The diameter of the selected column

The diameter of the selected column was kept to a maximum to
allow increased flow-rates for faster lipid clearance. The mobile
phase had low viscosity, allowing flow rates up to 3 mL/min
(5 mL/min for 5 lm columns) without excessive back-pressure.
This promoted rapid clearance of triglycerides from the column,
creating a more stable chromatographic environment. The work
of Thompson et al. (2013) overcame the same problem through
column switching, thereby diverting lipid to waste from a short
pre-column. Chromatography was continued here at elevated flow
rate until the relatively polar unesterified a-tocopherol had eluted
to prevent it being carried over to the next chromatogram. Late
eluting b- and c-tocopherols did not cause interference problems
because the peaks were indefinitely broadened.
Vitamins A and E both have natural fluorescence, and
b-carotene a selective 450 nm viewing wavelength, so are amenable
to simplified detection in the presence of other lipid material.
Co-extracted lipids passed through the detectors without response,
and exited the column quickly enough to prevent accumulation
and associated chromatographic changes. In the absence of dualchannel
fluorescence detection, retinyl esters could be satisfactory
detected by UVD at 325 nm with a multi-wavelength detector.
However, vitamin E was necessarily detected by fluorescence
because UVD at 284 nm experienced extensive interferences.
It was important to avoid incursion of water onto the silica column
with consequently diminished retention times. As part of this
process, the mobile phase was passed through anhydrous sodium
sulphate desiccant before use, placed above the 0.45 um solvent
clarification filter. Refiltration through anhydrous sodium sulphate
was also an option to maintain low humidity. To conserve solvents,
the mobile phase was recycled for a week, otherwise replaced
when retention or baseline shifts were noted.
Retention times were highly sensitive to the concentration of
the polar modifier isopropanol (IPA), which was necessarily pipetted
into hexane in an accurate manner. A number of IPA concentrations
were tested over the range 0.04–0.08%, with 0.06% shown to
give good isomer separations on the selected Alltech column. This
was reduced or increased as required in small increments 50 lL
increments to retain optimal separation.
Chromatographic selectivity for the analytes was also dependent
on IPA concentration, in particular, the retention of b-apoester
rapidly decreased with increasing IPA until it eluted near
the retinyl or a-tocopheryl esters. However, the unique FLD detection
modes for vitamins A and E esters overcame any potential
chromatographic interferences from b-apo-ester, and conversely,
neither vitamin absorbed in the visible region at 450 nm. Similarly,
at higher IPA concentrations a-tocopheryl acetate also eluted near
retinyl propionate, but without spectral interferences.
Fig. 1 shows the chromatographic output for a typical infant
formula extract containing supplementary retinyl palmitate,
a-tocopheryl acetate and b-carotene using concurrent dualchannel
fluorescence and visible detection. In the latter detection
mode, only b-carotene (combined Z (cis) – and E (trans) isomers)
and b-apo-ester internal standard are visible. It should be noted
that a-carotene, if present, is not separated from b-carotene and
calculations will essentially represent total carotenoid. In addition,
the xanthophylls lutein, astaxanthin and canthaxanthin did not
chromatographically interfere with the non-polar carotenes,
although lycopene co-eluted with b-carotene.
Fig. 2 shows chromatograms of a typical whole-milk powder
extract containing supplementary retinyl acetate and
a-tocopheryl acetate, with naturally occurring retinyl esters and
b-carotene. When geometric Z-isomer (cis) peaks were present
they eluted prior to the corresponding all-E (all-trans) isomer peaks
and were included to give a total peak area, but without corrections
for their lower biopotency.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เส้นผ่าศูนย์กลางของคอลัมน์ที่เลือกถูกเก็บสูงไปอนุญาตให้เพิ่มอัตราการไหลสำหรับเคลียร์ไขมันเร็ว มือถือระยะมีความหนืดต่ำ ให้ราคาไหลถึง 3 mL/min(5 มล/นาทีสำหรับคอลัมน์ lm 5) โดยไม่ต้องดันกลับมากเกินไปนี้ส่งเสริมเคลียร์อย่างรวดเร็วของระดับไตรกลีเซอไรด์จากคอลัมน์สร้างสภาพแวดล้อม chromatographic มีเสถียรภาพมากขึ้น การทำงานปัญหาเดียวกันผ่าน overcame ของทอมป์สันและ al. (2013)คอลัมน์สลับ จึงโอนไขมันเสียจากสั้น ๆคอลัมน์ก่อน Chromatography ได้อย่างต่อเนื่องที่นี่ที่กระแสสูงอัตราจนกว่ามี eluted ขั้วค่อนข้าง unesterified a-tocopherolการป้องกันจะถูกยกยอดมาให้ chromatogram ถัดไป สายb - และ c-tocopherols eluting ได้ไม่มีปัญหาสัญญาณรบกวนเนื่องจากไม่มีกำหนดได้ให้แห่งวิตามิน A และ E ทั้งสองมี fluorescence ธรรมชาติ และb-แคโรทีนความ 450 nm ดูงาน ดังนั้น amenableการตรวจหาภาษาในต่อหน้าของวัสดุอื่น ๆ ไขมันโครงการร่วมแยกผ่านเครื่องตรวจจับโดยไม่มีการตอบสนองและออกจากคอลัมน์อย่างรวดเร็วเพียงพอเพื่อป้องกันการสะสมและเปลี่ยนแปลง chromatographic ที่เกี่ยวข้อง ของ dualchannelตรวจสอบ fluorescence, retinyl esters อาจจะพอใจตรวจพบ โดย UVD ที่ 325 nm ด้วยเครื่องตรวจจับความยาวคลื่นหลายตัวอย่างไรก็ตาม วิตามินอีจำเป็นต้องพบ fluorescenceเพราะ UVD ที่ 284 nm พบ interferences อย่างละเอียดก็ต้องหลีกเลี่ยงการบุกรุกของน้ำไปยังคอลัมน์ซิลิก้าเวลาคงที่จึงลดลง เป็นส่วนหนึ่งของกระบวนการ ขั้นตอนการเคลื่อนที่ผ่านไดโซเดียมซัลเฟตชื้นก่อนใช้ วางข้าง 0.45 ในตัวทำละลายอึมตัวกรองข้อมูลชี้แจง Refiltration ผ่านไดโซเดียมซัลเฟตยังเป็นตัวเลือกในการรักษาความชื้นต่ำ ถนอมหรือสารทำละลายเฟสเคลื่อนรีไซเคิลสำหรับสัปดาห์ หรือ แทนเมื่อได้กล่าวกะรักษาหรือพื้นฐานเวลาเก็บข้อมูลมีความไวสูงเพื่อความเข้มข้นของisopropanol ปรับขั้ว (IPA), ซึ่งจำเป็นต้องมี pipettedในเฮกเซนในลักษณะถูกต้อง จำนวนความเข้มข้นของ IPAทดสอบช่วง 0.08-0.04%, 0.06% แสดงให้ให้ประโยชน์ดีหลังบนคอลัมน์ Alltech เลือก นี้จะลดลง หรือเพิ่มขึ้นเป็นจำเป็นในทีละ 50ทีการรักษาแยกที่เหมาะสมใว chromatographic สำหรับ analytes ยังไม่ขึ้นบน IPA สมาธิ โดยเฉพาะ เก็บรักษาของ b-apoesterลดลงอย่างรวดเร็ว ด้วยการเพิ่ม IPA จนมัน eluted ใกล้esters retinyl หรือเป็นหน่วยสากล อย่างไรก็ตาม การตรวจพบ FLD เฉพาะโหมดสำหรับวิตามิน A และ E esters overcame เกิดinterferences chromatographic จาก b-อาโปเอส และในทางกลับ กันวิตามินไม่ดูดซึมในภูมิภาคเห็นที่ 450 nm ในทำนองเดียวกันที่สูงกว่า IPA ความเข้มข้นเป็นหน่วยสากล acetate eluted ยัง ใกล้retinyl propionate แต่ไม่ มี interferences สเปกตรัมFig. 1 แสดงผล chromatographic สำหรับเด็กทั่วไปสูตรสารสกัดที่มีเสริม retinyl palmitateเป็นหน่วยสากลและใช้กัน dualchannel นสูง bfluorescence และตรวจพบเห็น ในการตรวจพบหลังโหมด เฉพาะบีแคโรทีน (รวม Z (cis) – และ E (ธุรกรรม) isomers)และ b-อาโปเอสมาตรฐานภายในจะเห็น ควรจดบันทึกที่เป็นแคโรทีน ถ้ามี ไม่แยกออกจากแคโรทีนบี และการคำนวณจะเป็นแสดง carotenoid รวม นอกจากนี้ลูทีน xanthophylls, astaxanthin และ canthaxanthin ไม่รบกวน carotenes ไม่ใช่ขั้วโลก chromatographicallyแม้ว่า lycopene eluted ร่วมกับบีแคโรทีนFig. 2 แสดง chromatograms ของทั้งหมดนมผงทั่วไปแยกประกอบด้วย acetate retinyl เสริม และเป็นหน่วยสากล acetate กับธรรมชาติเกิด retinyl esters และb-แคโรทีน เมื่อพีคส์ (cis) Z-ไอโซเมอร์เรขาคณิตได้ นำเสนอพวกเขา eluted ก่อนเกี่ยวข้องทั้งหมดอี (ออทรานส์) ไอโซเมอร์พีคส์และรวมให้เป็นยอดรวมพื้นที่ แต่ไม่ มีการแก้ไขสำหรับ biopotency ที่ด้านล่างของพวกเขา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เส้นผ่านศูนย์กลางของคอลัมน์ที่เลือกที่ถูกเก็บไว้ให้สูงสุดที่อนุญาตให้มีการเพิ่มอัตราการไหลสำหรับพิธีการไขมันได้เร็วขึ้น โทรศัพท์มือถือขั้นตอนที่มีความหนืดต่ำที่ช่วยให้อัตราการไหลถึง 3 มิลลิลิตร / นาที (5 มิลลิลิตร / นาทีเป็นเวลา 5 คอลัมน์ LM) โดยแรงดันย้อนกลับมากเกินไป. นี้การส่งเสริมการกวาดล้างอย่างรวดเร็วของไตรกลีเซอไรด์จากคอลัมน์การสร้างสภาพแวดล้อมโครมามีเสถียรภาพมากขึ้น การทำงานของ ธ อมป์สันและอัล (2013) เอาชนะปัญหาเดียวกันผ่านการเปลี่ยนคอลัมน์จึงโอนไขมันเสียจากสั้นคอลัมน์ก่อน โครมาโตได้อย่างต่อเนื่องที่นี่ที่ไหลสูงอัตราจน unesterified ค่อนข้างขั้วโลกโทโคฟีรอได้ชะเพื่อป้องกันไม่ให้มีการดำเนินการไปยัง chromatogram ต่อไป ปลายB- eluting และ C-tocopherols ไม่ก่อให้เกิดปัญหาการรบกวนเพราะยอดเขาที่ถูกขยายไปเรื่อยๆ . วิตามิน A และ E ทั้งสองมีการเรืองแสงธรรมชาติและB-แคโรทีนหัวกะทิ 450 นาโนเมตรความยาวคลื่นชมเพื่อให้มีหน้าที่ในการตรวจจับง่ายในการปรากฏตัวของวัสดุไขมันอื่น ๆ . ไขมันร่วมสกัดผ่านเครื่องตรวจจับโดยไม่ต้องตอบสนองและเดินออกมาจากคอลัมน์ได้อย่างรวดเร็วพอที่จะป้องกันการสะสมและการเปลี่ยนแปลงโครมาเกี่ยวข้อง ในกรณีที่ไม่มี dualchannel การตรวจสอบการเรืองแสง, เอสเทอ retinyl อาจจะเป็นที่น่าพอใจที่ตรวจพบโดยUVD ที่ 325 นาโนเมตรที่มีการตรวจจับหลายความยาวคลื่น. อย่างไรก็ตามวิตามินอีได้รับการตรวจพบจำเป็นโดยการเรืองแสงเพราะ UVD ที่ 284 นาโนเมตรที่มีประสบการณ์การรบกวนที่กว้างขวาง. มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะหลีกเลี่ยงการโจมตี น้ำบนคอลัมน์ซิลิกาที่มีลดลงดังนั้นการเก็บรักษาครั้ง ในฐานะที่เป็นส่วนหนึ่งของกระบวนการขั้นตอนที่ถูกส่งผ่านมือถือผ่านโซเดียมปราศจากสารดูดความชื้นซัลเฟตก่อนการใช้งานที่วางไว้ดังกล่าวข้างต้น0.45 หนอตัวทำละลายกรองชี้แจง Refiltration ผ่านโซเดียมซัลเฟตปราศจากก็ยังมีตัวเลือกในการรักษาที่มีความชื้นต่ำ เพื่อการอนุรักษ์ตัวทำละลายเฟสเคลื่อนที่ถูกนำกลับมาใช้เป็นเวลาหนึ่งสัปดาห์แทนที่เป็นอย่างอื่นเมื่อเก็บรักษาหรือการเปลี่ยนแปลงพื้นฐานที่ถูกตั้งข้อสังเกต. ครั้งการเก็บรักษาเป็นอย่างสูงที่มีความไวต่อความเข้มข้นของisopropanol ปรับปรุงขั้วโลก (IPA) ซึ่งได้รับการปิเปตจำเป็นต้องเข้าไปในเฮกเซนในลักษณะที่ถูกต้อง. จำนวนของความเข้มข้น IPA ได้รับการทดสอบในช่วง 0.04-0.08% โดยมี 0.06% แสดงให้เห็นว่าให้แยกisomer ที่ดีในคอลัมน์ออลเทคที่เลือก นี้ได้รับการลดลงหรือเพิ่มขึ้นตามที่กำหนดในทีละน้อย 50 จะเพิ่มขึ้นที่จะเก็บแยกที่ดีที่สุด. หัวกะทิโครมาสำหรับวิเคราะห์ก็ยังขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของ IPA โดยเฉพาะอย่างยิ่งการเก็บรักษาข apoester ลดลงอย่างรวดเร็วด้วยการเพิ่ม IPA จนกว่าจะชะใกล้retinyl หรือ-โทโคเฟอริเอสเทอ อย่างไรก็ตามการตรวจสอบที่ไม่ซ้ำกัน FLD โหมดสำหรับวิตามินเอและเอสเทอ E เอาชนะใด ๆ ที่อาจรบกวนโครมาจากB-APO-เอสเตอร์และตรงกันข้ามวิตามินไม่ดูดซึมในภูมิภาคที่มองเห็นที่ 450 นาโนเมตร ในทำนองเดียวกันที่ความเข้มข้นที่สูงขึ้น IPA acetate A-โทโคเฟอริชะใกล้ propionate retinyl แต่ไม่รบกวนสเปกตรัม. รูป 1 แสดงให้เห็นถึงการส่งออกโครมาสำหรับเด็กทารกทั่วไปสารสกัดจากสูตรที่มีretinyl palmitate เสริมA-tocopheryl acetate และขแคโรทีนโดยใช้ dualchannel พร้อมกันเรืองแสงที่มองเห็นและการตรวจสอบ ในการตรวจสอบหลังโหมดเพียงขแคโรทีน (รวม Z (CIS) - และอี (ทรานส์) ไอโซเมอ) และ B-APO-เอสเตอร์มาตรฐานภายในจะมองเห็นได้ มันควรจะสังเกตว่าแคโรทีนถ้าปัจจุบันไม่ได้แยกออกจากขแคโรทีนและการคำนวณเป็นหลักจะเป็นตัวแทนรวมcarotenoid นอกจากนี้xanthophylls ลูทีน astaxanthin และ canthaxanthin ไม่chromatographically ยุ่งเกี่ยวกับ carotenes ไม่มีขั้วแม้ว่าไลโคปีนร่วมชะด้วยb แคโรทีน. รูป 2 แสดง chromatograms ของผงทั้งนมทั่วไปสารสกัดจากอะซิเตทที่มีretinyl เสริมและA-tocopheryl acetate กับธรรมชาติที่เกิดขึ้นและเอสเทอ retinyl ขแคโรทีน เมื่อเรขาคณิต Z-isomer (CIS) ยอดเขาที่อยู่ในปัจจุบันพวกเขาชะก่อนที่จะสอดคล้องกันทุก-E (ทุกทรานส์) ยอด isomer และถูกรวมเพื่อให้มีพื้นที่รวมสูงสุด แต่ไม่มีการแก้ไขสำหรับbiopotency ล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เส้นผ่าศูนย์กลางของคอลัมน์ที่เลือกไว้ เพื่อให้อัตราการไหลสูงสุดเพิ่มขึ้น

ไม่ได้ไขมันได้เร็วขึ้น ระยะเคลื่อนที่
มีความหนืดต่ำ ช่วยให้อัตราการไหลถึง 3 ml / min
( 5 มิลลิลิตรต่อนาทีเป็นเวลา 5 อิมคอลัมน์ ) โดยไม่ต้องมากเกินไปความดันย้อนกลับ .
นี้เลื่อนพิธีการอย่างรวดเร็วของไตรกลีเซอไรด์จากคอลัมน์
การสร้างสภาพแวดล้อมและมีเสถียรภาพมากขึ้น งาน
ของ Thompson et al .( 2013 ) เอาชนะปัญหาเดียวกันผ่าน
คอลัมน์เปลี่ยนจึงโอนไขมันเสียจากระยะสั้น
Pre คอลัมน์ โครมาโทกราฟี คือต่อที่นี่ที่อัตราการไหลสูงจนทั้งนี้ unesterified

ค่อนข้างขั้วโลกมีตัวอย่างเพื่อไม่ให้ถูกอุ้มมาโครมาถัดไป สาย B -
hexane และไม่ก่อให้เกิดปัญหาการรบกวน
c-tocopherolsเพราะยอดเป็นวงกว้างไปเรื่อย ๆ .
วิตามิน A และ E มีการเรืองแสงธรรมชาติและ
- เลือก 450 nm ดูคลื่น ดังนั้น สาธุ
เพื่อง่ายในการตรวจสอบวัสดุไขมันอื่น ๆ .
Co สกัดไขมันผ่านเครื่องตรวจจับไร้การตอบสนอง ,
แล้วก็ออกจากคอลัมน์ได้อย่างรวดเร็วพอที่จะป้องกันการสะสม
และการเปลี่ยนแปลง และที่เกี่ยวข้องในการขาดของดูอัลแชนแนล
การตรวจหา เรติน เทอร์ อาจจะพอใจ
ตรวจพบ โดยโปรเซสเซอร์ที่ 325 nm ด้วยเครื่องตรวจจับความยาวคลื่นหลาย .
แต่วิตามินอียังต้องตรวจโดยการเรืองแสง
เพราะโปรเซสเซอร์ที่ 284 nm ที่มีประสบการณ์กว้างขวาง interferences .
มันเป็นสิ่งสำคัญเพื่อหลีกเลี่ยงการบุกรุกของน้ำบนซิลิกาคอลัมน์
จึงลดลงด้วย การเก็บรักษาครั้งเป็นส่วนหนึ่งของกระบวนการนี้
, เฟสเคลื่อนที่ผ่านอันไฮดรัสโซเดียมซัลเฟตสารดูดความชื้น
ก่อนใช้งาน วางไว้เหนือ 0.45 คือตัวทำละลาย
ชี้แจงตัวกรอง refiltration ผ่านอันไฮดรัสโซเดียมซัลเฟต
ยังมีตัวเลือกเพื่อรักษาความชื้นต่ำ อนุรักษ์ละลาย
เฟสเคลื่อนที่กลับมา 1 สัปดาห์ มิฉะนั้นแทนที่
เมื่อกักเก็บหรือพื้นฐานกะ
เป็นอักษรไทยเวลากักมีความไวต่อความเข้มข้นของไอโซโพรพานอล
2 ขั้ว ( IPA ) ซึ่งเป็น pipetted
ในเฮกเซนในลักษณะที่ถูกต้อง หมายเลขของ IPA ความเข้มข้น
ทดสอบผ่านช่วง 0.04 - 0.08% 0.06% แสดงด้วย

ดีแยกไอโซเมอร์ที่เลือกเพราะคอลัมน์ นี้ลดลงหรือเพิ่มขึ้นตามที่ต้องการ

50 จะเพิ่มขึ้นในขนาดเล็กเพิ่มขึ้นเพื่อรักษาและการแยกที่เหมาะสม .
สำหรับสารก็ขึ้นอยู่กับ
ใน IPA ความเข้มข้น โดยเฉพาะใน b-apoester
ลดลงอย่างรวดเร็วกับ IPA เพิ่มขึ้นจนใกล้มาก หรือตัวอย่าง
a-tocopheryl เอสเทอร์ . อย่างไรก็ตาม เฉพาะ FLD ตรวจจับ
โหมดสำหรับวิตามิน A และ E เอสเทอร์เอาชนะ
อาจเกิดขึ้นใด ๆและการแทรกแซงจาก b-apo-ester และในทางกลับกัน
หรือวิตามินดูดซึมในเขตที่มองเห็นที่ 450 nm . โดย
ที่ความเข้มข้น a-tocopheryl เทตยังสูงกว่า IPA ตัวอย่างใกล้
เรติน propionate , แต่ไม่มีการการแทรกแซง .
รูปที่ 1 แสดงผลเป็นปกติและทารกสูตรสารสกัดที่มี retinyl palmitate เสริม

,a-tocopheryl อะซิเตท และเบต้า - แคโรทีน โดยใช้การดูอัลแชนแนล
พร้อมกัน และมองเห็นการตรวจสอบ ในโหมดตรวจจับ
หลังเท่านั้น ( รวม ซี เบต้าแคโรทีน ( CIS ) ) และ E ( Trans ) คือ )
b-apo-ester ภายในและมาตรฐานจะมองเห็น มันควรจะสังเกต
ที่ a-carotene ถ้าปัจจุบันจะไม่แยกจากเบต้าแคโรทีนและ
การคำนวณเป็นหลักจะเป็นตัวแทนของแคโรทีนอยด์ทั้งหมด นอกจากนี้
การเสริมแอสตาแซนทินและสารแซนโทฟิลล์ , แคนทาแซนทินไม่ยุ่งเกี่ยวกับอลิ
สาร carotenes , ไลโคปีน Co
ถึงแม้ว่าตัวอย่างกับเบต้าแคโรทีน .
รูปที่ 2 แสดงกลิ่นของทั่วไปทั้งนมผงสกัดที่มีอะซีเทตเสริม

a-tocopheryl อะซีเทตกับธรรมชาติที่เกิดขึ้นและเอสเทอร์
- .เมื่อทางเรขาคณิต z-isomer ( CIS ) ยอดอยู่
พวกเขาตัวอย่างก่อนที่จะ all-e สอดคล้องกัน ( Trans ) เซ็นเตอร์ยอด
และถูกรวมเพื่อให้พื้นที่สูงสุดทั้งหมด แต่ไม่มีการแก้ไขให้ biopotency ลด

.