the 10 highest expressing clones we

the 10 highest expressing clones were expanded into 125 mL Erlenmeyer flasks containing 40 mL of culture media. Single clone cell banks were made when cell viability reached >90%.
Material generated from the stable pool and the single clone cultures were used in this study, as it was observed that the antibody quality from each differed after capture via Protein A chromatography. The pooled material that had been banked during the selection process was later found to have a higher aggregate content than the single cell clone produced downstream, giving two populations of the same antibody; one highly aggregated and one less aggregated. Downstream processing was the same for both cultures, and the increased aggregation was not due to be process dependent.
Cell culture and cell harvest
Cell cultures were performed in a 20 L WAVE bioreactor (GE Healthcare Life Sciences) with a 10 L working volume. Following expansion in culture flasks, the CHO seed culture of 2 L was transferred into 8 L of preheated media to a final volume of 10 L. At this point, the cell viability was 100% and had a viable cell density (VCD) of 1.0 3 106 cells/mL. Culture conditions were maintained as follows; 2.5 LMH air, 3% CO2, rocker speed of 10 rocks per minute, and a 7 rocker angle and an initial temperature of 37 C. When the cells reached a VCD of 3.0 3 106 cells/mL, the temperature was shifted to 30 C. This point marked day zero of a 21-day culture. Samples were taken daily to determine VCD and viability (NOVA Bioflex). After 21 days of culture cells were harvested by filtration (1.2 mm 0.464 m2 filter, part number 5555303P0-SS followed by 0.45/0.20 mm 0.186 m2 part number 544307H9-FF [Sartorius]) and concentrated to a 1 L working volume by 30 kD ultrafiltration (SiusTM-LS TFF Cassette, 0.1 m2, part number PP030L01L, TangenX).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

10 ที่สูงที่สุดแสดงโคลนถูกขยายเข้าไปในขวด Erlenmeyer 125 มล.ที่ 40 มล.วัฒนธรรมสื่อที่ประกอบด้วย ทำธนาคารเดียวโคลนเซลล์เมื่อเซลล์ชีวิต > 90%วัสดุที่สร้างขึ้นจากสระมีเสถียรภาพ และวัฒนธรรมเดียวโคลนถูกใช้ในการศึกษานี้ พบว่า แอนติบอดีที่มีคุณภาพจากแต่ละที่แตกต่างหลังจากถ่ายภาพผ่านโปรตีน chromatography ที่ วัสดุ pooled ที่ได้รับเงินในระหว่างกระบวนการคัดเลือกในภายหลังพบว่ามีปริมาณรวมสูงกว่าการโคลนเซลล์เดียวผลิตปลายน้ำ ให้ประชากรสองของแอนติบอดีเหมือนกัน รวมสูงและน้อยรวมกัน ต้นเป็นเหมือนกันสำหรับทั้งสองวัฒนธรรม และการรวมเพิ่มขึ้นไม่ได้เนื่องจากจะขึ้นกับกระบวนการเซลล์และเก็บเกี่ยวเซลล์วัฒนธรรมเซลล์ถูกดำเนินการใน 20 L คลื่นถังปฏิกรณ์ชีวภาพ (GE สุขภาพวิทยาศาสตร์) มีปริมาณงาน 10 L ต่อขยายในวัฒนธรรมขวด ช่อเมล็ดวัฒนธรรมของ 2 L โอนย้ายเข้า L 8 สื่อหล่อไปไดรฟ์ข้อมูลสุดท้ายของ 10 L. ที่จุดนี้ ชีวิตเซลล์ 100% และมีความหนาแน่นเซลล์ทำงานได้ (VCD) ของ 1.0 3 106 เซลล์/mL จัดการวัฒนธรรมเงื่อนไขดังนี้ 2.5 ผู้จัด LMH อากาศ 3% CO2 หิน 10 นาที และมุม 7 โยกโยกเร็วและมีอุณหภูมิเริ่มต้น 37 เซลเซียส เมื่อเซลล์ถึง VCD ของ 3.0 3 106 เซลล์/มิลลิลิตร อุณหภูมิถูกเลื่อนขึ้นไปค. 30 จุดนี้ทำเครื่องหมายวันศูนย์วัฒนธรรม 21 วัน ตัวอย่างที่ถ่ายทุกวัน VCD และชีวิต (Bioflex โน) หลังจากวันที่ 21 ของวัฒนธรรม เซลล์ถูกเก็บเกี่ยว โดยการกรอง (ตัวกรองของ 0.464 m2 1.2 มม. ส่วนเลข 0 P 5555303-SS ตาม ด้วย 0.45/0.20 มม. 0.186 m2 ส่วนเลข 544307H 9-FF [บริษัทซาร์โทเรียส]) และเข้มข้นไปยังไดรฟ์ข้อมูลการทำงาน 1 L โดย 30 kD กรอง (SiusTM-LS TFF เทป 0.1 m2 เลข PP030L01L, TangenX)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

10 โคลนแสดงสูงที่สุดคือการขยายตัวใน 125 ขวดมิลลิลิตร Erlenmeyer มี 40 มลของสื่อวัฒนธรรม ธนาคารเซลล์โคลนเดียวที่ถูกสร้างขึ้นเมื่อเซลล์มีชีวิตถึง> 90%.
วัสดุที่สร้างขึ้นจากสระว่ายน้ำที่มีเสถียรภาพและวัฒนธรรมโคลนเดียวถูกนำมาใช้ในการศึกษาครั้งนี้มันก็สังเกตเห็นว่าคุณภาพแอนติบอดีจากแต่ละที่แตกต่างหลังจากการจับกุมผ่านโปรตีนโครมาโต วัสดุสำรองที่ได้รับการแถในระหว่างขั้นตอนการคัดเลือกต่อมาก็พบว่ามีเนื้อหาโดยรวมสูงกว่าโคลนเซลล์เดียวที่ผลิตปลายน้ำให้สองประชากรของแอนติบอดีเดียวกัน; หนึ่งที่รวบรวมได้มากและน้อยที่รวบรวม การประมวลผลล่องเหมือนกันทั้งวัฒนธรรมและการรวมที่เพิ่มขึ้นไม่ได้เนื่องจากจะต้องมีขั้นตอนการขึ้น.
วัฒนธรรมเซลล์และการเก็บเกี่ยวเซลล์
เซลล์เพาะเลี้ยงได้ดำเนินการในคลื่นเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพ 20 ลิตร (GE Healthcare Life Sciences) มีปริมาณการทำงาน 10 ลิตร ตามการขยายตัวในขวดวัฒนธรรมวัฒนธรรมเมล็ด CHO 2 L ถูกย้ายเป็น 8 L ของสื่ออบอุ่นปริมาณสุดท้ายของ 10 ลิตร ณ จุดนี้ชีวิตของเซลล์เป็น 100% และมีความหนาแน่นของเซลล์ที่ทำงาน (VCD) 1.0 3 106 เซลล์ / มิลลิลิตร เงื่อนไขวัฒนธรรมได้รับการดูแลดังนี้ 2.5 LMH อากาศ, 3% CO2 ความเร็วโยก 10 หินต่อนาทีและมุมโยก 7 และอุณหภูมิเริ่มต้นของ 37 องศาเซลเซียสเมื่อเซลล์ถึง VCD 3.0 3 106 เซลล์ / มิลลิลิตรที่อุณหภูมิก็ขยับถึง 30 C . จุดนี้เป็นจุดศูนย์วันของวัฒนธรรม 21 วัน ถูกนำตัวอย่างในชีวิตประจำวันเพื่อตรวจสอบความมีชีวิตและ VCD (NOVA BIOflex) หลังจาก 21 วันของเซลล์วัฒนธรรมเก็บเกี่ยวโดยการกรอง (1.2 มม 0.464 m2 กรองหมายเลขชิ้นส่วน 5555303P0-SS ตามด้วย 0.45 / 0.20 มม 0.186 m2 หมายเลขชิ้นส่วน 544307H9-FF [Sartorius]) และเข้มข้นปริมาณการทำงาน 1 ลิตร 30 kD กรอง (SiusTM-LS ฉิบหายเทป 0.1 m2 หมายเลขชิ้นส่วน PP030L01L, TangenX)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แสดง 10 สูงสุดโคลนขยายเป็น 125 มล. เออร์เลนเมเยอร์ขวดที่มี 40 ml สื่อวัฒนธรรม ธนาคารเซลล์โคลนเดียวเกิดขึ้นเมื่อเซลล์ถึง 90 %วัสดุที่สร้างขึ้นจากสระ มีเสถียรภาพ และวัฒนธรรมโคลนเดียวถูกใช้ในการศึกษานี้เป็นพบว่าแอนติบอดีคุณภาพจากแต่ละด้าน หลังจับโปรตีนทางโครมาโตกราฟี รวมวัสดุที่ได้รับการ banked ในกระบวนการเลือกถูกพบในภายหลังได้รวมเนื้อหาที่สูงกว่าการโคลนเซลล์เดียวที่ผลิตต่อเนื่อง ให้สองกลุ่มของแอนติบอดีเดียวกัน ; หนึ่งสูงรวม และไม่รวม . แปรรูปปลายน้ำก็เหมือนกันทั้งวัฒนธรรม และการเพิ่มการรวมไม่ได้ เนื่องจากมีกระบวนการจัดการเพาะเลี้ยงเซลล์และเซลล์เก็บเกี่ยวเซลล์วัฒนธรรม มีการปฏิบัติใน 20 ลิตร ( สังคมศาสตร์สุขภาพชีวิตคลื่น ( GE ) กับ 10 ลิตร ทำเสียง ต่อไปนี้การขยายตัวในขวดเพาะ โชเพาะเมล็ด 2 ผมโอนเข้า 8 ลิตรเตาอบสื่อถึงสุดท้ายปริมาณ 10 L . ณจุดนี้ , เซลล์ 100% และมีความหนาแน่นเซลล์ได้ ( VCD ) สำหรับ 3 106 เซลล์ / มิลลิลิตรสภาวะวัฒนธรรมยังคง 2.5 lmh อากาศดังนี้ CO2 ร้อยละ 3 แร่หินต่อนาทีความเร็ว 10 และ 7 โยกมุมและอุณหภูมิเริ่มต้น 37 C เมื่อเซลล์ถึง VCD ของ 3.0 3 106 เซลล์ / มิลลิลิตรที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส จุดนี้ถูกย้ายไปไว้วันศูนย์ของวันที่ 21 วัฒนธรรม ตัวอย่างถ่ายทุกวัน เพื่อหา VCD และความมีชีวิต ( โนวา bioflex ) หลังจาก 21 วัน เซลล์วัฒนธรรมถูกเก็บเกี่ยวโดยการกรอง ( 1.2 มม. 0.464 m2 ตัวกรองหมายเลข 5555303p0-ss ตาม 0.45/0.20 มม. 0.186 ตารางเมตร หมายเลข 544307h9-ff [ Sartorius ] ) และเข้มข้น 1 ลิตรการทำงานปริมาตร 30 ชนิด Ultrafiltration ( siustm LS tff เทป , 0.1 m2 , หมายเลข pp030l01l tangenx , )