ATP (adenosine triphosphate) was de

ATP (adenosine triphosphate) was determined by the luciferin-luciferase reaction using a Turner 20DE Luminometer and the Sigma Luciferase Kit (Sigma Chemicals). A mid-log phase culture of E. coli grown in M9G media was diluted 1:2 into fresh M9G media pre-warmed to 37 °C . The culture was divided into 25 mL subcultures and placed in a shaking water bath at 200 revolutions per minute and 37 °C. The cultures were allowed to equilibrate, with 500 HL samples removed every 5 min. One culture received 5 ug mLT final concentration CMIT and the other received a equal volume of sterile water. Over time, 500 HL aliquots were removed, added to 100 uL 1.5 M HNO3, vortexed, and allowed to sit on ice for 5 min. The samples were then diluted into 4.4 mL of 0.25 M Tris (hydroxymethyl)-aminomethane-HCI (Tris-HC), pH 7.8, and mixed. A 50 HL sample was placed in the ATP assay tube along with 50 uL of assay mix. The assays were initiated by the injection of 5 uL aliquots of a 1:10 dilution o the luciferase enzyme. Peak luminosity values were recorded, and compared to a standard curve constructed in spiked cell extracts. Control experiments demonstrated that high levels of CMIT did not inhibit the luciferase reaction.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ATP (adenosine triphosphate) ถูกกำหนด โดยปฏิกิริยา luciferin luciferase ใช้เครื่อง Luminometer 20DE เทอร์เนอร์และชุด Luciferase ซิกมา (Sigma สารเคมี) ขั้นตอนการล็อกกลางวัฒนธรรมของ E. coli ที่เติบโตในสื่อ M9G เจือจาง 1:2 ลงในสื่อ M9G สดก่อนอุ่นถึง 37 ° C วัฒนธรรมแบ่งออกเป็น 25 มล. subcultures และวางไว้ในอ่างน้ำสั่นที่ 200 รอบต่อนาทีและ 37 องศาเซลเซียส วัฒนธรรมได้รับอนุญาตการ equilibrate ตัวอย่าง 500 HL ออกทุก 5 นาที วัฒนธรรมหนึ่งรับ 5 ยูจีการ์เม้นท์โจวสุดท้ายเข้มข้น CMIT และอื่น ๆ ที่ได้รับปริมาณเท่ากันของน้ำผ่านการฆ่าเชื้อ ช่วงเวลา 500 HL aliquots ออก เพิ่ม 100 uL 1.5 M HNO3, vortexed และได้รับอนุญาตให้นั่งบนน้ำแข็ง 5 นาที ตัวอย่างถูกเจือจางเป็น 0.25 M ทริส (hydroxymethyl) - aminomethane - ของ HCI (ทริ-HC), pH 7.8, 4.4 มิลลิลิตร แล้วผสม ตัวอย่าง 50 HL ถูกวางลงในหลอดทดสอบ ATP พร้อมกับ 50 uL ของผสมทดสอบ Assays ถูกเริ่มต้น โดยการฉีด 5 uL aliquots 1:10 o เจือจางเอนไซม์ luciferase ค่าความสว่างสูงสุดที่บันทึก และเมื่อเปรียบเทียบกับกราฟมาตรฐานสร้างขึ้นในสารสกัดจากเซลล์ถูกแทง ควบคุมการทดลองแสดงให้เห็นว่า ระดับสูงของ CMIT ไม่ยับยั้งปฏิกิริยา luciferase

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ATP (adenosine triphosphate) ถูกกำหนดโดยปฏิกิริยา luciferin-luciferase โดยใช้เทอร์เนอ 20DE Luminometer และชุดซิก luciferase (Sigma Chemicals) วัฒนธรรมระยะกลางเข้าสู่ระบบของเชื้อ E. coli ปลูกในสื่อ M9G ถูกเจือจาง 1: 2 ลงในสื่อ M9G สดก่อนอุ่นถึง 37 ° C วัฒนธรรมแบ่งออกเป็น 25 มลวัฒนธรรมและวางไว้ในอ่างน้ำเขย่าที่ 200 รอบต่อนาทีและ 37 ° C วัฒนธรรมที่ได้รับอนุญาตให้สมดุลกับ 500 ตัวอย่าง HL ลบออกทุก 5 นาที วัฒนธรรมหนึ่งที่ได้รับ 5 ไมโครกรัม MLT CMIT เข้มข้นสุดท้ายและอื่น ๆ ที่ได้รับในปริมาณที่เท่ากันของน้ำหมัน เมื่อเวลาผ่านไป 500 aliquots HL ถูกถอดออกเพิ่ม 100 uL 1.5 M HNO3 หมุนวนและอนุญาตให้นั่งบนน้ำแข็งเป็นเวลา 5 นาที ตัวอย่างถูกปรับลดลงสู่ 4.4 มล 0.25 M Tris (hydroxymethyl) -aminomethane-HCI (Tris-HC) ค่า pH 7.8 และผสม ตัวอย่าง 50 HL ถูกวางลงในหลอดทดสอบเอทีพีพร้อมกับ 50 uL ของส่วนประสมการทดสอบ ตรวจถูกริเริ่มโดยการฉีด 5 aliquots uL ของ 01:10 เจือจาง o เอนไซม์ luciferase ค่าการกระจายของพีคที่ถูกบันทึกไว้และเมื่อเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐานสร้างขึ้นในสารสกัดจากเซลล์ถูกแทง การทดลองแสดงให้เห็นว่าการควบคุมระดับสูงของ CMIT ไม่ยับยั้งปฏิกิริยา luciferase

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เอทีพี ( อะดีโนซีนไตรฟอสเฟต ) ถูกกำหนดโดยลูซิเฟอรีนลูซิเฟอเรสปฏิกิริยาโดยใช้เทอร์เนอร์ 20de ลูมิโนมิเตอร์และเอนไซม์ลูซิเฟอเรส ( ซิกม่า Sigma ชุดสารเคมี ) mid log phase วัฒนธรรมของ E . coli ที่ปลูกในสื่อ m9g เจือจาง 1 : 2 ใน m9g สดสื่อก่อนอุ่น 37 ° C . วัฒนธรรมแบ่งออกเป็น 25 มล. subcultures และวางไว้ในอ่างน้ำที่เขย่า 200 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิ 37 องศา วัฒนธรรมที่ได้รับอนุญาต ให้สมดุลกันกับ 500 HL ตัวอย่างออกทุก 5 นาที หนึ่งวัฒนธรรมที่ได้รับ 5 ug MLI สุดท้ายความเข้มข้น CMIT และอื่น ๆได้รับปริมาณเท่ากับน้ำหมัน เวลาผ่านไป 500 HL เฉยๆออก เพิ่ม 100 vortexed กรดดินประสิว UL 1.5 เมตร , และอนุญาตให้นั่งบนน้ำแข็ง เป็นเวลา 5 นาที แล้วลดจำนวนลง 4.4 มิลลิลิตรต่อ 0.25 เมตร ( ซี ) โดยการใช้เสียงระดับต่ำ ( บริษัท HC ) , pH 7.8 และผสม 50 HL ตัวอย่างอยู่ในเอทีพีการทดสอบหลอดพร้อมกับ 50 UL ของวิธีผสม หรือถูกริเริ่มโดยการฉีด 5 UL เฉยๆเป็น 1 : 10 ( o เอนไซม์ลูซิเฟอเรสเอนไซม์ ค่าความสว่างสูงสุดถูกบันทึกไว้ และเทียบกับมาตรฐานเส้นโค้งสร้างสารสกัดจากเซลล์ได้ถูกแทง การทดลองควบคุม พบว่า ระดับ CMIT ไม่ได้ยับยั้งเอนไซม์ลูซิเฟอเรสปฏิกิริยา