซูลของรูป 1 บ่มต่อเนื่องของแคปซูลในวิธีการของการประดิษฐ์นี้ ให้ หลังจากไล่น้ำใหม่ encapsulation เป็นเหมือนเดิม และดังนั้น ช่วยเพิ่มความสมบูรณ์ของโครงสร้างของ encapsulation ที่ ในการนี้ยังได้ดูภาพที่แสดงในรูป 4 และรูป 5 ซึ่งแสดงว่า ซัลเฟตเซลลูโลสแคปซูลที่ได้รับการรักษาใช้การรุรุวิธีประดิษฐ์ (ใช้เพิ่มความเข้มข้นของนม skim ในขั้นตอนการบ่ม) แล้ว อบแห้งในของเหลวไนโตรเจนหรือน้ำแข็งเอทานอลรูมรักษารูปร่างของทรงกลมเดิม มีผิวเรียบหลัง rehydration ขณะ เป็นที่เห็นได้ชัดจากภาพที่แสดงใน Figs. 6 ถึง 9 แคปซูลที่ถูกอบแห้งในข้อมูลต่าง ๆ โดยไม่ต้องไครโอโพรเทกแทนต์มีขอบเขตขนาดใหญ่ความเสียหาย หรือถูกทำลาย เพิ่ม [0086] ในการรักษาความสมบูรณ์ของโครงสร้างของแคปซูลกับเซลล์contained therein, the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง method of the การประดิษฐ์ also provides for a significantly higher survival rate of the เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม. รูป 2 shows the protective effect of the (intact) capsules on the tested bacteria during การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, when using, in preparation of the freezing, an สารละลาย บ่ม containing increasing amounts of skim milk and กลีเซอรอล as ไครโอโพรเทกแทนต์. The protective effect was examined by a การอยู่รอดและเติบโตได้ test that was done one day after free-drying following rehydration of the freeze-dried bacteria. The การอยู่รอดและเติบโตได้ was compared to freshly encapsulated bacterial cells as reference and is expressed in % การอยู่รอดและเติบโตได้. As illustrated in รูป 2, after being subjected to the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง method of the การประดิษฐ์ capsules protect the bacteria from การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง (98% การอยู่รอดและเติบโตได้ in encapsulated bacteria compared to 25% การอยู่รอดและเติบโตได้ in free cells), meaning the การอยู่รอดและเติบโตได้ of encapsulated bacteria is significantly higher than that of free bacteria.[0087] รูป 3 แสดงการเปรียบเทียบของ/สาแตกต่างกันสอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

[0072] ในรุรุอธิบายประกอบขององค์ประกอบดังกล่าว, หางนมที่มีอยู่ในความเข้มข้นประมาณ 3% (w / v) ประมาณ 8% (w / v), กลีเซอรอลที่มีอยู่ในความเข้มข้นประมาณ 0.5 % (w / v) ประมาณ 2% (w / v) และคาร์โบไฮเดรตที่มีอยู่ในความเข้มข้นประมาณ 5% (w / v) ไปประมาณ 13% (w / v) ในอีกหนึ่งรุรุอธิบายประกอบ, องค์ประกอบแช่แข็งของการประดิษฐ์มีประมาณ 5% (w / v) นมไขมันต่ำประมาณ 1% (w / v) กลีเซอรอลและประมาณ 10% (w / v) ของคาร์โบไฮเดรต . เพื่อประโยชน์ของภาพประกอบเป็นที่สังเกตว่าที่นี่แก้ปัญหาดังกล่าวอาจได้รับการจัดทำขึ้นโดยการชั่งน้ำหนักออกจากแอลจีของกลีเซอรอล, 5g ของผงนมพร่องมันเนยและ 10g ของทรีฮาโลสเป็น 100m1 จบการศึกษาอุปกรณ์การวัด จากนั้นปริมาณของการแก้ปัญหาที่ถูกสร้างขึ้นเพื่อ 100m1 กับน้ำหมันกลั่นคู่.
[0073] ในบรรทัดที่มีการเปิดเผยข้อมูลดังกล่าวข้างต้นเป็นองค์ประกอบของการประดิษฐ์ที่มีนมพร่องมันเนย, กลีเซอรอลและคาร์โบไฮเดรตที่สามารถนำมาใช้สำหรับ แช่แข็งของเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มตามที่ได้เปิดเผยในที่นี้ แต่อย่างไรก็ตามยังมีองค์ประกอบของการประดิษฐ์ที่มีนมพร่องมันเนย, กลีเซอรอลและคาร์โบไฮเดรตนอกจากนี้ยังสามารถนำมาใช้สำหรับการเตรียมเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม freeze-
สำหรับการอบแห้งที่มีความหมายในการบ่มติดต่อกันของเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มที่มีความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของไครโอโพรเทกแทนต์ตามที่ได้เปิดเผยในที่นี้ ดังนั้นการประดิษฐ์เป็นผู้กำกับยังวิธีการเตรียมเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มสำหรับการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, โดยที่วิธีการประกอบรวมด้วยบ่มเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มในองค์ประกอบของการ การประดิษฐ์ที่มีนมพร่องมันเนย, กลีเซอรอลและคาร์โบไฮเดรต.
[0074] ในการประดิษฐ์จะถูกแสดงต่อไปโดยต่อไปนี้ที่ไม่ จำกัด ตัวอย่างทดลอง. ตัวอย่างตัวอย่างที่ 1: การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งที่มีการเพิ่มขั้นตอนของ ไครโอโพรเทกแทนต์ที่จะสารละลายบ่มได้. [0075] ข้อมูลการทดลอง: [0076] Lactobacillus acidophilus แบคทีเรียโปรไบโอติกที่ถูกห่อหุ้มแช่แข็งแห้งคืนรูปและทดสอบสำหรับกิจกรรมการเผาผลาญเป็นตัวชี้วัดของการอยู่รอดและเติบโตได้. แคปซูลวิเคราะห์ความสมบูรณ์ของโครงสร้างหลังจากการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งและการคืน. [0077] encapsulation แบคทีเรีย[0078] วัฒนธรรมแบคทีเรียของ acidophilus Lactobacillus ความหนาแน่นแสงของ 1 OD ที่ความยาวคลื่น600 นาโนเมตรได้รับการเก็บเกี่ยวและห่อหุ้มใน เซลลูโลสซัลเฟตโซเดียมและโพลีไดอัลลิลไดเมธิลแอมโมเนียมคลอไรด์ (pDADMAC - ที่รู้จักกันภายใต้นานาชาติศัพท์เครื่องสำอางส่วนผสม(INCI) ชื่อ Ge18) เชื้อแบคทีเรียที่ห่อหุ้มมาเลี้ยงในผู้ชาย, Rogosa และชาร์ป (MRS) กลางที่ 37 ° C ที่มีการสั่นสะเทือนที่ 50rpm. [0079] การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง (Lyophilisation) [0080] แบคทีเรียที่ห่อหุ้มและแบคทีเรียฟรีถูกแช่แข็งในเอทานอล / อาบน้ำน้ำแข็งแห้งใช้นอกจากนี้ขั้นตอนที่5% นมพร่องมันเนย, 1% กลีเซอรอลหรือ DMSO ในคู่กลั่นน้ำหมันเป็นไครโอโพรเทกแทนต์แล้วเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียส กลางแช่แข็งสำหรับแบคทีเรียฟรีเช่นเดียวกับแบคทีเรียที่ห่อหุ้มยกเว้นว่ามันจะไม่เพิ่มในลักษณะแบบขั้นตอน. [0081] สำหรับห่อหุ้มเซลล์ของแบคทีเรีย, ไครโอโพรเทกแทนต์ของถูกเพิ่มเข้ามาในจํา Step แฟชั่นฉลาดดังนี้[0082] ขั้นตอนทั่วไป (สำหรับ "เจือจางอนุกรม" ของสื่อวัฒนธรรม): [0083] การใช้สูงสุด 1,000 แคปซูลต่อมิลลิลิตรหรือหลายดังกล่าวแคปซูลใด ๆ(ที่มีเชื้อแบคทีเรีย) ถูกวางไว้ใน 50m1 หลอดเหยี่ยวที่มีขนาดกลางนางสด ไปยังเซลล์นี้สารแขวนลอย (สารละลายบ่ม), 0.5 มล. / NAL ของกลางแช่แข็งที่ถูกเพิ่มเป็นไครโอโพรเทกแทนต์เพื่อให้เป็นสื่อการแช่แข็งที่มีความเข้มข้น 50% ของไครโอโพรเทกแทนต์ (v / v) ในแง่ตัวอย่างถ้าปริมาณรวมของเซลล์สารแขวนลอย 1 มิลลิลิตรแล้วกลาง 0.5m1 ถูกถอดออกและ 0.5m1 ของสื่อการแช่แข็งถูกบันทึกอยู่ในผลผลิตลดสัดส่วน 50% ของทั้งสอง) เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มถูกบ่มเป็นเวลา 25 นาทีและจากนั้นอีก 50% (v / v) ของสารละลายบ่มถูกเปลี่ยนเป็นสื่อเก็บรักษา (เช่นในกรณีของปริมาณรวมของ 1 มิลลิลิตรแล้ว 0.5m1 ถูกถอดออกและ 0.5m1 ของสื่อการแช่แข็งที่ถูกเพิ่มเพื่อให้ความเข้มข้นของ 75% (ที่ v / v) ของสื่อแช่แข็ง. โดยการบ่มได้ดำเนินการอีกครั้งออกมาอีกครั้งเป็นเวลา 25 นาทีก่อนที่จะตามมาในขั้นตอนที่อีก 50% ของสื่อบ่มถูกแทนที่ด้วยสื่อการแช่แข็ง . ในขั้นตอนการบ่มที่ผ่านมาสื่อในแคปซูล 100% แช่แข็งขนาดกลาง. (A) นอกจากนี้ขั้นตอนที่ชาญฉลาดของ DMSO ไครโอโพรเทกแทนต์[0084] 16 แคปซูลถูกวางไว้ในหลอดเหยี่ยว 50m1 มี 9m1 ของนางสดขนาดกลาง. ในมือถือนี้สารแขวนลอย (สารละลายบ่ม) 2000 DMSO ถูกเพิ่มเป็นไครโอโพรเทกแทนต์เพื่อให้ความเข้มข้นDMSO เริ่มต้นประมาณ 2% (v / v). โดยเซลล์ที่ได้ รับการห่อหุ้มถูกบ่มเป็นเวลา 25 นาทีแล้วต่อ 200,111 DMSO ถูกเพิ่มเพื่อให้ได้ความเข้มข้น DMSO ประมาณ 4.2% (v / v). ฟักตัวได้ดำเนินการอีกครั้งออกไปสำหรับ25 นาทีก่อนใน 3 ขั้นตอนที่ตามมาเพิ่มเติม 200u1 DMSO ถูกเพิ่ม ในการเข้าถึงความเข้มข้น DMSO สุดท้ายของ 10% (1 มล. DMSO 10 มิลลิลิตรสารละลายบ่ม). (B) นอกจากนี้ขั้นตอนที่ชาญฉลาดของนมพร่องมันเนย / กลีเซอรอลของผสมเป็นไครโอโพรเทกแทนต์ (5 % นมพร่องมันเนย 1% และกลีเซอรอลในน้ำ) [00851 ในตัวอย่างนี้ 100 มือขนาดใหญ่ที่ทำแคปซูลถูกวางไว้ในหลอดที่มีเหยี่ยว 50m1 9m1 ของกลางนางสด 5m1 ของกลาง MRS ถูกนำออกมาจากหลอดเหยี่ยวและ 5m1 ของสารละลายบ่มที่มีนมพร่องมันเนยเป็นไครโอโพรเทกแทนต์ (5% นมพร่องมันเนย (w / v) และ 1% กลีเซอรอล (w / โวลต์) ในน้ำ) ถูกบันทึกอยู่ในขั้นตอนการบ่มติดต่อกันตามมา ในการทดลองนี้หกขั้นตอนการบ่มได้ดำเนินการซึ่งในความเข้มข้นของไครโอโพรเทกแทนต์เพิ่มขึ้นในลำดับที่ 50%, 75%, 87.5%, 93.75%, 97% และ 100% ความหมายใน ขั้นตอนการบ่มที่ผ่านมาเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มอยู่ในสื่อการแช่แข็ง ระยะฟักตัวในแต่ละขั้นตอนหลังจากที่นอกเหนือจากนมพร่องมันเนยไครโอโพรเทกแทนต์เป็นประมาณ 25 นาที ในตอนท้ายของแต่ละขั้นตอนการบ่มแคปซูลปักหลักผ่านแรงโน้มถ่วงจึงทำให้สื่อบ่มจะถูกลบออกผ่านปิเปต หลังจากขั้นตอนการบ่มที่ผ่านมากับ 5% นมพร่องมันเนย (w / v) และ 1% กลีเซอรอล (w / v) ในน้ำทั้งแบคทีเรียที่ห่อหุ้มแช่แข็งและแบคทีเรียฟรีถูกแล้วภายใต้โดยตรงในการแก้ปัญหาการแช่แข็งนี้ (คือไม่มีขั้นตอนการซักผ้าใด ๆ ) เพื่อ lyophilisation ในชั่วข้ามคืน สำหรับการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งแรกแคปซูลบวกกลางแช่แข็ง 100% ที่มีการแช่แข็งช็อตโดยใช้เอทานอล 96% / อาบน้ำน้ำแข็งแห้ง เม็ดช็อตแช่แข็งจากนั้นจะสามารถเก็บไว้ที่ -80 ° C หรือส่งการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งทันที ใด ๆ การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งเครื่องสามารถนำมาใช้สำหรับกระบวนการ lyophilisation ตามคำแนะนำของผู้ผลิต สำหรับการทดสอบปัจจุบันที่เทอร์โมวิทยาศาสตร์ ModulyoD- 230 อุปกรณ์ที่ใช้ ผลที่ได้จากการทดลองเหล่านี้จะแสดงในรูปที่ 1 ถึง 9 รูปที่สามารถเห็นได้จากภาพกล้องจุลทรรศน์สนามที่สดใสของแคปซูลรูป 1, บ่มติดต่อกันแคปซูลในวิธีการของการประดิษฐ์นี้ให้อีกครั้งหลังจากความชุ่มชื้น การห่อหุ้มเหมือนเดิมและดังนั้นจึงช่วยเพิ่มความสมบูรณ์ของโครงสร้างของการห่อหุ้ม ดูในเรื่องนี้นอกจากนี้ยังมีภาพที่แสดงในรูปที่ 4 และรูปที่ 5 แสดงให้เห็นว่าแคปซูลซัลเฟตเซลลูโลสที่ได้รับการรักษาโดยใช้รุรุของวิธีการที่สร้างสรรค์ (โดยใช้ความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของนมพร่องมันเนยในขั้นตอนการบ่ม) และจากนั้นแห้งทั้งใน ของเหลวไนโตรเจนหรือเอทานอล/ น้ำแข็งแห้งรักษารูปทรงกลมของพวกเขาเดิมที่มีพื้นผิวเรียบหลังจากที่ในขณะคืนเป็นที่เห็นได้ชัดจากภาพที่แสดงในมะเดื่อ 6-9 แคปซูลที่มีความแห้งในบัฟเฟอร์ต่างๆโดยไม่มีไครโอโพรเทกแทนต์มีขอบเขตขนาดใหญ่ได้รับความเสียหายหรือถูกทำลาย. [0086] นอกจากนี้การรักษาความสมบูรณ์ของโครงสร้างของแคปซูลที่มีเซลล์ที่มีอยู่นั้นการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งวิธีการของการประดิษฐ์นอกจากนี้ยังมีอัตราการรอดตายสูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม รูปที่ 2 แสดงผลการป้องกันของ (เหมือนเดิม) แคปซูลแบคทีเรียทดสอบในระหว่างการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งเมื่อใช้ในการเตรียมความพร้อมของการแช่แข็งซึ่งเป็นสารละลายบ่มที่มีจำนวนเพิ่มมากขึ้นของนมพร่องมันเนยและกลีเซอรอลเป็นไค รโอโพรเทกแทนต์ ป้องกันผลกระทบถูกตรวจสอบโดยการอยู่รอดและเติบโตได้ทดสอบที่ได้ทำวันหนึ่งหลังจากการอบแห้งที่ปราศจากการคืนต่อไปนี้ของเชื้อแบคทีเรียที่แห้ง การอยู่รอดและเติบโตได้เป็นเมื่อเทียบกับสดห่อหุ้มเซลล์ของแบคทีเรียเป็นข้อมูลอ้างอิงและจะแสดงใน% การอยู่รอดและเติบโตได้ ดังแสดงในรูปที่ 2 หลังจากที่ได้รับภายใต้การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งวิธีการของการประดิษฐ์แคปซูลป้องกันแบคทีเรียจากการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง (98% การอยู่รอดและเติบโตได้ในเชื้อแบคทีเรียที่ห่อหุ้มเมื่อเทียบกับ 25 % การอยู่รอดและเติบโตได้ในเซลล์ฟรี) หมายถึงการอยู่รอดและเติบโตได้ห่อหุ้มของเชื้อแบคทีเรียอย่างมีนัยสำคัญสูงกว่าของแบคทีเรียฟรี. [0087] รูปที่ 3 แสดงการเปรียบเทียบของทั้งสองแตกต่างกัน / สา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

[ 0072 ] ในรุรุอธิบายประกอบ เช่น องค์ประกอบ , skim milk เป็นปัจจุบันในความเข้มข้นประมาณ 3% ( w / v ) ประมาณ 8 % ( w / v ) กลีเซอรอลอยู่ในระดับความเข้มข้น 0.5% ( w / v ) ประมาณ 2% ( w / v ) และคาร์โบไฮเดรตคือ ปัจจุบันในระดับความเข้มข้น 5% ( w / v ) ประมาณ 13 % ( w / v ) ในรุรุอธิบายประกอบเพิ่มเติมหนึ่งแช่แข็งส่วนประกอบของการประดิษฐ์มีประมาณ 5% ( w / v ) นม ประมาณ 1% ( w / v ) กลีเซอรอลประมาณ 10% ( w / v ) ของคาร์โบไฮเดรต เพราะภาพมันไว้ตรงนี้ว่า การแก้ไขปัญหาดังกล่าวอาจจะเตรียมไว้ โดยชั่งออก LG ของกลีเซอรอล 5 จีของหางนมผง และ 10g ของทรีฮาโลสเป็น 100m1 จบอุปกรณ์วัด จากนั้นปริมาตรของสารละลายที่ถูกสร้างขึ้นเพื่อ 100m1 คู่หมันกลั่นน้ำ .
[ 0073 ] สอดคล้องกับข้างต้นเปิดเผย องค์ประกอบของการประดิษฐ์ที่มีหางกะทิ กลีเซอรอลและคาร์โบไฮเดรตที่สามารถใช้สำหรับแช่แข็งเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มเป็นที่เปิดเผยในที่นี้ อย่างไรก็ตามเป็นส่วนประกอบของการประดิษฐ์ที่มีหางกะทิ กลีเซอรอลและคาร์โบไฮเดรตนอกจากนี้ยังสามารถใช้สำหรับการเตรียมเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มสำหรับแช่แข็ง -
แห้ง ความหมายในการบ่มติดต่อกันของเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มเพิ่มความเข้มข้นของไครโอโพรเทกแทนต์เป็นที่เปิดเผยในที่นี้ดังนั้น การประดิษฐ์ก็เข้าสู่วิธีการเตรียมตัวสำหรับการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งโดยที่เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม , วิธีการเพาะประกอบรวมด้วยที่เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มในองค์ประกอบของการประดิษฐ์ที่มีหางกะทิกลีเซอรอลและคาร์โบไฮเดรต 0074
[ ] การประดิษฐ์จะเพิ่มเติมภาพประกอบ โดยต่อไปนี้ไม่จำกัดทดลองตัวอย่าง


ตัวอย่าง 1 ตัวอย่าง : การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งประกอบแบบไครโอโพรเทกแทนต์กับสารละลายบ่ม

[ ]
0075 ข้อมูล :[ 0076 Lactobacillus acidophilus แบคทีเรียโปรไบโอติก คือ Encapsulated ] แช่แข็งแห้ง ,
ได้ทำการ รีไฮเดรทมและทดสอบกิจกรรมการเผาผลาญอาหารเป็นวัดของการอยู่รอดและเติบโตได้ . แคปซูลวิเคราะห์หาโครงสร้างของหลังการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งศึกษา .
[ ]

การ 0077 แบคทีเรีย[ 0078 ] แบคทีเรีย Lactobacillus acidophilus ในวัฒนธรรมของความหนาแน่นของ Optical 1 OD ที่ความยาวคลื่น 600 nm เป็น
เก็บเกี่ยวและห่อหุ้มในเซลลูโลสโซเดียมโพลีซัลเฟต และแอมโมเนียมคลอไรด์ ( ไดอัลลิลไดเมธิล pdadmac - รู้จักกันภายใต้ระบบการตั้งชื่อของนานาชาติ
เครื่องสำอางส่วนผสม ( inci ) ชื่อ ge18 ) ห่อหุ้มแบคทีเรียที่เพาะเลี้ยงใน เดอ แมนและ rogosa ชาร์ป ( นาง ) กลางที่ 37 ° C เขย่า ที่ 50rpm .
[ ] การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง 0079 ( lyophilisation )
[ ] 0080 ห่อหุ้มแบคทีเรียและฟรีแบคทีเรียถูกแช่แข็งในเอทานอล / น้ำแข็งแห้งนํ้า
ใช้คนเพิ่ม 5 % นมไขมันต่ำ 1 % กลีเซอรอลหรือ DMSO ในคู่หมันน้ำกลั่น เป็นไครโอโพรเทกแทนต์แล้วเก็บรักษาที่อุณหภูมิ - 80 องศาอาหารตรึงแบคทีเรียฟรีจะเหมือนกันสำหรับห่อหุ้มแบคทีเรีย ยกเว้นว่ามันไม่เพิ่มในลักษณะคน
[ 0081 ] สำหรับห่อหุ้มเซลล์แบคทีเรียไครโอโพรเทกแทนต์ s , เพิ่มในขั้นปัญญาแฟชั่นดังนี้
ขั้นตอนทั่วไป [ 0082 ] ( " ทากทะเล " ของวัฒนธรรมสื่อ ) :
[ 0083 ] โดยใช้สูงสุด 1