Genomic DNA was extracted from the

Genomic DNA was extracted from the hairy roots of line No. 9 and from the roots of a non- transformed plant, to serve as a negative control, using the DNeasy Plant Mini kit (Qiagen, USA). Two 20-mer oligonucleotide primers, 5́gctcttgcagtgctagattt3́ (forward) and 5́gaaggtgcaagctacctctc3́(reverse), were used for PCR amplification of the rolB and rolC genes. In addition, primers 5́atgtcgcaaggcagtaagccca3́ (forward) and 5́ggagtctttcagcatggagcaa3́(reverse), amplifying a fragment of virD2 gene were used for detecting bacterial contamination in hairy roots. The PCR reactions were carried out in a total 25 µl volume and consisted of 100 ng of genomic DNA, 10 µM each primers, 0.2 mM dNTP mix, 1 unit of Taq DNA polymerase and 2 mM MgCl2. PCR condition was as follows: 94 ˚C for 3 min (initial denaturation), 35 cycles of 94 ˚C for 45 s, 56 ˚C for 1 min and 72 ˚C for 1 min and a final extension at 72 ˚C for 7 min. The PCR products were separated by electrophoresing on a 1.2 % agarose gel in TBE buffer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ออกดีเอ็นเอถูกสกัด จากรากขนของบรรทัดเลข 9 และ จากรากไม่ใช่ - พืชแปรรูป เพื่อเป็นการควบคุมเชิงลบ โดยใช้ชุดมินิโรงงาน DNeasy (Qiagen สหรัฐอเมริกา) ใช้สำหรับกระบือของยีน rolB และ rolC สอง 20 แมร์ oligonucleotide ไพรเมอร์ 5́gaaggtgcaagctacctctc3́(reverse) และ 5́gctcttgcagtgctagattt3́ (ข้างหน้า) นอกจากนี้ ไพรเมอร์ 5́atgtcgcaaggcagtaagccca3́ (ข้างหน้า) และ 5́ggagtctttcagcatggagcaa3́(reverse) ขยายส่วนของยีน virD2 ถูกใช้สำหรับตรวจจับการปนเปื้อนเชื้อแบคทีเรียในรากขน ดำเนินการในปริมาตร 25 µl การรวมปฏิกิริยา PCR และประกอบด้วย 100 ฉบับออกดีเอ็นเอ ไพรเมอร์ 10 µM ผสม dNTP 0.2 mM, Taq DNA พอลิเมอเรสและ 2 มม.สภาพ MgCl2. PCR 1 หน่วยได้ดังนี้: 94 ˚ c เป็นเวลา 3 นาที (เริ่มแปรสภาพ) รอบ 35 ของ 94 ˚ 45 s ˚ 56 1 นาทีและ 72 ˚ 1 นาทีและนามสกุลเป็นขั้นสุดท้ายที่˚ c 72 นาที 7 ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกคั่น ด้วย electrophoresing บนเจล 1.2% agarose ในบัฟเฟอร์ TBE

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จีโนมดีเอ็นเอที่สกัดจากรากขนของสายฉบับที่ 9 และจากรากของพืชที่ไม่ใช่เปลี่ยนเพื่อทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมเชิงลบโดยใช้ชุด DNeasy โรงงานขนาดเล็ก (Qiagen, สหรัฐอเมริกา) สอง 20-Mer ไพรเมอร์ oligonucleotide, 5gctcttgcagtgctagattt3 (Forward) และ 5gaaggtgcaagctacctctc3 (ย้อนกลับ) ถูกนำมาใช้สำหรับการขยาย PCR ของ rolB และ rolC ยีน นอกจากนี้ไพรเมอร์ 5atgtcgcaaggcagtaagccca3 (Forward) และ 5ggagtctttcagcatggagcaa3 (ย้อนกลับ) ขยายส่วนของ virD2 ยีนที่ถูกนำมาใช้สำหรับการตรวจสอบการปนเปื้อนของเชื้อแบคทีเรียอยู่ในรากขน ปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการในปริมาณ 25 ไมโครลิตรรวมและประกอบด้วย 100 NG ของดีเอ็นเอ 10 ไมครอนแต่ละไพรเมอร์ผสม dNTP 0.2 มิลลิ, 1 หน่วย Taq DNA Polymerase และ 2 mm MgCl2 สภาพ PCR เป็นดังนี้: 94 C เป็นเวลา 3 นาที (denaturation เริ่มต้น) 35 รอบจาก 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 วินาที, 56 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและส่วนขยายสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 นาที ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกแยกจากกันโดย electrophoresing บน agarose gel ที่ 1.2% ใน TBE บัฟเฟอร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จีโนมดีเอ็นเอจากรากขน และเส้นหมายเลข 9 จากรากของพืชในแปลง เพื่อใช้เป็นชุดควบคุมลบ ใช้ dneasy พืช Mini Kit ( QIAGEN , USA ) สองชนิด ซึ่ง 20 แมร์ , 5 ́ gctcttgcagtgctagattt3 ́ ( ไปข้างหน้า ) และ 5 ́ gaaggtgcaagctacctctc3 ́ ( ย้อนกลับ ) , ถูกใช้เพื่อเพิ่มปริมาณของดีเอ็นเอและยีน rolb rolc . นอกจากนี้ จาก 5 ́ atgtcgcaaggcagtaagccca3 ́ ( ไปข้างหน้า ) และ 5 ́ ggagtctttcagcatggagcaa3 ́ ( ย้อนกลับ ) , ขยายส่วนของยีน vird2 ถูกใช้สำหรับการตรวจหาการปนเปื้อนเชื้อแบคทีเรียในรากขน การตรวจปฏิกิริยาออกมาทั้งหมด 25 µ L ปริมาณและจำนวน 100 นาโนดีเอ็นเอ , 10 µ M แต่ละชนิด ผสม dntp 0.2 มม. 1 หน่วยของดีเอ็นเอพอลิเมอเรสและแท็กชุด 2 มิลลิเมตร โดยเงื่อนไขดังนี้ 94 ˚ C เป็นเวลา 3 นาที ( ( เริ่มต้น ) , 35 รอบ 94 ˚ C 45 , 56 ˚ C เป็นเวลา 1 นาทีและ 72 ˚ C เป็นเวลา 1 นาทีและขยายสุดท้ายที่ 72 ˚องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 นาที ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกแยกจากกันโดย electrophoresing บน 1.2 % เจลในทีบีบัฟเฟอร์