2.5. 5-Bromo-2′-deoxyuridine (BrdU)

2.5. 5-Bromo-2′-deoxyuridine (BrdU) ELISA Cell Proliferation Assay

Maltodextrin treated and untreated NIH 3T3 cell proliferation was measured using the Bromodeoxyuridine (BrdU) Cell Proliferation Kit (Merck, USA). The cells were seeded in a 96-well plate at a concentration of 0.8 × 105 cells/mL overnight. A total of 10% RB maltodextrin were added separately with or without the addition of 100 ppm of various additives, including aloe vera, curcumin, and hydroxyproline and incubated for 24, 48, and 72 h, respectively, at 37°C and 5% CO2. Another two wells were treated with Multidex and media only to serve as untreated control. After the corresponding period, BrdU label was added into all wells and incubated for an additional 24 h. At the respected incubation hours, the cells were fixed and incubated at 4°C for approximately 30 min. After that, the plates were washed twice, added with 100 μL detector antibodies into each well, and incubated for 1 h. Then, 100 μL of goat anti-mouse Ig G-HRP conjugated was added and incubated for 30 min. Then, the plates were incubated with 100 μL of 3, 3′, 5, 5′-Tetramethylbenzidine (TMB) substrate for another 30 min. Finally, 100 μL of stop solution (sulfuric acid) was added and the absorbance was measured at 450 nm, using an ELISA microplate reader (Biotech Instruments, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 5-Bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) ELISA มือถือขยาย Assay Maltodextrin รับการรักษาและได้รับการรักษาเพิ่มจำนวนเซลล์ NIH 3T3 วัดโดยใช้ Bromodeoxyuridine (BrdU) ชุดมือถือขยาย (เมอร์ค, สหรัฐอเมริกา) เซลล์เมล็ดในแผ่น 96 หลุมที่ความเข้มข้น 0.8 × 105 เซลล์ / มลค้างคืน รวม RB maltodextrin 10% ถูกเพิ่มแยกต่างหากที่มีหรือไม่มีการเพิ่มของความเข้มข้น 100 ppm ของสารเติมแต่งต่าง ๆ รวมทั้งว่านหางจระเข้ขมิ้นชันและ hydroxyproline และบ่มเป็นเวลา 24, 48, และ 72 ชั่วโมงตามลำดับที่ 37 องศาเซลเซียสและ 5% CO2 อีกสองหลุมได้รับการรักษาด้วย Multidex และสื่อเดียวที่จะทำหน้าที่ควบคุมได้รับการรักษา หลังจากช่วงเวลาที่สอดคล้องกัน BrdU ฉลากถูกเพิ่มเข้าไปในบ่อทุกบ่อและบ่มสำหรับเพิ่มเติม 24 ชั่วโมง ในชั่วโมงการบ่มเคารพเซลล์ได้รับการแก้ไขและบ่มที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลาประมาณ 30 นาที หลังจากนั้นแผ่นถูกล้างสองครั้งเพิ่ม 100 ไมโครลิตรแอนติบอดีตรวจจับในแต่ละดีและบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง จากนั้น 100 ไมโครลิตรแพะต่อต้านเมาส์ Ig G-HRP ผันถูกบันทึกและบ่มเป็นเวลา 30 นาที จากนั้นแผ่นเปลือกโลกถูกบ่มด้วย 100 ไมโครลิตรของ 3, 3 ', 5, 5'-Tetramethylbenzidine (TMB) สารตั้งต้นอีก 30 นาที สุดท้าย 100 ไมโครลิตรของโซลูชั่นแบบครบวงจร (กรดกำมะถัน) คือการเพิ่มและการดูดกลืนแสงที่ถูกวัดที่ 450 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่าน microplate ELISA (ไบโอเทคเครื่องดนตรี, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 5-bromo-2 ’ - deoxyuridine ( brdu ) วิธีการใช้เซลล์มอลโตเด็กซ์ตรินและ NIH 3T3 เซลล์ การรักษาที่ไม่ได้ใช้ bromodeoxyuridine ( brdu ) ชุด proliferation เซลล์ ( สหรัฐอเมริกา ) เซลล์ถูก seeded ใน 96 ดีจานที่ความเข้มข้น 0.8 × 105 เซลล์ / มิลลิลิตรในชั่วข้ามคืน รวม 10 % RB DE เพิ่มต่างหาก หรือไม่เพิ่ม 100   ppm สารต่างๆ ได้แก่ ว่านหางจระเข้ ขมิ้นชัน และไฮดรอกซิโพรลีน และ บ่มเป็นเวลา 24 , 48 และ 72   H ตามลำดับ ที่อุณหภูมิ 37 องศา C และ CO2 ร้อยละ 5 อีก 2 บ่อ ได้รับการรักษาด้วย multidex และสื่อเท่านั้น เพื่อเป็นการควบคุมสาร หลังจากระยะเวลาที่สอดคล้องกัน brdu ฉลากที่ถูกเพิ่มลงในบ่อทั้งหมดโดยการเพิ่มเติม 24  เอชที่เคารพ 1 ชม. เซลล์ก็คงที่และอุณหภูมิ 4 องศา C ประมาณ 30 นาที หลังจากนั้น  จานถูกล้าง 2 ครั้ง เพิ่ม 100  μผมตรวจแอนติบอดีในแต่ละดีโดยสำหรับ 1  เอชแล้ว 100  μ L ของ IG ป้องกันเมาส์แพะ g-hrp conjugated ถูกเพิ่มและบ่มเป็นเวลา 30   มิน แล้ว จานถูกบ่มด้วย 100  μ L 3 , 3 ได้รับ 5 , 5 ’ - tetramethylbenzidine ( TMB ) ฐานรองอีก 30  นาทีในที่สุด  μ 100 ลิตรหยุดโซลูชั่น ( กรดซัลฟูริกกรด ) คือการเพิ่มและวัดค่า 450  นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านอีไลซ่า ( สหรัฐอเมริการัฐพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย 2 )