2.3. Serological detection of PMTV

2.3. Serological detection of PMTV in Spongospora subterranea
through TAS-ELISA
TAS-ELISA was done as described previously (Torrance et al.,
1992; Arif et al., 1994). Leaf and root samples (1 g/5 ml) and
tuber tissues (1 g/ml) were extracted in extraction buffer [0.01 M
phosphate buffered saline (PBS) containing 0.05% Tween-20
and 0.1–0.2% skimmed milk powder (EveryDay, Nestlé Pakistan,
Lahore, Pakistan)]. Samples were added to microtitre plates
(NUNC Immunoplate II) pre-coated with polyclonal anti-PMTV
immunoglobulin (IgG) diluted 1:500 and monoclonal anti-PMTV
IgG (1:1000) with coating buffer pH 9.6. For the virus detection in
zoospores, preparation were obtained by air drying scabby potato
peels and incubating 0.1–0.2 g of cystosori in 10 ml of sterile distilled
water (SDW) at 12–15 ◦C for 7–10 days. The germinated
zoospore suspensions were filtered through fine plastic mesh to
remove debris. Between c. 1 × 107 and 6 × 107 zoospores per ml
were present in the suspensions. The zoospores were centrifuged
at 800 g for 5 min, re-suspended in 2 ml extraction buffer, frozen at
−70 ◦C for 20 min, then thawed on ice and used in TAS-ELISA.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. ตรวจหาสภาวะของ PMTV ใน Spongospora subterraneaโดย TAS ELISAทำ TAS ELISA ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (รันซ์ et al.,1992 Arif et al., 1994) ตัวอย่างใบและราก (1 g/5 ml) และหัวกระดาษทิชชู่ (1 g/ml) ถูกสกัดในบัฟเฟอร์สกัด [0.01 Mน้ำเกลือ (PBS) ประกอบด้วย 0.05% buffered ฟอสเฟต Tween-20และ 0.1 – 0.2% เอานมผง (ทุกวัน Nestlé ปากีสถานลาฮอร์ ปากีสถาน)] ตัวอย่างเพิ่มเข้าไป microtitre แผ่น(NUNC Immunoplate II) ก่อนเคลือบ ด้วย polyclonal ต่อต้าน-PMTVimmunoglobulin (IgG) ทำให้เจือจาง 1: 500 และโมโนต่อต้าน-PMTVIgG (1:1000) กับการเคลือบบัฟเฟอร์ pH 9.6 สำหรับการตรวจหาไวรัสในzoospores เตรียมได้รับมา โดยอากาศแห้งมันฝรั่ง scabbypeels และ incubating 0.1 – 0.2 g cystosori ใน 10 ml ของกอซกลั่นน้ำ (SDW) ที่ 12 – 15 ◦C 7 – 10 วัน เปลือกที่งอกบริการ zoospore ถูกกรองผ่านตาข่ายพลาสติกดีไปเอาเศษ ระหว่าง c. 1 × 107 และ 6 × 107 zoospores ต่อมลได้อยู่ในพัก มี centrifuged zoosporesที่ g 800 สำหรับ 5 นาที หยุดชั่วคราวอีกครั้งใน 2 ml สกัดบัฟเฟอร์ หยุด−70 ◦C สำหรับ 20 นาที thawed บนน้ำแข็ง และใช้ใน TAS ELISA แล้ว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การตรวจหาภูมิคุ้มกันของ PMTV ใน Spongospora subterranea
ผ่านมาตรฐานการบัญชีฉบับ-ELISA
มาตรฐานการบัญชีฉบับ-ELISA ได้ทำตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Torrance, et al.
1992;. Arif, et al, 1994) ใบและรากตัวอย่าง (1 กรัม / 5 มล.)
และเนื้อเยื่อพืช(1 g / ml) ถูกสกัดในบัฟเฟอร์สกัด [0.01 M
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (พีบีเอส) ที่มี 0.05% Tween-20
และ 0.1-0.2% ผงนมไขมันต่ำ (ในชีวิตประจำวัน
เนสท์เล่ปากีสถานละฮอร์ปากีสถาน)] ตัวอย่างถูกเพิ่มเข้าไปในแผ่น microtitre
(NUNC Immunoplate II) ก่อนเคลือบด้วยโพลีต่อต้าน PMTV
อิมมูโน (IgG) เจือจาง 1: 500 และโมโนโคลนอลต่อต้าน PMTV
IgG (1: 1000) ที่มีค่า pH 9.6 บัฟเฟอร์เคลือบ สำหรับการตรวจหาไวรัสใน
zoospores
เตรียมได้จากอากาศแห้งมันฝรั่งขี้เรื้อนเปลือกและฟัก0.1-0.2 กรัม cystosori 10
มิลลิลิตรกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อน้ำ(SDW) ในวันที่ 12-15 ◦C 7-10 วัน งอกแขวนลอย zoospore ถูกกรองผ่านตาข่ายพลาสติกปรับให้เอาเศษ ระหว่างค 1 × 107 และ 6 × 107 zoospores ต่อมิลลิลิตรมีอยู่ในสารแขวนลอย zoospores ถูกหมุนเหวี่ยงที่800 กรัมเป็นเวลา 5 นาทีอีกครั้งที่ลอยอยู่ในบัฟเฟอร์สกัด 2 มิลลิลิตรแช่แข็งที่-70 ◦Cเป็นเวลา 20 นาทีจากนั้นก็ละลายน้ำแข็งและใช้ในมาตรฐานการบัญชีฉบับวิธี ELISA

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 ผลการ pmtv ใน spongospora subterranea

tas-elisa ผ่าน tas-elisa ได้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( Torrance et al . ,
1992 ; เรฟ et al . , 1994 ) ใบและรากตัวอย่าง ( 1 กรัม / 5 ml ) และเนื้อเยื่อพืชหัว (
1 g / ml ) ถูกสกัดในการสกัดบัฟเฟอร์ 0.01 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ [

tween-20 ( PBS ) ที่มีเกลือร้อยละ 0.05 และ 0.1 - 0.2 % นมผง ( ทุกวัน เนสท์เล่
Lahore , ปากีสถานปากีสถาน ) ] จำนวนเพิ่ม microtitre แผ่น
( ขณะนี้ immunoplate II ) ก่อนเคลือบด้วยโพลีอิมมูโนโกลบูลิน ป้องกัน pmtv
( IgG และ IgG anti เจือจาง 1 : 500 ) โมโนโคลนอล pmtv
( 000 ) เคลือบด้วยบัฟเฟอร์ pH 9.6 . สำหรับการตรวจหาไวรัสใน
zoospores เตรียมได้จากอากาศแห้งและตกสะเก็ด เพาะเปลือกมันฝรั่ง
0.1 - 0.2 กรัม cystosori 10 มิลลิลิตร กลั่น
เป็นหมันน้ำ ( sdw ) ที่ 12 – 15 ◦ เป็นเวลา 7 - 10 วัน ที่ถูกกรองผ่านงอก
คณะเส้นตาข่ายพลาสติกดี

เอาเศษ ระหว่าง C . 1 × 107 และ 6 × 107 zoospores ต่อมิลลิลิตร
อยู่ช่วงล่าง . ซึ่งเป็นระดับที่ zoospores
800 กรัมนาน 5 นาทีจะระงับ 2 ml ใช้สารแช่แข็งที่
− 70 ◦ C เป็นเวลา 20 นาที แล้วนำมาละลายน้ำแข็ง และใช้ใน tas-elisa .