Cryo-Scanning Electron Microscopy (cryo-SEM) samples were cut
nto rectangular blocks less than 10 mm on the longest dimension,
4–5 mmwide and approximately 2 mm thick, snap frozen using liquid
nitrogen and were kept under liquid nitrogen until analysed.
Cryo-SEM was performed using a Polaron PP2000 Cryo Transfer sysem(QuorumTechnologies,
Ringmer, UK) attached to an FEI Quanta 250
Scanning Electron Microscope (FEI, Hillsboro, OR, USA). Frozen tissue
was mounted in sample holders containing a mixture of colloidal graphite
and OCT™ compound (Sakursa Finetek, Zoeterwoude, NL) under an
argon atmosphere and immersed in liquid nitrogen with about half
he sample protruding. Samples were transferred to the sample handling
chamber of the PP2000 in liquid nitrogen then transferred under
vacuumto the PP2000 preparation stage at −150 °C and the protruding
issue fractured using a cooled metal blade or probe. Ice sublimation was
then carried out at −90 °C for between 1 and 7 min to improve surface
ontrast. The temperature was then returned to −150 °C before the
ractured surface was sputter coated with gold/palladium (60 s)
and transferred to the cryo-SEM for observation on a stage cooled to
−150 °C using accelerating voltages of between 5 and 15 kV.
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด ( SEM แช่แข็งแช่แข็ง ) จำนวนตัด
กับสี่เหลี่ยมบล็อกน้อยกว่า 10 มิลลิเมตร ในมิติที่ 4 – 5
mmwide ประมาณ 2 มิลลิเมตร และหนา , snap แช่แข็งโดยใช้ของเหลว
ไนโตรเจนและเก็บภายใต้ไนโตรเจนเหลวจนแช่แข็ง ซึ่งทำการวิเคราะห์
โดยใช้ปฏิยานุพันธ์ pp2000 โอน ( quorumtechnologies ระบบแช่แข็ง
ringmer , UK ) แนบมากับเฟต้า 250
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด ( Fei , Hillsboro , หรือ , USA )
เนื้อเยื่อแช่แข็งติดตั้งในตัวอย่างผู้ที่มีส่วนผสมของกราไฟท์คอลลอยด์และต.ค. ™
( sakursa finetek zoeterwoude , สารประกอบ , nl ) ภายใต้บรรยากาศอาร์กอน
และแช่ในไนโตรเจนเหลว มีตัวอย่างประมาณครึ่งหนึ่ง
เขายื่นออกมา ตัวอย่างที่ถูกโอนไปยังตัวอย่างการจัดการ
ห้องของ pp2000 ในไนโตรเจนเหลวแล้วโอนได้ที่
vacuumto ที่ pp2000 การเตรียมเวทีที่− 150 ° C และยุ้ย
ปัญหาหักโดยใช้ใบมีดโลหะ หรือระบายความร้อนด้วย น้ำแข็งระเหิดเป็น
แล้วดำเนินการที่− 90 ° C ระหว่าง 1 และ 7 นาทีเพื่อปรับปรุง ontrast ผิว
อุณหภูมิ− 150 ° C แล้วกลับไปก่อน
พื้นผิวที่ถูกเคลือบด้วยทอง ractured ละล่ำละลัก / แพลเลเดียม ( 60 )
และโอนไปยังเครื่อง Cryo SEM เพื่อสังเกตการณ์ในเวทีด้วย
150 °− C ใช้เร่งแรงดันไฟฟ้าระหว่าง 5 - 15 kV .
การแปล กรุณารอสักครู่..