Disaccharidase extraction and assay

Disaccharidase extraction and assays

A segment of the small intestine was removed, washed in 0.9% NaCl solution, dried on filter paper, weighed, trimmed and homogenized (300 rpm) with 0.9% NaCl (400 mg of duodenum per mL) for 1 min at 4 ºC. The resulting homogenate was centrifuged at 8000 x g for 8 min and supernatant was collected. The supernatant was used for the measurement of in vitro maltase, sucrase and lactase activities and for total protein determination. Maltase (EC 3.2.1.20), lactase (EC 3.2.1.23) and sucrase (EC 3.2.1.48) activities were determined using a glucose diagnosis kit based on the glucose oxidase reagent. For determination of disaccharidase activity 50 µL of supernatant were pre-incubated at 37 °C for 5 min, in the absence (control) or in the presence of the CE, BF or ARF of M. x paradisiaca (treated groups). The concentrations used were 500, 1000 and 1500 µg/mL. The duodenum supernatant were then incubated at 37 °C for 5 min with 25 µL of the substrate corresponding to 0.056 µM of maltose, sucrose or lactose (Pereira et al., 2011). One enzyme unit (U) was defined as the amount of enzyme that catalyzed the release of 1 µM of glucose per min under the assay conditions. The specific activity was defined as enzyme activity (U) per mg of protein. Protein concentration was determined by the method described by Lowry et al. (1951) method using bovine serum albumin (BSA) as the standard. The assays were performed in duplicate and conducted along with appropriate controls.

Data and statistical analysis

Data were expressed as mean±SEM. One-way analysis of variance (ANOVA) followed by the Bonferroni post-hoc test or unpaired Student's t-test to identify significant differences between groups using the GraphPad Prism Software (3.0 version). Differences were considered to be significant at p

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Disaccharidase สกัดและ assaysส่วนของลำไส้เล็กถูกลบ ล้างใน 0.9% NaCl โซลูชัน แห้งบนกระดาษกรอง ชั่งน้ำหนัก ตัด และ homogenized เป็นกลุ่ม (300 rpm) ด้วย 0.9% NaCl (ของ duodenum ต่อ mL 400 มิลลิกรัม) ใน 1 นาทีที่ 4 ºC Homogenate ได้ถูก centrifuged ที่ 8000 x g สำหรับ 8 นาที และ supernatant รวบรวม Supernatant ถูกใช้ สำหรับการประเมินในกิจกรรม maltase, sucrase และ lactase และโปรตีนรวมกำหนด Maltase (EC 3.2.1.20), lactase (EC 3.2.1.23) กิจกรรม sucrase (EC 3.2.1.48) ถูกกำหนด และใช้ชุดวินิจฉัยกลูโคสตามรีเอเจนต์ oxidase กลูโคส สำหรับการกำหนด disaccharidase กิจกรรม 50 µL ของ supernatant ได้ incubated ก่อนที่ 37 ° C สำหรับ 5 นาที การขาดงาน (ควบคุม) หรือในต่อหน้า ของ CE เอฟ หรือ ARF paradisiaca x เมตร (บำบัดกลุ่ม) ความเข้มข้นใช้ได้ 500, 1000 และ 1500 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/mL Duodenum supernatant ได้แล้ว incubated ที่ 37 ° C สำหรับ 5 นาทีกับ 25 µL ของพื้นผิวที่สอดคล้องกับ µM 0.056 maltose ซูโครส หรือแล็กโทส (Pereira et al., 2011) เอนไซม์หนึ่งหน่วย (U) ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่ catalyzed รุ่น 1 µM ของกลูโคสต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรมถูกกำหนดเป็นเอนไซม์ (U) ต่อมิลลิกรัมโปรตีน ความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกกำหนด โดยวิธีการอธิบายไว้ โดย Lowry et al. (1951) วิธีใช้วัว serum albumin (บีเอสเอ) เป็นมาตรฐาน Assays ถูกทำสำเนา และดำเนินการ ด้วยตัวควบคุมที่เหมาะสมข้อมูลและการวิเคราะห์ทางสถิติข้อมูลถูกแสดงเป็น mean±SEM ทางเดียวการวิเคราะห์ความต่าง (การวิเคราะห์ความแปรปรวน) ตาม ด้วยการทดสอบแบบเฉพาะกิจลง Bonferroni หรือ unpaired ทดสอบ t ของนักเรียนเพื่อระบุความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มโดยใช้ซอฟต์แวร์ GraphPad ปริซึม (เวอร์ชัน 3.0) ความแตกต่างได้ถืออย่างมีนัยสำคัญที่ p เป็น < 0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สกัดย่อยน้ำตาลโมเลกุลคู่และการวิเคราะห์ในส่วนของลำไส้เล็กถูกลบออกล้างใน 0.9% วิธีการแก้ปัญหาโซเดียมคลอไรด์แห้งบนกระดาษกรองชั่งน้ำหนักตัดและปั่น (300 รอบต่อนาที) ด้วย 0.9% โซเดียมคลอไรด์ (400 mg ของลำไส้เล็กส่วนต้นต่อมิลลิลิตร) เป็นเวลา 1 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส homogenate ส่งผลให้ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 8000 XG 8 นาทีและใสถูกเก็บรวบรวม สารละลายที่ใช้สำหรับการวัดในหลอดทดลอง maltase กิจกรรม sucrase และแลคเตสและสำหรับการกำหนดโปรตีนรวม Maltase (EC 3.2.1.20), แลคเตส (EC 3.2.1.23) และ sucrase (EC 3.2.1.48) กิจกรรมได้รับการพิจารณาโดยใช้ชุดการวินิจฉัยกลูโคสขึ้นอยู่กับสาร oxidase กลูโคส สำหรับการกำหนดกิจกรรมย่อยน้ำตาลโมเลกุลคู่ 50 ไมโครลิตรของสารละลายที่ได้รับก่อนการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีในกรณีที่ไม่มี (ควบคุม) หรือในการปรากฏตัวของ CE, BF หรือสุนัขของเอ็ม x paradisiaca (กลุ่มได้รับการรักษา) ความเข้มข้นที่ใช้คือ 500, 1,000 และ 1,500 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร สารละลายต้นแล้วถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีกับ 25 ไมโครลิตรของสารตั้งต้นที่สอดคล้องกับ 0.056 ไมครอนของมอลโตสซูโครสหรือแลคโตส (รา et al., 2011) หนึ่งหน่วยเอนไซม์ (U) ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เร่งการเปิดตัวของ 1 ไมครอนของกลูโคสต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงถูกกำหนดเป็นกิจกรรมของเอนไซม์ (U) ต่อมิลลิกรัมโปรตีน ความเข้มข้นของโปรตีนถูกกำหนดโดยวิธีการที่อธิบายโดยโลว์รีย์, et al (1951) วิธีการใช้เซรั่มอัลบูมิวัว (BSA) เป็นมาตรฐาน ตรวจได้ดำเนินการในที่ซ้ำกันและดำเนินการพร้อมกับการควบคุมที่เหมาะสม. ข้อมูลและการวิเคราะห์ทางสถิติข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SEM การวิเคราะห์ทางเดียวความแปรปรวน (ANOVA) ตามด้วยการทดสอบ post-hoc Bonferroni หรือ unpaired t-test ของนักเรียนในการระบุความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มโดยใช้ปริซึม GraphPad ซอฟต์แวร์ (รุ่น 3.0) ได้รับการพิจารณาความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญที่ p <0.05