In eukaryotic organisms, Elongator

In eukaryotic organisms, Elongator is a six-subunit protein complex required for the formation of 5-carbamoylmethyl (ncm5 ) and 5-methylcarboxymethyl (mcm5 ) side chains on uridines present at the wobble position (U34 ) of tRNA. The open reading frame encoding the largest Elongator subunit Elp1p has two in-frame 5' AUG methionine codons separated by 48 nucleotides. Here, we show that the second AUG acts as the start codon of translation. Furthermore, Elp1p was previously shown to exist in two major forms of which one was generated by proteolysis of full-length Elp1p and this proteolytic cleavage was suggested to regulate Elongator complex activity. In this study, we found that the vacuolar protease Prb1p was responsible for the cleavage of Elp1p. The cleavage occurs between residues 203 (Lys) and 204 (Ala) as shown by amine reactive Tandem Mass Tag followed by LC-MS/MS (liquid chromatography mass spectrometry) analysis. However, using a modified protein extraction procedure, including trichloroacetic acid, only full-length Elp1p was observed, showing that truncation of Elp1p is an artifact occurring during protein extraction. Consequently, our results indicate that N-terminal truncation of Elp1p is not likely to regulate Elongator complex activity

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในสิ่งมีชีวิต eukaryotic, Elongator เป็นการย่อย 6 โปรตีนซับซ้อนจำเป็นสำหรับการก่อตัวของโซ่ข้าง 5-methylcarboxymethyl (mcm5) ในปัจจุบัน uridines ที่กระเด้งตำแหน่ง (U34) ของ tRNA และ 5-carbamoylmethyl (ncm5) เปิดอ่านเฟรมที่เข้ารหัสย่อย Elongator ที่ใหญ่ที่สุด Elp1p มีสองในกรอบ 5' AUG methionine codons คั่น ด้วยนิวคลีโอไทด์ที่ 48 ที่นี่ เราแสดงที่ AUG ที่สองทำหน้าที่เป็นรหัสพันธุกรรมเริ่มต้นแปล นอกจากนี้ Elp1p เคยแสดงมีอยู่สองแบบที่สำคัญแห่งหนึ่งถูกสร้างขึ้น โดย proteolysis Elp1p ปราศจาก และปริ proteolytic นี้แนะนำการควบคุมกิจกรรมที่ซับซ้อน Elongator ในการศึกษานี้ เราพบว่า รติเอส vacuolar Prb1p ชอบความแตกแยกของ Elp1p ความแตกแยกเกิดขึ้นระหว่างตก (Lys) 203 และ 204 (อลา) แสดง โดย amine ปฏิกิริยาตามตัวตามกันไปโดยรวมแท็ก โดย LC MS/MS (chromatography เหลวรเมท) วิเคราะห์ อย่างไรก็ตาม โดยใช้กระบวนการสกัดโปรตีนแก้ไข รวม trichloroacetic กรด เฉพาะปราศจาก Elp1p ถูกสังเกต การแสดงการตัดคำของ Elp1p ที่ได้สิ่งประดิษฐ์เกิดขึ้นในระหว่างการสกัดโปรตีน ดังนั้น ผลของเราระบุว่า ตัดเอ็นเทอร์มินัลของ Elp1p ไม่น่าจะควบคุมกิจกรรมซับซ้อน Elongator

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในสิ่งมีชีวิต eukaryotic, Elongator เป็นโปรตีนที่หก subunit ซับซ้อนที่จำเป็นสำหรับการก่อตัวของ 5 carbamoylmethyl (ncm5) และ 5 methylcarboxymethyl (mcm5) โซ่ด้านบน uridines ปัจจุบันที่ตำแหน่งโยกเยก (U34) ของ tRNA อ่านเปิดกรอบการเข้ารหัสที่ใหญ่ที่สุด Elongator subunit Elp1p ได้สองในกรอบ 5 สิงหาคม codons methionine แยกจากกันโดย 48 นิวคลีโอ ที่นี่เราแสดงให้เห็นว่าสิงหาคมที่สองทำหน้าที่เป็น codon เริ่มต้นของการแปล นอกจากนี้ Elp1p ถูกนำมาแสดงก่อนหน้านี้จะมีชีวิตอยู่ในสองรูปแบบที่สำคัญของการเป็นที่หนึ่งที่ถูกสร้างขึ้นโดย proteolysis ของเต็มความยาวและความแตกแยก Elp1p โปรตีนนี้ได้รับการแนะนำในการควบคุมกิจกรรมที่ซับซ้อน Elongator ในการศึกษานี้พบว่า vacuolar น้ำย่อย Prb1p เป็นผู้รับผิดชอบสำหรับความแตกแยกของ Elp1p ความแตกแยกเกิดขึ้นระหว่างตกค้าง 203 (ลิซ) และ 204 (Ala) ที่แสดงโดยเอปฏิกิริยาแท็ก Tandem มวลตามด้วย LC-MS / MS (ของเหลว chromatography มวลสาร) การวิเคราะห์ อย่างไรก็ตามการใช้ขั้นตอนการสกัดโปรตีนแก้ไขรวมทั้งกรดไตรคลอโรเพียง Elp1p ยาวเต็มรูปแบบพบว่าการแสดงของการตัด Elp1p ที่เป็นสิ่งประดิษฐ์ที่เกิดขึ้นในระหว่างการสกัดโปรตีน ดังนั้นผลของเราแสดงให้เห็นว่าการตัด n- ขั้วของ Elp1p ไม่น่าจะควบคุมการทำงานที่ซับซ้อน Elongator

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ใน eukaryotic สิ่งมีชีวิต elongator เป็น 6 หน่วยย่อยโปรตีนที่ซับซ้อนที่จำเป็นสำหรับการก่อตัวของ 5-carbamoylmethyl ( ncm5 ) และ 5-methylcarboxymethyl ( mcm5 ) โซ่ข้างบน uridines ปัจจุบัน , ตำแหน่ง ( u34 ) ของการเมารถ . เปิดอ่านกรอบใหญ่ elongator ซึ่ง elp1p การเข้ารหัสมี 2 เฟรม 5 ' ส.ค. เมทไธโอนีนซิสโดยแยก 48 ขนาด . ที่นี่เราพบว่า ส.ค. ที่สองทำหน้าที่เป็นรหัสพันธุกรรมเริ่มต้นแปล นอกจากนี้ elp1p ก่อนหน้านี้ที่แสดงอยู่ใน 2 รูปแบบใหญ่ ของที่ถูกสร้างขึ้นโดยโปรติโอไลซีสของ elp1p แบบเต็มตัวและโปรตีนตัวนี้แนะนำเพื่อควบคุมกิจกรรม elongator ซับซ้อน ในการศึกษานี้ พบว่า vacuolar โปร prb1p รับผิดชอบความแตกแยกของ elp1p .ลึกเกิดขึ้นระหว่างตกค้าง 203 ( . ) และ 204 ( เอ๋ ) แสดงโดย amine ปฏิกิริยาควบคู่มวลแท็กตามด้วยอินซูลิน / MS ( Liquid Chromatography Mass Spectrometry ) การวิเคราะห์ อย่างไรก็ตาม การปรับเปลี่ยนขั้นตอนการสกัดโปรตีน ได้แก่ กรดไตรคลอโรอะซิติก เพียง elp1p แบบเต็มตัวซึ่งแสดงให้เห็นว่าการตัดของ elp1p เป็นสิ่งประดิษฐ์ที่เกิดขึ้นในระหว่างการสกัดโปรตีนดังนั้นผลของเราระบุว่าถูกตัด elp1p ไม่ได้มีแนวโน้มที่จะควบคุมกิจกรรม elongator ซับซ้อน