viability, respectively (Fig.1A). After 4-month storage at 20 C, the
reduction in spore viability was 1.2 and 1.7 log CFU/ml R20291 for
M120, respectively (Fig. 1B). These results indicate that C. difficile
spores, albeit being inactivated to some extent by 4-month storage
at 80 C and 20 C, can persist at freezing storage temperatures
in agreement with earlier observations by Freeman and Wilcox
(2003) on C. difficile spores in fecal samples, and reports on the
survival to low temperatures of C. welchii, C. perfringens, and
B. cereus spores (Barnes et al., 1963; Cronin and Wilkinson, 2008; Li
and McClane, 2006).
The effect of multiple freeze-thaw cycles on the in vitro viability
of C. difficile spores was also evaluated in this study. C. difficile
R20291 and M120 spores were frozen at 20 C and thawed at
room temperature (23 C) ten times. A significant 0.9 log CFU/ml
spore viability reduction from 7.2 to 6.3 log CFU/mL (p < 0.01) was
observed for M120 spores, while a non-significant reduction from
4.6 to 4.3 log CFU/mL (p ¼ 0.07) was observed for R20291 spores
(Fig. 2). These results indicate that despite the fact that multiple
freeze-thawcycles might inactivate some spores, many are likely to
survive and persist in C. difficile contaminated meats.
Next, the survival ability of C. difficile spores stored at refrigeration
and room temperature was studied. After 4-month storage at4 C, the observed decrease in M120 spores viability from 7.8 to
6.2 log CFU/mL was significant (p < 0.05), whereas the reduction in
R20291 spores viability from 4.6 to 4.7 log CFU/mL was not
(Fig. 3A). A significant decrease in spore viability of M120 spores
from 7.8e6.9 log CFU/mL was observed after 4-month storage at
23 C (Fig. 3B). However, there was a striking increase in the ability
of R20291 spores to form colonies with an overall increase of
1.8 log CFU/ml from 4.6 to 6.4 log CFU/mL (Fig. 3B). Indeed, after 4-
month storage at 23 C, nearly 1% of R20291 spores were able to
form colonies as compared to ~0.03% when the spores were from
the freshly prepared suspension (i.e., time zero, Fig. 3B). After 6-
month storage at 4 C, C. perfringens spores showed a significant
viability difference between chromosomal cpe and plasmid cpe
isolates, the former showing a 0.3-log reduction while the latter
showed a larger 1.3-log reduction (Li and McClane, 2006). Freeman
and Wilcox (2003) found minor changes in the number of total
viable counts of a multiple strains mixture of C. difficile spores
stored at 4 and 20 C for up to 56 days while this study provides
evidence that C. difficile strains have significant resistance differences
to low temperature storage. Under refrigeration, strain
R20291 spores showed a higher survival rate than strain M120.
During prolonged room temperature storage, R20291 spores
appear to be in a superdormant stage and undergo some unidentified
maturation process, allowing them to germinate in the
presence of taurocholate and nutrients. Maturation of bacterial
spores has been well described for spores of Bacillus subtilis species
(Sanchez-Salas et al., 2011), but has not been reported for C. difficile.
Another tentative explanation is that R20291 spores may gradually
lose their exosporium structure, which has recently been suggested
to have a role in C. difficile spore germination efficiency (Escobar-
Cortes et al., 2013). These findings are notable because they suggest
that C. difficile spores are not only able to survive at room and
freezing temperatures, but also that spores of some C. difficile
strains are able to recover from superdormancy and become viable
after long periods of storage at room temperature. Further work is
clearly needed to understand the molecular mechanisms underlying
C. difficile spore resistance and ability to form superdormant
spores.
A meat model system previously used to study C. perfringens
spore survival (Akhtar et al., 2008, 2009) was used to validate
in vitro results obtained in this study. Meat was contaminated with
C. difficile spores of strains M120 and R20291 and stored at 20 C
for up to 2 months. A significant viability decrease of 0.4 log CFU/ml
(p < 0.05) from 6.7 to 6.3 log CFU/ml was observed for M120 spores
after 2 months (Fig. 1B). Strikingly, a non-significant viability
decrease (p ¼ 0.12) from the initial 3.4 log CFU/mL count was
observed for R20291 spores (Fig. 1B). These results indicate that the
ชีวิต ตามลำดับ (Fig.1A) หลังจากเก็บ 4 เดือนที่ 20 C การลดนี้สปอร์ 1.2 และ 1.7 บันทึก R20291 CFU/mlM120 ตามลำดับ (Fig. 1B) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า C. difficileเพาะเฟิร์น แม้ว่าการยกเลิกบ้าง โดยการเก็บ 4 เดือนที่ 80 C และ 20 C สามารถคงอยู่ที่อุณหภูมิเก็บเย็นช่ำยังคงสังเกตก่อนหน้าโดยฟรีแมนและวิลค็อกซ์(2003) ใน C. difficile เพาะเฟิร์นในตัวอย่าง fecal และรายงานเกี่ยวกับการการอยู่รอดต่ำอุณหภูมิของ C. welchii, C. perfringens และเกิด cereus เพาะเฟิร์น (Barnes et al., 1963 ครอเนินและ Wilkinson, 2008 Liก McClane, 2006)ผลของการแช่แข็ง-thaw หลายรอบในชีวิตการเพาะเลี้ยงของ C. difficile เพาะเฟิร์นถูกยังประเมินในการศึกษานี้ C. difficileแช่แข็งที่ 20 C และ thawed ที่เพาะเฟิร์น R20291 และ M120ห้องอุณหภูมิ (23 C) สิบครั้ง 0.9 สำคัญระบบ CFU/mlมีสปอร์นี้ลดจาก 7.2 6.3 ล็อก CFU/mL (p < 0.01)สังเกตสำหรับเพาะเฟิร์น M120 ในขณะที่ลดไม่ใช่สำคัญจาก4.6 การ 4.3 ล็อก CFU/mL (p ¼ 0.07) ถูกตรวจสอบสำหรับเพาะเฟิร์น R20291(Fig. 2) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า แม้หลายที่thawcycles หยุดอาจยกเพาะเฟิร์นบาง จำนวนมากมีแนวโน้มที่จะอยู่รอด และยังคงมีอยู่ในเนื้อสัตว์ C. difficile ปนเปื้อนถัดไป ความอยู่รอดของ C. difficile เพาะเฟิร์นที่เก็บไว้ในเครื่องทำความเย็นและอุณหภูมิห้องที่เรียน หลังจาก 4 เดือนเก็บเพาะเฟิร์นลดลงสังเกต M120 at4 C ชีวิตจาก 7.8 การ6.2 บันทึก CFU/mL ได้อย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.05) , ในขณะที่ลดลงเพาะเฟิร์น R20291 ชีวิตจาก 4.6 4.7 ล็อก CFU/mL ไม่(Fig. 3A) ลดลงอย่างมีนัยสำคัญในชีวิตสปอร์ของเพาะเฟิร์น M120จากล็อก 7.8e6.9 CFU/mL ที่สังเกตหลังจากเก็บ 4 เดือนที่23 C (Fig. 3B) อย่างไรก็ตาม มีการเพิ่มขึ้นโดดเด่นในความสามารถในของ R20291 เพาะเฟิร์นกับอาณานิคมแบบฟอร์มกับการเพิ่มขึ้นโดยรวมของ1.8 ล็อก CFU/ml จาก 4.6 6.4 ล็อก CFU/mL (Fig. 3B) แน่นอน หลังจาก 4-เก็บในเดือนที่ 23 C เกือบ 1% ของเพาะเฟิร์น R20291 ถูกต้องแบบฟอร์มอาณานิคมเมื่อเทียบกับ ~0.03% เมื่อเพาะเฟิร์นได้จากการระงับลิ้ม (เช่น เวลาศูนย์ Fig. 3B) หลังจาก 6-เก็บเดือนที่ 4 C, C. perfringens เพาะเฟิร์นแสดงให้เห็นความสำคัญชีวิตความแตกต่างระหว่าง cpe ของโครโมโซมและ plasmid cpeล อดีตที่แสดงการลดลง 0.3-ล็อกในขณะที่หลังพบว่าลดลง 1.3 ล็อกใหญ่ (หลี่และ McClane, 2006) ฟรีแมนและวิลค็อกซ์ (2003) พบการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยในจำนวนรวมนับได้ผสมระหว่างสายพันธุ์หลายเพาะเฟิร์น C. difficileเก็บที่ 4 และ 20 C ถึง 56 วันในขณะนี้การศึกษาหลักฐานว่า C. difficile สายพันธุ์มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญความต้านทานจัดเก็บในอุณหภูมิต่ำ ภายใต้เครื่องทำความเย็น สายพันธุ์เพาะเฟิร์น R20291 แสดงให้เห็นว่าอัตราการอยู่รอดสูงกว่าสายพันธุ์ M120ระหว่างการเก็บรักษาที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลานาน เพาะเฟิร์น R20291จะ อยู่ในระยะ superdormant และรับบางอย่างไม่สามารถระบุได้กระบวนการแก่ การอนุญาตให้ germinate ในการสถานะของ taurocholate และสารอาหาร พ่อแม่ของแบคทีเรียเพาะเฟิร์นได้รับการอธิบายอย่างดีสำหรับเพาะเฟิร์นพันธุ์ subtilis คัด(แซนเชซศาลา et al., 2011), แต่ไม่มีการรายงานสำหรับ C. difficileเป็นคำอธิบายที่แน่นอนอีกว่า เพาะเฟิร์น R20291 อาจค่อย ๆการสูญเสียโครงสร้าง exosporium ซึ่งเพิ่งได้รับการแนะนำการมีบทบาทในประสิทธิภาพการงอกสปอร์ของ C. difficile (Escobar-สคอทส์ et al., 2013) ค้นพบเหล่านี้เป็นสำคัญและเนื่องจากพวกเขาแนะนำC. difficile เพาะเฟิร์นไม่เพียงสามารถอยู่รอดในห้อง และแช่แข็งอุณหภูมิ แต่ที่เพาะเฟิร์นของ C. difficile บางสายพันธุ์จะสามารถกู้คืนจาก superdormancy และใช้ได้หลังจากเก็บที่อุณหภูมิห้องระยะยาว งานเพิ่มเติมชัดเจนต้องเข้าใจกลไกระดับโมเลกุลที่ต้นC. difficile สปอร์ความต้านทานและความสามารถในการแบบฟอร์ม superdormantเพาะเฟิร์นระบบจำลองเนื้อก่อนหน้านี้ ใช้ศึกษา C. perfringensใช้สปอร์อยู่รอด (Akhtar et al., 2008, 2009) ในการตรวจสอบผลการเพาะเลี้ยงที่ได้รับในการศึกษานี้ เนื้อสัตว์ปนเปื้อนด้วยC. difficile เพาะเฟิร์นของสายพันธุ์ M120 และ R20291 และการจัดเก็บที่ 20 Cถึง 2 เดือน ชีวิตสำคัญลดลง 0.4 ล็อก CFU/ml(p < 0.05) จาก 6.7 6.3 ล็อก CFU/ml เป็นสังเกตสำหรับเพาะเฟิร์น M120หลังจาก 2 เดือน (Fig. 1B) กว่า ไม่สำคัญชีวิตลดลง (p ¼ 0.12) จากเริ่มต้นล็อก 3.4 CFU/mL ถูกนับสังเกตสำหรับเพาะเฟิร์น R20291 (Fig. 1B) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า การ
การแปล กรุณารอสักครู่..

มีชีวิตตามลำดับ (Fig.1A) หลังจากการจัดเก็บ 4 เดือนที่? 20? C,
การลดลงของความมีชีวิตของสปอร์เป็น 1.2 และ 1.7 log CFU / ml R20291 สำหรับ
M120 ตามลำดับ (รูป. 1B) ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าซี difficile
สปอร์แม้จะถูกยกเลิกไปบ้างโดยการจัดเก็บ 4
เดือนที่? 80? C ถึง 20? C
สามารถยังคงมีอยู่ในการจัดเก็บที่อุณหภูมิแช่แข็งในข้อตกลงกับข้อสังเกตก่อนหน้านี้โดยฟรีแมนและวิลคอกซ์
(2003) ใน C. difficile
สปอร์ในตัวอย่างอุจจาระและรายงานเกี่ยวกับการอยู่รอดที่มีอุณหภูมิต่ำของซีwelchii, perfringens
ซีและบี สปอร์ cereus (บาร์นส์ et al, 1963;. โครนินและวิลกินสัน, 2008; Li
และแม็คเคลน, 2006).
ผลของรอบแช่แข็งละลายหลายที่ในหลอดทดลองมีชีวิตซีสปอร์ difficile ยังได้รับการประเมินในการศึกษาครั้งนี้
C. difficile
R20291 และสปอร์ M120 ถูกแช่แข็งที่? 20? C
และละลายที่อุณหภูมิห้อง(23 องศาเซลเซียส) สิบครั้ง ที่สำคัญ 0.9 log CFU / ml
ลดความมีชีวิตของสปอร์ 7.2-6.3 log CFU / mL (p <0.01)
ถูกตั้งข้อสังเกตสำหรับสปอร์M120 ในขณะที่การลดลงที่ไม่ได้มีนัยสำคัญจาก
4.6 ที่จะ 4.3 log CFU / mL (พี¼ 0.07) พบว่า สำหรับสปอร์ R20291
(รูปที่. 2) ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าแม้จะมีความจริงที่ว่าหลายแช่แข็ง thawcycles อาจยับยั้งบางสปอร์จำนวนมากมีแนวโน้มที่จะอยู่รอดและยังคงมีอยู่ในC. difficile เนื้อสัตว์ที่ปนเปื้อน. ถัดไป, ความสามารถในการอยู่รอดของ C. difficile สปอร์ที่เก็บไว้ที่เครื่องทำความเย็นและอุณหภูมิห้องได้รับการศึกษา หลังจาก AT4 การจัดเก็บ 4 เดือน? C, ลดลงสังเกตใน M120 สปอร์มีชีวิตจาก 7.8 ที่จะ6.2 log CFU / mL อย่างมีนัยสำคัญ (p <0.05) ในขณะที่การลดลงของสปอร์R20291 มีชีวิต 4.6-4.7 log CFU / mL ไม่ได้( รูปที่. 3A) ลดลงอย่างมีนัยสำคัญในการมีชีวิตของสปอร์สปอร์ M120 จาก 7.8e6.9 log CFU / มิลลิลิตรพบว่าหลังการเก็บรักษา 4 เดือนที่23? C (รูป. 3B) แต่มีการเพิ่มขึ้นโดดเด่นในความสามารถของสปอร์ R20291 ในรูปแบบอาณานิคมกับการเพิ่มขึ้นโดยรวมของ 1.8 log CFU / ml 4.6-6.4 log CFU / mL (รูป. 3B) อันที่จริงหลังจากที่ 4 การจัดเก็บเดือนที่ 23 องศาเซลเซียสเกือบ 1% ของสปอร์ R20291 ก็สามารถที่จะรูปแบบอาณานิคมเมื่อเทียบกับ0.03% ~ เมื่อสปอร์มาจากการระงับปรุงสดใหม่(เช่นเวลาที่ศูนย์รูป. 3B) หลังจากที่ 6 การจัดเก็บเดือนที่ 4 องศาเซลเซียสซีปอร์ perfringens แสดงให้เห็นว่ามีความสำคัญแตกต่างระหว่างการมีชีวิตCPE โครโมโซมและพลาสมิด CPE แยกอดีตแสดงให้เห็นถึงการลดลง 0.3 เข้าสู่ระบบในขณะที่หลังแสดงให้เห็นว่าการลดลง1.3 ล็อกขนาดใหญ่ (Li และแม็คเคลน, 2006) ฟรีแมนและวิลคอกซ์ (2003) พบว่าการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยในจำนวนของทั้งหมดนับทำงานของส่วนผสมหลายสายพันธุ์ของC. difficile สปอร์ที่เก็บไว้ที่4 และ 20 องศาเซลเซียสได้นานถึง 56 วันในขณะที่การศึกษาครั้งนี้มีหลักฐานที่แสดงว่าสายพันธุ์ซีdifficile มี ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญต้านทานกับการจัดเก็บที่อุณหภูมิต่ำ ภายใต้การทำความเย็นสายพันธุ์สปอร์ R20291 พบว่ามีอัตราการรอดตายสูงกว่าสายพันธุ์ M120. ระหว่างการเก็บรักษาที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลานาน, สปอร์ R20291 ปรากฏอยู่ในขั้นตอน superdormant และได้รับบางส่วนที่ไม่ได้ระบุขั้นตอนการเจริญเติบโตช่วยให้พวกเขาที่จะงอกในการปรากฏตัวของtaurocholate และสารอาหาร การเจริญเติบโตของแบคทีเรียสปอร์ได้รับการอธิบายได้ดีสำหรับสปอร์ของสายพันธุ์ของเชื้อ Bacillus subtilis (Sanchez-Salas et al., 2011) แต่ยังไม่ได้รับรายงานสำหรับ C. difficile. อีกคำอธิบายเบื้องต้นคือสปอร์ R20291 อาจจะค่อยๆสูญเสียโครงสร้างexosporium ของพวกเขาซึ่ง เพิ่งได้รับการแนะนำให้เข้ามามีบทบาทในC. difficile สปอร์ที่มีประสิทธิภาพงอก (Escobar- Cortes et al., 2013) การค้นพบนี้มีความโดดเด่นเพราะพวกเขาแสดงให้เห็นว่าซีสปอร์ difficile ไม่เพียง แต่สามารถอยู่รอดได้ในห้องพักและอุณหภูมิแช่แข็งแต่ยังว่าสปอร์ของซี difficile สายพันธุ์ที่มีความสามารถในการกู้คืนจาก superdormancy และกลายเป็นที่ทำงานได้หลังจากเวลานานในการจัดเก็บที่ห้องพักอุณหภูมิ นอกจากนี้การทำงานจะจำเป็นอย่างชัดเจนที่จะเข้าใจกลไกระดับโมเลกุลพื้นฐานซี ต้านทาน difficile สปอร์และความสามารถที่จะสร้าง superdormant สปอร์. ระบบรูปแบบเนื้อใช้ก่อนหน้านี้ในการศึกษา perfringens ซีสปอร์อยู่รอด(Akhtar et al., 2008, 2009) ถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบผลในหลอดทดลองที่ได้รับในการศึกษาครั้งนี้ เนื้อสัตว์ที่ได้รับการปนเปื้อนด้วยซี สปอร์ difficile สายพันธุ์ M120 และ R20291 และเก็บไว้ที่ 20 องศาเซลเซียสได้นานถึง2 เดือน ลดลงอย่างมีนัยสำคัญของการมีชีวิต 0.4 log CFU / ml (p <0.05) 6.7-6.3 log CFU / ml พบว่าสำหรับสปอร์ M120 หลังจาก 2 เดือน (รูป. 1B) ยอดเยี่ยมที่มีชีวิตที่ไม่ได้มีนัยสำคัญลดลง (P ¼ 0.12) จากเริ่มต้น 3.4 log CFU / มิลลิลิตรนับสังเกตเห็นสปอร์R20291 (รูป. 1B) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า
การแปล กรุณารอสักครู่..
