MATERIALS AND METHODSPlant material

MATERIALS AND METHODS
Plant materials
The capsules or pods of G. speciosum orchid were collected
from plants with self-pollination for 150 days
after pollination (DAP). The capsules were harvested
in March 2012 at Suratthani province. The capsules
were brought to the laboratory for disinfection and
culture.
Seed morphology and viability studies
For seed viability analysis, freshly isolated seeds from
capsules were stained with 1% (v/v) 2, 3, 5-triphenyl
tetrazolium chloride (TTC) in darkness overnight under
shaking condition at 5 rpm for 30 min and kept under
static condition at 30 °C for 24 h. The seeds were
then observed under a stereomicroscope. Percentage
of seed viability was calculated by the number of red
colour staining embryos divided by the total number
of seeds examined and multiplied by 100.
Effects of basal media on seed germination
To determine the effects of basal media on seed germination
and subsequent development to protocorms,
capsules at 150 DAP were used as seed explants. The
capsules were disinfected and cut vertically over a
sterile Petri-dish. The seeds were then removed and
placed on the filter paper. The seeds were surface
sterilized again by dipping into 15% (v/v) sodium
hypochlorite (NaOCl) solution containing 0.5% (v/v)
Tween-20 for 10 min, rinsed three times with sterile
distilled water, and placed on half strength Gamborg’s
B-5 (½ B5) or New Dogashima (ND) or half
strength Murashige and Skoog (½ MS) medium supplemented
with 0.1% activated charcoal (AC) and
kept at 251 °C with a 16/8 h photoperiod. All
experiments were performed in three independent
replicates with 10 culture Petri dishes per replication.
In each Petri dish, one gram of seeds (approximately
815 seeds) was used. The germination percentage of
seeds at 30 days was calculated by the number of germinated
seeds or protocorms divided by the number
of seeds cultured and multiplied by 100. The seedderived
protocorms were used in these experiments
related to PLB induction and proliferation.
PLB induction, proliferation, and plantlet
regeneration
For PLB induction, seed-derived protocorms at
3 months of culture (approximately 5 mm in length)
from previous step were transferred to ½ MS medium
supplemented with 1 mg/l of 6-benzylaminopurine
(BA) alone or in combination with 0.5 mg/l of -
naphthalene acetic acid (NAA), with or without 0.2%
AC, 15% coconut water (CW) and 0.7% agar. Ten
explants were put in each culture bottle and six culture
bottles were used for each treatment. The percentage
of PLB formation and the number of PLBs per explant
were recorded after 8 weeks of culture. The proliferation
rate was also calculated after 10 weeks of culture.
For plantlets developed from PLBs, the cluster of
PLBs (3–5 PLBs) were cultured on ½ MS medium
without any plant growth regulators or supplemented
with 1 mg/l BA in combination with 0.5 mg/l NAA,
15% CW, 0.2% AC, and 0.7% agar. The number of
shoots was recorded after 3 months of culture.
All cultures were maintained at 252 °C under a
16 h photoperiod with light at an intensity of 10 μmol
m

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการวัสดุโรงงานแคปซูลหรือฝักของกล้วยไม้ G. speciosum ถูกเก็บรวบรวมจากพืชกับ self-pollination 150 วันหลังจากผสมเกสร (DAP) แคปซูลถูกเก็บเกี่ยวในเดือน 2555 มีนาคมที่จังหวัดสุราษฎร์ธานี แคปซูลถูกนำไปห้องปฏิบัติการสำหรับการฆ่าเชื้อ และวัฒนธรรมศึกษาสัณฐานวิทยาและชีวิตของเมล็ดพันธุ์เมล็ดพันธุ์ชีวิตวิเคราะห์ สดแยกเมล็ดจากแคปซูลถูกย้อม ด้วย 1% (v/v) 2, 3, 5-triphenyltetrazolium คลอไรด์ (TTC) ในความมืดค้างคืนภายใต้สั่นเงื่อนไขที่ 5 rpm 30 นาที และเก็บไว้ภายใต้สภาวะคงที่ 30 ° C ใน 24 ชม เมล็ดได้แล้ว ปฏิบัติภายใต้วิธีการ เปอร์เซ็นต์ของเมล็ดพันธุ์ ชีวิตถูกคำนวณ โดยจำนวนของสีแดงสีย้อมสีตัวอ่อนที่แบ่งตามจำนวนของเมล็ดการตรวจสอบ และคูณ ด้วย 100ผลกระทบของสื่อพื้นฐานในการงอกของเมล็ดการตรวจสอบผลกระทบของสื่อพื้นฐานในการงอกของเมล็ดและพัฒนาต่อมาเพื่อ protocormsแคปซูลที่ 150 DAP ถูกใช้เป็นเมล็ดพันธุ์เฌล การแคปซูลถูกฆ่าเชื้อ และตัดในแนวตั้งมากกว่าการจานเพาะเชื้อเป็นหมัน เมล็ดออกแล้ว และวางบนกระดาษกรอง เมล็ดมีผิวฆ่าเชื้ออีกครั้ง ด้วยการจุ่มลงในโซเดียม 15% (v/v)โซลูชั่นไฮโปคลอไรต์ (NaOCl) ที่ประกอบด้วย 0.5% (v/v)แต่ 20 10 นาที ล้าง 3 ครั้งด้วยผ่านการฆ่าเชื้อน้ำกลั่น และวางบนครึ่งแรง Gamborg ของB-5 (½ B5) หรือโดกาชิมะใหม่ (ND) หรือครึ่งหนึ่งความแรงของ Murashige และ Skoog (½ MS) สื่อเสริมด้วยถ่าน 0.1% (AC) และเก็บที่ 25 1 ° C ด้วยช่วงแสง 16/8 ชม ทั้งหมดการทดลองดำเนินการในสามอิสระเหมือนกับอาหารเพาะวัฒนธรรม 10 ต่อการจำลองแบบในแต่ละจาน หนึ่งกรัมของเมล็ด (ประมาณเมล็ด 815) ใช้ เปอร์เซ็นต์การงอกของเมล็ดใน 30 วันถูกคำนวณ โดยจำนวนงอกเมล็ดหรือ protocorms หาร ด้วยจำนวนของเมล็ดล้าง และคูณ ด้วย 100 Seedderived การprotocorms ถูกนำมาใช้ในการทดลองนี้ที่เกี่ยวข้องกับ PLB เหนี่ยวนำและการแพร่กระจายเหนี่ยวนำ PLB การแพร่กระจาย และ plantletฟื้นฟูสำหรับ PLB เหนี่ยวนำ protocorms มาเมล็ดที่3 เดือนของวัฒนธรรม (ความยาวประมาณ 5 มม.)จากขั้นตอนก่อนหน้านี้ได้ถูกโอนย้ายไปกลาง½ MSเสริม ด้วย 1 mg/l ของ 6-benzylaminopurine(BA) คนเดียว หรือร่วมกับ 0.5 mg/l -แนฟทาลีนกรดอะซิติก (ราดหน้า), มี หรือไม่ มี 0.2%AC น้ำมะพร้าว 15% (CW) และ 0.7% วุ้น สิบเฌลถูกวางในขวดแต่ละวัฒนธรรมและหกวัฒนธรรมขวดที่ใช้สำหรับการรักษาแต่ละ เปอร์เซ็นต์PLB ก่อตัวและจำนวน PLBs ต่อ explantมีบันทึกหลังจาก 8 สัปดาห์ของวัฒนธรรม การแพร่กระจายนอกจากนี้ยังคำนวณราคาหลังจากสัปดาห์ที่ 10 ของวัฒนธรรมสำหรับ plantlets พัฒนาจาก PLBs คลัสเตอร์ของPLBs (3-5 PLBs) ถูกล้างบนสื่อกลาง½ MSไม่ชวนคุย หรือเสริมกับ 1 mg/l BA ร่วมกับราดหน้า 0.5 mg/l15% CW, 0.2% AC และ 0.7% วุ้น จำนวนมีบันทึกถ่ายภาพหลังจาก 3 เดือนของวัฒนธรรมวัฒนธรรมทั้งหมดถูกเก็บรักษาไว้ที่ 25 2 ° C ภายใต้ความ16 ชม.ช่วงแสง ด้วยแสงที่มีความเข้มของ 10 ไมโครโมลm