Screening of lipase producing isola

Screening of lipase producing isolate on plate
agar
Lipase activity was tested on SGC agar
medium containing 2 % of Tween 80 and
supplemented with 1, 2, 3 and 4 M NaCl, while
the control culture lacked NaCl. The bacterial
isolates were spotted onto test agar and then
incubated at 37°C for 10 days. A positive reaction
for the lipase test was indicated by the opaque zone
around the colony. The width of opaque zone was
considered to be directly related to the amount of
extracellular lipase produced. The ratio of enzyme
production and growth were defined as A/B, where
A was the diameter of opaque zone (mm) and B
was the diameter of the colony size (mm). One
isolate having the highest lipase activity was
selected and subjected to the following
experiments.
3. Identification of bacterial strain
The morphological and physiological
characteristics of the selected isolate were
performed according to the standard method
(Cowan, 1974; Krieg and Holt, 1984; Washington,
1985; Baron and Finegold, 1990; Delost, 1997).
Determination of 16S rRNA sequence was
performed by direct sequencing of enzymatically
amplified DNA with specific oligonucleotide
primer (Arahal et al., 1996). The 16S rRNA
sequence of the selected isolate was analysed by
using an automatic DNA sequence and compared
to 16S rRNA sequence with other bacteria from
GenBank of National Center for Biotechnology
Information (NCBI).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การคัดกรองของเอนไซม์ไลเปสที่ผลิตโปรตีนบนแผ่นวุ้นทดสอบกิจกรรมเอนไซม์ไลเปสในวุ้น SGCขนาดกลางที่ประกอบด้วย 2% ของโลก 80 และในขณะที่เสริม ด้วย 1, 2, 3 และ 4 M NaClวัฒนธรรมควบคุมขาด NaCl แบคทีเรียแยกถูกส่องลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อทดสอบแล้วรับการกกที่ 37° C เป็นเวลา 10 วัน ปฏิกิริยาเชิงบวกสำหรับเอนไซม์ไลเปสทดสอบระบุโซนทึบแสงทั่วอาณานิคม คือความกว้างของโซนทึบแสงถือว่าเกี่ยวข้องโดยตรงกับจำนวนผลิตเอนไซม์ไลเปสที่สาร อัตราส่วนของเอนไซม์การผลิตและการเจริญเติบโตถูกกำหนด A / B ที่A คือ เส้นผ่าศูนย์กลางของโซนทึบแสง (มม.) และ Bมีเส้นผ่าศูนย์กลางของโคโลนีขนาด (มม.) หนึ่งมีกิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสสูงสุดถูกแยกเลือก และขึ้นอยู่กับต่อไปนี้การทดลอง3. รหัสของแบคทีเรียสายพันธุ์สัณฐาน และสรีรวิทยาลักษณะของ isolate เลือกได้ดำเนินการตามวิธีการมาตรฐาน(แวนส์ 1974 Krieg และโฮลท์ 1984 วอชิงตันปี 1985 บารอนและ Finegold, 1990 Delost, 1997)มีความมุ่งมั่นของ 16S rRNA ลำดับดำเนินการ โดยตรงการจัดลำดับของ enzymaticallyขยายดีเอ็นเอกับ oligonucleotide เฉพาะสีรองพื้น (Arahal et al. 1996) 16S rRNAลำดับของ isolate เลือกถูกวิเคราะห์โดยโดยใช้การลำดับดีเอ็นเออัตโนมัติ และเปรียบเทียบ16S rRNA ลำดับกับแบคทีเรียจากGenBank ของศูนย์เทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติข้อมูล (NCBI)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจคัดกรองของเอนไซม์ไลเปสผลิตแยกบนแผ่น
วุ้น
กิจกรรมเอนไซม์ไลเปสได้รับการทดสอบ SGC วุ้น
ขนาดกลางที่มี 2% ของ Tween 80 และ
เสริมด้วย 1, 2, 3 และ 4 M NaCl ขณะที่
วัฒนธรรมการควบคุมขาดโซเดียมคลอไรด์ แบคทีเรีย
สายพันธุ์เป็นด่างลงบนวุ้นทดสอบแล้ว
บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 วัน ปฏิกิริยาบวก
สำหรับการทดสอบเอนไซม์ไลเปสที่ถูกระบุโดยโซนสีขาวขุ่น
รอบอาณานิคม ความกว้างของโซนทึบแสงได้รับการ
พิจารณาที่จะเกี่ยวข้องโดยตรงกับปริมาณของ
เอนไซม์ไลเปสที่ผลิต อัตราส่วนของเอนไซม์
การผลิตและการเจริญเติบโตที่ถูกกำหนดให้เป็น A / B ที่
เป็นเส้นผ่านศูนย์กลางของโซนทึบแสง (mm) และ B
เป็นเส้นผ่าศูนย์กลางขนาดอาณานิคม (mm) หนึ่ง
แยกมีกิจกรรมเอนไซม์ไลเปสสูงสุดคือ
เลือกและภายใต้การดังต่อไปนี้
การทดลอง.
3 บัตรประจำตัวของแบคทีเรียสายพันธุ์
ทางสัณฐานวิทยาและสรีรวิทยา
ลักษณะของการแยกที่เลือกถูก
ดำเนินการตามวิธีการมาตรฐาน
(แวนส์ 1974; Krieg และโฮลท์ 1984; วอชิงตัน
1985; บารอนและ Finegold, 1990; Delost, 1997).
การกำหนด 16S rRNA ลำดับที่ได้รับการ
ดำเนินการโดยลำดับโดยตรงของเอนไซม์
ดีเอ็นเอขยายกับ oligonucleotide เฉพาะ
ไพรเมอร์ (Arahal et al., 1996) 16S rRNA
ลำดับของการแยกที่เลือกได้รับการวิเคราะห์โดย
ใช้ลำดับดีเอ็นเอโดยอัตโนมัติและเมื่อเทียบ
ลำดับ 16S rRNA แบคทีเรียอื่น ๆ จาก
GenBank ของศูนย์แห่งชาติสำหรับเทคโนโลยีชีวภาพ
สารสนเทศ (NCBI)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกเอนไซม์ที่ผลิตบนจานวุ้นกิจกรรมของเอนไซม์ถูกทดสอบในศูนย์บัญชาการ วุ้นอาหารที่ประกอบด้วย 2 % ของ Tween 80 และเสริมด้วย 1 , 2 , 3 และ 4 M NaCl , ในขณะที่วัฒนธรรมควบคุมขาดเกลือ จากแบคทีเรียไอโซเลตเป็นด่างลงในวุ้น และทดสอบแล้วบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 10 วัน ปฏิกิริยาเป็นบวกสำหรับเอนไซม์ทดสอบถูกระบุโดยเขตทึบแสงรอบนิคม ความกว้างของเขตทึบแสงถือว่าจะเกี่ยวข้องโดยตรงกับปริมาณของพบว่าเอนไซม์ไลเปสที่ผลิต อัตราส่วนของเอนไซม์การผลิตและการเจริญเติบโต เช่น A / B ที่คือเส้นผ่าศูนย์กลางของเขตทึบแสง ( mm ) และคือเส้นผ่านศูนย์กลางของโคโลนีขนาด ( มิลลิเมตร ) หนึ่งแยกมีกิจกรรมเอนไซม์ไลเปสสูงสุดคือและต้องเลือกต่อไปนี้การทดลอง3 . การจำแนกชนิดของแบคทีเรียสายพันธุ์การศึกษาลักษณะสัณฐานวิทยาและสรีรวิทยาคุณลักษณะของเลือกแยกคือดำเนินการตามวิธีมาตรฐาน( แวนส์ , 1974 ; ครีก และ โฮลท์ , 1984 ; วอชิงตัน1985 ; บารอน และไฟน์โกลด์ , 2533 ; delost , 1997 )การหาลำดับเบส 16S rRNA เป็นแสดงลำดับของ enzymatically โดยตรงแถบดีเอ็นเอด้วย ซึ่งเฉพาะรองพื้น ( arahal et al . , 1996 ) ช่วง 16S rRNAลำดับของการเลือกแยกวิเคราะห์โดยโดยใช้ลำดับดีเอ็นเออัตโนมัติและเปรียบเทียบการใช้ลำดับ rRNA กับแบคทีเรียอื่น ๆจากขนาดของศูนย์เทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติข้อมูล ( ncbi )