2. Materials and methods2.1. VirusE

2. Materials and methods
2.1. Virus
EBO subtype Zaire adapted to guinea pigs through
eight passages in outbred animals (further designated as
adEBO) was used [6]. The virus had three passages in
Vero cell culture. Five plaques were isolated and characterized.
The viral replication of each plaque was
determined in Vero cells and their infectivity was tested
in guinea pigs. For infecting monkeys, plaque 4 was
chosen; its initial infectivity was 5.5 lg LD50:ml for
guinea pigs or 4.9 lg PFU:ml in Vero cell culture.
2.2. Animals
Three Papio hamadryas (two females, one male)
weighing 5–7 kg were used. Animals were obtained
from the Sukhumi Monkey Farm, held in quarantine in
animal facility of the SRC VB ‘Vector’, and kept on a
standard diet ration of monkey chow and fresh fruit.
Water was available ad libitum. All animals were previously
tested for the absence of antibodies to EBO and
Marburg virus. All manipulations with monkeys were
conducted in accordance with the relevant federal and
local regulations.
2.3. Experimental design
The monkeys were infected subcutaneously into the
rear middle third of their left thigh at a dose of 100
PFU:animal with the culture medium of the Vero cells
infected with adEBO plaque 4. Clinical observations
and measurements of rectal temperature were performed
daily. All experiments with infected animals
were performed in a BSL-4 facility by personnel wearing
positive pressure protective suits.
Blood was taken from the surface veins of either
upper or lower limbs once prior to infection, and on
daily basis after infection. Prior to infection and blood
collection, all the animals were sedated intramuscularly
with kalipsol (Gedeon-Richter, Hungary) at a dose of 5
mg:kg of animal weight. One animal was killed at the
agonal stage, and liver was removed aseptically. Livers
from other two animals were taken postmortem. Serial
10-fold dilutions of 10% suspension of homogenized
liver tissue were assessed for viral titers by plaque assay
in Vero cell culture [9].
Blood samples for immunological assays were collected
into tubes containing 10 AU:ml heparin or
sodium citrate (9.25 mg:ml); for biochemical tests they
were put into dry tubes to obtain serum; and for
coagulation tests, into silicone tubes containing 3.8%
solution of sodium citrate (with the presence of E-animocapron
acid) at a ratio of 1:9. The blood was
centrifuged for 10 min at 1500 rpm to obtain plasma
and serum.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 ไวรัส
ชนิดย่อย EBO ซาอีร์ปรับให้เข้ากับหนูตะเภาผ่าน
แปดทางเดินในสัตว์ outbred (กำหนดต่อไปในฐานะ
adEBO) ใช้ [6] ไวรัสมีสามทางใน
การเพาะเลี้ยงเซลล์เวโร ห้าโล่ถูกแยกและลักษณะ.
จำลองแบบของไวรัสของแต่ละแผ่นโลหะที่ถูก
กำหนดไว้ในเซลล์เวโรและการติดเชื้อของพวกเขาได้รับการทดสอบ
ในหนูตะเภา สำหรับการติดเชื้อลิงคราบจุลินทรีย์ 4 ถูก
เลือกไว้แล้ว การติดเชื้อเริ่มต้น 5.5 LG LD50: มล. สำหรับ
หนูตะเภาหรือ 4.9 จี PFU. มล. ในการเพาะเลี้ยงเซลล์เวโร
2.2 สัตว์
สาม Papio hamadryas (สองหญิงหนึ่งชาย)
ชั่งน้ำหนัก 5-7 กก. ถูกนำมาใช้ สัตว์ที่ได้รับ
จาก Sukhumi ลิงฟาร์มที่จัดขึ้นในการกักกันใน
สถานที่สัตว์ SRC VB 'เวกเตอร์' และเก็บไว้ใน
การปันส่วนอาหารมาตรฐานของโจวเหวินลิงและผลไม้สด.
น้ำเป็นโฆษณา libitum ใช้ได้ สัตว์ทุกตัวก่อนหน้านี้ได้รับการ
ทดสอบการขาดหายไปของแอนติบอดี้ที่จะ EBO และ
ไวรัสบูร์ก manipulations ทั้งหมดกับลิงได้รับการ
ดำเนินการตามที่เกี่ยวข้องของรัฐบาลกลางและ
ระเบียบข้อบังคับของท้องถิ่น.
2.3 การออกแบบการทดลอง
ลิงมีการติดเชื้อเข้าสู่ใต้ผิวหนัง
ด้านหลังที่สามตรงกลางของต้นขาซ้ายของพวกเขาในขนาด 100
PFU: สัตว์ที่มีขนาดกลางวัฒนธรรมของเวโรเซลล์
ที่ติดเชื้อคราบจุลินทรีย์ adEBO 4. สังเกตทางคลินิก
และการวัดอุณหภูมิทางทวารหนักได้ดำเนินการ
เป็นประจำทุกวัน การทดลองทั้งหมดที่มีสัตว์ที่ติดเชื้อ
ได้ดำเนินการในสถานที่ BSL-4 โดยบุคลากรที่สวมใส่
ชุดป้องกันความดันเป็นบวก.
เลือดถูกนำมาจากหลอดเลือดดำพื้นผิวของทั้ง
แขนขาบนหรือล่างครั้งหนึ่งก่อนที่จะมีการติดเชื้อและใน
ชีวิตประจำวันหลังจากการติดเชื้อ ก่อนที่จะมีการติดเชื้อและเลือด
คอลเลกชันสัตว์ทั้งหมดถูกผ่อนคลายกล้ามเนื้อ
ด้วย kalipsol (เมริเดียนริกเตอร์, ฮังการี) ขนาด 5
มก.: กิโลกรัมของน้ำหนักสัตว์ หนึ่งในสัตว์ที่ถูกฆ่าตายใน
เวที agonal และตับจะถูกลบออกปลอดเชื้อ ตับ
จากที่อื่น ๆ สัตว์ทั้งสองถูกนำชันสูตรศพ อนุกรม
เจือจาง 10 เท่าของการระงับ 10% ของหดหาย
เนื้อเยื่อตับมีการประเมินสำหรับ titers ไวรัสด้วยวิธีมอบโล่ประกาศเกียรติคุณ
ในการเพาะเลี้ยงเซลล์เวโร [9].
ตัวอย่างเลือดสำหรับการตรวจภูมิคุ้มกันถูกเก็บ
ลงในหลอดที่มี 10 AU: เฮมล. หรือ
โซเดียมซิเตรท (9.25 มก. : มล.); สำหรับการทดสอบทางชีวเคมีที่พวกเขา
ถูกใส่ลงไปในหลอดแห้งซีรั่มที่จะได้รับ; และ
การทดสอบการแข็งตัวลงไปในท่อซิลิโคนที่มี 3.8%
การแก้ปัญหาของโซเดียมซิเตรท (กับการปรากฏตัวของ E-animocapron
กรด) ในอัตราส่วน 1: 9 เลือด
ปั่น 10 นาทีที่ 1,500 รอบต่อนาทีจะได้รับพลาสม่า
และซีรั่ม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ไวรัส
ebo ทั้งแซร์ดัดแปลงหนูทดลองผ่าน
8 หัวข้อใน outbred สัตว์ ( ต่อเขต ตามที่
adebo ) คือใช้ [ 6 ] ไวรัสมี 3 หัวข้อในการเพาะเลี้ยงเซลล์ Vero
. 5 โล่ถูกแยกและศึกษาคุณสมบัติ ของแต่ละกลุ่มงานไวรัส

ตั้งใจอยู่ในเซลล์ Vero และการติดเชื้อของพวกเขาถูกทดสอบ
ในหนูทดลอง สำหรับการติดลิงจุลินทรีย์ 4
เลือก ; การติดเชื้อเริ่มต้นของมันคือ 5.5 LG ld50 : ml
หนูทดลองหรือ 4.9 แอลพีเอฟยู : มล. ในเซลล์ Vero .
2.2 . สัตว์
3 hamadryas papio ( สองหญิง หนึ่งชาย )
ชั่ง 5 – 7 กิโลกรัมใช้ สัตว์ที่ได้รับ
จากฟูซูลิลิงฟาร์มที่จัดขึ้นในสถานที่กักกันใน
สัตว์ของ SRC VB ' ฟรี ' , และเก็บไว้ในการปันส่วนอาหารมาตรฐานของอาหารลิง

และผลไม้สดน้ำทั้งโฆษณา พร้อมใช้งาน สัตว์ทั้งหมดก่อนหน้านี้
ทดสอบไม่มีแอนติบอดี ebo และ
Marburg virus manipulations ทั้งหมดกับลิงได้
ดำเนินการตามกฎระเบียบที่เกี่ยวข้องของรัฐบาลกลางและท้องถิ่น
.
2.3 ทดลองออกแบบ
ลิงติดเชื้อ subcutaneously เข้า
3 หลังกลางต้นขาซ้ายของพวกเขาในขนาด 100
พีเอฟยู :สัตว์ที่มีอาหารเพาะเชื้อในเซลล์ Vero
ติดเชื้อ adebo หินปูน 4 . การสังเกตและการวัดอุณหภูมิทางทวารหนัก

ได้ทุกวัน การทดลองกับสัตว์ที่ติดเชื้อจำนวน
ในสถานที่ bsl-4 โดยบุคลากรใส่

เลือดป้องกันแรงดันบวกชุด ถ่ายจากพื้นผิวเส้นทั้ง
บนหรือล่าง แขนขา เมื่อก่อนการติดเชื้อและ
ทุกวันหลังจากการติดเชื้อ ก่อนที่จะติดเชื้อ และเก็บเลือด
, สัตว์ทั้งหมดถูก sedated ไฟ
กับ kalipsol ( กีเดียนริชเตอร์ ฮังการี ) ในขนาด 5 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมของน้ำหนัก
: สัตว์ สัตว์ที่ถูกฆ่าที่
เวที agonal และตับถูก aseptically .
จากตับอีก 2 สัตว์ ถ่ายหลังจากเสียชีวิตแล้ว อนุกรม
10 วิธีการพับ 10% ช่วงล่างของโฮโม
ตับจะถูกประเมินสำหรับไวรัสโดยจุลินทรีย์โดยวิธีเพาะในเซลล์ Vero
[ 9 ] .
ตัวอย่างเลือดสำหรับตรวจภูมิคุ้มกันถูกเก็บลงในหลอดที่บรรจุ 10 AU

: ml heparin หรือโซเดียมซิเตรต ( 13 มก. : มิลลิลิตร ) ; สำหรับการทดสอบทางชีวเคมี พวกเขาถูกใส่ลงในหลอดแห้ง

ขอรับ เซรั่ม และสำหรับ การทดสอบการแข็งตัวของเลือดในหลอดบรรจุ 3.8 %
ซิลิโคนสารละลายโซเดียมซิเตรต ( กับการปรากฏตัวของ e-animocapron
acid ) ในอัตราส่วน 1 : 9 . เลือด
ระดับ 10 นาทีที่ 1500 รอบต่อนาที เพื่อขอรับ
พลาสมาและซีรั่ม