Reaction buffer action buffer formulations have been published, but a consensus is Several re ng to emerge which is similar to that described by Saiki et al. in 1988 begi contains Tris at a final concentration of 10mM (pH 8.4), 50mM (8). This MgCl2, 0.01% gelatin, 0.01% NP40, and 0.01% Tween 20. The KCI, 1.5 mM be replaced by 0.1% Triton X-100, ic detergents can enzyme. is tergent is essential to obtain maximum processivity of the It possible to vary salt concentrations (e.g. reduce or eliminate KCl), and some sets of primers appear to work better with raised magnesium concentra- tions There also appears to be a stoichiometric interaction between the dNTPs and magnesium. Thus, higher concentrations of the dNTPs bind to magnesium and ence reduce the available magnesium concentration. There fore, if higher concentrations of dNTPs are used it may be necessary to increase the magnesium concentration (see Chapter 14). In our laboratory buffer is made up as required from 100 x stock solutions which are stored at room temperature apart from the dNTPs and BSA (used instead of gelatin), which are stored at -20°C
ได้รับการเผยแพร่สูตรปฏิกิริยาบัฟเฟอร์การบัฟเฟอร์ ได้ฉันทามติเป็นหลายรี ng โผล่ซึ่งเป็นเหมือนกับที่อธิบายไว้โดย Saiki และ al. ในปี 1988 begi ประกอบด้วยตรีที่เข้มข้นสุดท้ายของ 10 มม. (pH 8.4), 50 มม. (8) นี้ MgCl2, 0.01% ตุ๋น 0.01% NP40 และ 0.01% Tween 20 KCI, 1.5 มม.ถูกแทนที่ด้วย 0.1% ไตรตั้น X 100, ic ผงซักฟอกสามารถเอนไซม์ คือ tergent จำเป็นต้องได้รับ processivity สูงสุดที่มันสามารถเปลี่ยนแปลงความเข้มข้นเกลือ (เช่นลด หรือกำจัด KCl), และบางชุดไพรเมอร์แสดง การทำงานให้ดีขึ้นแมกนีเซียม concentra-tions ยังปรากฏ ว่าการโต้ตอบ stoichiometric dNTPs และแมกนีเซียม ดังนั้น ความเข้มข้นสูงของผูก dNTPs แมกนีเซียมและ ence ลดความเข้มข้นของแมกนีเซียมมี มีก่อน ถ้ามีใช้สูงกว่าความเข้มข้นของ dNTPs อาจจำเป็นต้องเพิ่มความเข้มข้นของแมกนีเซียม (ดูบทที่ 14) ในห้องปฏิบัติการของ บัฟเฟอร์ประกอบต้องเป็น 100 x หุ้นโซลูชั่นซึ่งจัดเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องจาก dNTPs และบีเอสเอ (ใช้แทนตุ๋น), ซึ่งถูกเก็บไว้ที่-20 ° C
การแปล กรุณารอสักครู่..
