2.2. Preparation of spores and cont

2.2. Preparation of spores and contaminated milk powder
The Duncan and Strong medium (DS) (Duncan and Strong, 1968) was used to obtain spores from strains ATCC 13124, D10, 82049, 82100, WU99118, and WU01150 using a 10% overnight inoculum from a fluid thioglycolate (FTG) culture. From strains WU00128, WU00129, WU00130, WU00131, WU00132, WU00134, and WU00135, spores were obtained using DS medium with a 20% overnight inoculum from a FTG culture, and peptone–bile–theophylline–starch medium (Ushijima et al., 1987) was used to generate spores from strains WU90103, WU88105, WU90111, and WU01147 (5% overnight FTG inoculum). Spores were concentrated and washed by centrifugation (12,000_g), and stored at 4 jC in distilled water.
For the collaborative trial, spores of strain D10 were concentrated by centrifugation (12,000_g), suspended in pasteurized skim milk, homogenized, and subsequently spray-dried in a Stork pilot plant spray dryer at an inlet temperature of 150 jC and an outlet temperature of 85 jC. The resulting highly contaminated milk (HCM) powder was stored at 5 jC. This HCM was mixed in a stepwise manner in a mortar with equal volumes (wt/wt; Veld et al., 1999) of g-irradiated milk product 17 (Nestle´, Amsterdam, The Netherlands) to obtain two lower levels of contaminated milk powder (LCM) with approximately 4_105 cfu/g (LCM1) and 4_103 cfu/g (LCM2), respectively. Both LCMs were distributed in size one white/white gelatin capsules (Elanco Qualicaps, Fegersheim, France) using an aluminum filling apparatus in a laminar air flow cabinet; 15.6 g of LCM was distributed into 60 capsules (0.26 g of LCM per capsule). Capsules were stored at _20 jC with desiccant (silica gel), and mailed at room temperature. To minimize deviations due to storage conditions, all laboratories conducted the trial at the same time.




2.3. Media
The media were: IS (Merck, Darmstadt, Germany), TSC (Merck), SFP (Merck), SCA, OPSP (Oxoid, Basingstoke, England, UK), and DCA (Merck). SCA in the prestudy was prepared by adding glucose and sodium azide to perfringens agar base (Oxoid). SCA in the collaborative trial was prepared from its individual ingredients. Both SCA media differ in their concentration of elective substances: SCA from the prestudy contains 1 g/l ammonium iron (III) citrate and 1 g/l Na2S2O5, and SCA from the collaborative trial contains 0.5 g/l of both compounds. Dilutions were made with reduced saline solution (RSS) containing NaCl (8 g/l) and cysteine–HCl (0.5 g/l).
All media were tested in the pour plate method with an overlay of the same medium, since in (inter)- national standards of ISO, DIN, and NMKL, only pour plate methods are described. Plates were incubated anaerobically (Anoxomat system: jars flushed with a 80% N2, 10% CO2, and 10% H2 gas mixture plus catalyst; Mart, Lichtenvoorde, The Netherlands) at 37 jC for 18F2 h. Different methods to obtain anaerobiosis were used with the collaborative trial [e.g., Anaerocult, Anaerogen (Oxoid), Anoxomat, and
anaerobic chamber].
2.4. Method
2.4.1. Prestudy
Spores were heat-activated (70 jC, 20 min) in RSS and suitable dilutions were plated in triplicate using the pour plate method with an overlay of the same medium. The effect of a food matrix on the recovery was studied by inoculating ground beef. The first decimal dilution was heat-activated and colony-forming units were determined in triplicate using the above-mentioned method. Both experiments were conducted twice.
2.4.2. Collaborative trial
Capsules containing contaminated milk powder were reconstituted in 10 ml of RSS (control) or in a 10% food sample in RSS (without heat activation), diluted, and plated in duplicate using the pour plate method with an overlay of the same medium. Two capsules of the same contamination level were tested in both RSS and in the foodstuffs. Control samples were plated on IS only, whereas capsules reconstituted in foodstuffs were plated on the four above-mentioned media. Thirteen laboratories participated in the international collaborative trial. Each laboratory tested both basil and ground beef (except for one laboratory) and an optional product. Products of choice were: instant roast meat gravy, paˆte´, fried rice, rice, rice with egg, cereal, milk, sheep’s cheese, milk powder, spinach soup, mushroom soup, vegetable soup, and pea soup

2.5. Statistical analyses
The homogeneity of the capsules was checked by means of two tests, both of which are based on Cochran’s dispersion test statistics (Cochran, 1954; Mooijman et al., 1992). The first test, also called the T1 test, determines the variation between replicate samples from the same reconstituted capsule, and the second test, also called the T2 test, determines the variation between the sums of the replicate sample counts per reconstituted capsule. When the variation between the counts corresponds to a Poisson distribution, the value of T2 divided by (I_1) equals one. Since overdispersion was expected, T2/(I_1)V2.5 was used as a criterion for acceptance (Mooijman et al., 1992). The homogeneity of the capsules was determined using the results of 20 capsules, of which
the number of colony-forming units was determined on IS just after encapsulation.
Analysis of variance was used to determine the homogeneity of the laboratories (laboratories and capsules as fixed factors; a = 0.05) and to compare the agar media tested (prestudy: strains as random factor and medium as fixed factor; collaborative trial: laboratories as random factor and medium and foodstuff as fixed factor; a = 0.05). Data from the control samples were used to determine the homogeneity of the laboratories. Comparison of the agar media was carried out for both levels of contamination. Data from the collaborative trial were analyzed using the proposed ISO method (International Organization for Standardization, 2002).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2 การเตรียมเพาะเฟิร์นและนมผงปนเปื้อนสื่อดันแคนและแข็งแกร่ง (DS) (ดันแคนและแข็ง 1968) ใช้รับเพาะเฟิร์นจากสายพันธุ์ ATCC 13124, D10, 82049, 82100, WU99118 และ WU01150 inoculum ค้างคืนเป็น 10% จากวัฒนธรรมของเหลว thioglycolate (FTG) จากสายพันธุ์ WU00128, WU00129, WU00130, WU00131, WU00132, WU00134 และ WU00135 เพาะเฟิร์นได้รับปานกลาง DS ด้วย inoculum ค้างคืน 20% จากวัฒนธรรม FTG และ peptone-น้ำดี-theophylline – แป้งปานกลาง (Ushijima et al., 1987) ถูกใช้เพื่อสร้างเพาะเฟิร์นจากสายพันธุ์ WU90103, WU88105, WU90111 และ WU01147 (5% ค้างคืน FTG inoculum) เพาะเฟิร์นได้เข้มข้น และล้าง โดย centrifugation (12, 000_g), และจัดเก็บที่ 4 เจซีในน้ำกลั่นการทดลองร่วมกัน เพาะเฟิร์นต้องใช้ D10 เข้มข้น โดย centrifugation (12, 000_g), หยุดชั่วคราวใน skim นมพาสเจอร์ไรส์ homogenized เป็นกลุ่ม และต่อมาสเปรย์แห้งในนกกระสาโรงงานนำร่องกิ่งเป่าที่อุณหภูมิทางเข้าของเจซี 150 และอุณหภูมิร้านเจซี 85 ผงนมปนเปื้อนสูง(เด็ด ๆ เกี่ยวกับโรงแรม) ได้ถูกเก็บไว้ที่เจซี 5 เด็ด ๆ เกี่ยวกับโรงแรมนี้ถูกผสมด้วยวิธี stepwise ในครกด้วยวอลุ่มเท่า (wt/wt Veld et al., 1999) ของผลิตภัณฑ์นม g irradiated 17 (Nestle´ อัมสเตอร์ดัม ประเทศเนเธอร์แลนด์) รับสองลดระดับการปนเปื้อนในนมผง (LCM) ประมาณ 4_105 cfu/g (LCM1) และ 4_103 cfu/g (LCM2), ตามลำดับ นำเสนอทั้งในรูปที่กระจายในขนาดหนึ่งขาว/ขาวตุ๋นแคปซูล (Elanco Qualicaps, Fegersheim ฝรั่งเศส) ใช้อลูมิเนียมบรรจุเครื่องในตู้การไหลของอากาศ laminar ไม่เกิน 15.6 g ของ LCM ถูกกระจายเป็น 60 แคปซูล (0.26 กรัมของ LCM ต่อแคปซูล) แคปซูลถูกเก็บที่เจซี _20 กับชื้น (ซิลิก้าเจล), และส่งที่อุณหภูมิห้อง เพื่อลดความแตกต่างจากสภาพการจัดเก็บ ห้องปฏิบัติการทั้งหมดดำเนินการทดลองในเวลาเดียวกัน2.3 การสื่อถูกสื่อ: เป็น (เมอร์ค ดาร์มส เยอรมนี) , TSC (บริษัทเมอร์ค), SFP (เมอร์ค), SCA, OPSP (Oxoid, Basingstoke อังกฤษ สหราชอาณาจักร), และ DCA (เมอร์ค) SCA ใน prestudy ที่ถูกจัดเตรียม โดยการเพิ่มกลูโคสและโซเดียม azide perfringens agar พื้นฐาน (Oxoid) SCA ในคดีร่วมกันถูกเตรียมจากส่วนผสมของแต่ละ สื่อ SCA ทั้งสองแตกต่างกันในความเข้มข้นของสารวิชาเลือก: SCA จาก prestudy ที่ประกอบด้วยซิเตเหล็ก (III) แอมโมเนีย 1 บัญชีและ 1 g/l Na2S2O5 และ 0.5 g/l ของสารประกอบทั้งสองประกอบด้วย SCA จากทดลองร่วมกัน Dilutions ที่ทำกับลดเกลือ (RSS) ที่ประกอบด้วย NaCl (8 บัญชี) และ cysteine – HCl (0.5 g/l) สื่อทั้งหมดทดสอบวิธีจานเทกับการซ้อนทับของสื่อเดียว ตั้งแต่ใน (อินเตอร์) -มาตรฐาน ISO, DIN และ NMKL เทแผ่นอธิบายวิธีเท่านั้น แผ่นที่ incubated anaerobically (ระบบ Anoxomat: ขวดล้าง ด้วย 80% N2, CO2, 10% และ 10% H2 แก๊สผสม บวก เศษ มินิมาร์ท Lichtenvoorde ประเทศเนเธอร์แลนด์) ที่เจซี 37 สำหรับ h. 18F2 ต่างไปจากเดิม ใช้วิธีการขอรับ anaerobiosis กับทดลองร่วมกัน [เช่น Anaerocult, Anaerogen (Oxoid) Anoxomat และไม่ใช้ห้อง]2.4. วิธี2.4.1. prestudyเพาะเฟิร์นถูกเปิดใช้งานความร้อน (70 เจซี 20 นาที) RSS และเหมาะ dilutions ถูกชุบใน triplicate ด้วยวิธีจานเทซ้อนทับกลางเดียวกัน มีศึกษาผลของเมทริกซ์อาหารการกู้คืน โดย inoculating เนื้อดิน เจือจางทศนิยมแรกถูกเปิดใช้งานความร้อน และหน่วยโคโลนีขึ้นรูปถูกกำหนดใน triplicate โดยใช้วิธีการดังกล่าว ได้ดำเนินการทดลองทั้งสอง2.4.2 การร่วมทดลองแคปซูลที่ประกอบด้วยผงนมปนเปื้อนได้ reconstituted 10 ml ของ RSS (ควบคุม) หรือตัวอย่างอาหาร 10% ใน RSS (ไม่เปิดใช้งานความร้อน), ยกเว้น แล้วชุบในซ้ำด้วยวิธีจานเทซ้อนทับกลางเดียวกัน ทดสอบ 2 แคปซูลของเทียมปนเปื้อน ใน RSS ทั้งสอง และ ในการกิน ตัวอย่างควบคุมได้ชุบใน IS เท่านั้น ในขณะที่มีชุบ reconstituted ในกินแคปซูลในสื่อดังกล่าว 4 ห้องสิบสามลักษณะร่วมในการทดลองร่วมกันระหว่างประเทศ แต่ละห้องปฏิบัติทดสอบใบกะเพรา และเนื้อดิน (ยกเว้นห้องปฏิบัติการหนึ่ง) และผลิตภัณฑ์เลือก สินค้าที่เลือก: น้ำซอสราดหน้าเนื้อย่างทันที paˆte´ ผัดข้าว ข้าว ข้าวกับไข่ ธัญพืช นม แกะของชีส นมผง ซุปผักโขม ซุปเห็ด ซุปผัก และซุปถั่ว 2.5. สถิติวิเคราะห์ตรวจสอบ โดยการทดสอบทั้งสอง ทั้งสองอย่างซึ่งขึ้นอยู่กับสถิติการทดสอบการกระจายตัวของ Cochran (Cochran, 1954; homogeneity ของแคปซูล Mooijman et al., 1992) การทดสอบครั้งแรก เรียกว่าทดสอบ T1 กำหนดความผันแปรระหว่างตัวอย่าง replicate จากแคปซูล reconstituted เดียวกัน และการทดสอบที่สอง ยัง เรียกว่าทดสอบ T2 กำหนดความผันแปรระหว่างผลรวมของจำนวนตัวอย่าง replicate ต่อแคปซูล reconstituted เมื่อเปลี่ยนแปลงระหว่างการตรวจนับสอดคล้องกับการแจกแจงปัวซอง ค่า T2 หาร (I_1) เท่ากับหนึ่ง เนื่องจากคาดว่า overdispersion, T2 / (I_1) V2.5 ถูกใช้เป็นเกณฑ์ในการยอมรับ (Mooijman et al., 1992) Homogeneity ของแคปซูลที่กำหนดโดยใช้ผลแคปซูล 20 ที่จำนวนโคโลนีขึ้นหน่วยกำหนดใน IS หลัง encapsulationใช้กำหนด homogeneity ของห้องปฏิบัติการวิเคราะห์ผลต่างของ (ห้องปฏิบัติการและแคปซูลเป็นปัจจัยคงที่ เป็น = 0.05) และ การเปรียบเทียบสื่อ agar ทดสอบ (prestudy: สายพันธุ์เป็นปัจจัยสุ่มและสื่อเป็นปัจจัยคงที่ ทดลองร่วม: ห้องปฏิบัติการเป็นปัจจัยสุ่ม และปานกลาง และอาหารเป็นปัจจัยคงที่ เป็น = 0.05) ข้อมูลจากตัวอย่างตัวควบคุมถูกใช้เพื่อกำหนด homogeneity ของห้องปฏิบัติการ เปรียบเทียบสื่อ agar ได้ดำเนินการทั้งระดับการปนเปื้อน ข้อมูลจากการทดลองร่วมได้วิเคราะห์โดยใช้วิธีมาตรฐาน ISO เสนอ (องค์กรระหว่างประเทศว่าด้วยการมาตรฐาน 2002)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 เตรียมความพร้อมของสปอร์และนมผงปนเปื้อน
ดันแคนและขนาดกลางที่แข็งแกร่ง (DS) (ดันแคนและแข็งแรง 1968) ถูกนำมาใช้เพื่อให้ได้สปอร์จากสายพันธุ์ ATCC 13124, D10, 82049, 82100, WU99118 และ WU01150 โดยใช้หัวเชื้อชั่วข้ามคืน 10% ของเหลว thioglycolate (FTG) วัฒนธรรม จากสายพันธุ์ WU00128, WU00129, WU00130, WU00131, WU00132, WU00134 และ WU00135 สปอร์ที่ได้รับโดยใช้สื่อ DS กับเชื้อชั่วข้ามคืน 20% จากวัฒนธรรม FTG และเปปโตน-น้ำดี-theophylline แป้งกลาง (Ushijima et al., 1987 ) ถูกนำมาใช้ในการสร้างสปอร์จากสายพันธุ์ WU90103, WU88105, WU90111 และ WU01147 (5% เมื่อคืนเชื้อ FTG) สปอร์มีความเข้มข้นและล้างโดยการหมุนเหวี่ยง (12,000_g) และเก็บไว้ที่ 4 JC ในน้ำกลั่น.
สำหรับการทดลองการทำงานร่วมกันของสปอร์สายพันธุ์ D10 มีความเข้มข้นโดยการหมุนเหวี่ยง (12,000_g) ที่ลอยอยู่ในนมพร่องมันเนยพาสเจอร์ไรส์, หดหายและต่อมาสเปรย์ อบแห้งในเครื่องเป่านำร่องพืชนกกระสาสเปรย์ที่อุณหภูมิ 150 JC และอุณหภูมิที่ออกจาก 85 JC ผลนมปนเปื้อนสูง (HCM) ผงถูกเก็บไว้ที่ 5 JC HCM นี้ได้รับการผสมในลักษณะแบบขั้นตอนในครกมีปริมาณเท่ากับ (น้ำหนัก / น้ำหนัก; Veld et al, 1999.) ของผลิตภัณฑ์นม G-17 การฉายรังสี (Nestle', อัมสเตอร์ดัม, เนเธอร์แลนด์) เพื่อให้ได้สองระดับที่ต่ำกว่าของนมปนเปื้อน ผง (LCM) มีประมาณ 4_105 cfu / g (LCM1) และ 4_103 cfu / g (LCM2) ตามลำดับ ทั้ง LCMs มีการกระจายในขนาดหนึ่งขาว / แคปซูลเจลาตินสีขาว (Elanco Qualicaps, Fegersheim, ฝรั่งเศส) โดยใช้อลูมิเนียมบรรจุอุปกรณ์ในตู้ไหลของอากาศราบเรียบ; 15.6 กรัม LCM ถูกกระจายไป 60 แคปซูล (0.26 กรัมต่อแคปซูล LCM) แคปซูลถูกเก็บไว้ที่ _20 JC กับสารดูดความชื้น (ซิลิกาเจล) และจัดส่งทางไปรษณีย์ที่อุณหภูมิห้อง เพื่อลดการเบี่ยงเบนเนื่องจากสภาพการเก็บรักษาในห้องทดลองทั้งหมดนี้ดำเนินการพิจารณาคดีในเวลาเดียวกัน. 2.3 สื่อสื่อคือ IS (เมอร์ค, Darmstadt, เยอรมนี), ทีเอสซี (เมอร์), SFP (เมอร์), SCA, OPSP (Oxoid เบซิง, อังกฤษ, สหราชอาณาจักร) และ DCA (เมอร์) SCA ใน prestudy ถูกจัดทำขึ้นโดยการเพิ่ม azide กลูโคสและโซเดียม perfringens วุ้นฐาน (Oxoid) SCA ในการทดลองการทำงานร่วมกันที่เตรียมจากส่วนผสมของแต่ละบุคคล ทั้งสื่อ SCA แตกต่างกันในความเข้มข้นของสารของพวกเขาเลือก: SCA จาก prestudy มี 1 กรัม / ลิตรแอมโมเนียมเหล็ก (III) ซิเตรตและ 1 กรัม / ลิตร Na2S2O5 และ SCA จากการทดลองการทำงานร่วมกันมี 0.5 กรัม / ลิตรของสารทั้งสอง เจือจางถูกสร้างขึ้นมากับน้ำเกลือที่ลดลง (RSS) ที่มีโซเดียมคลอไรด์ (8 g / l) และ cysteine-HCl (0.5 g / l). สื่อทั้งหมดได้รับการทดสอบในวิธีการเทแผ่นซ้อนทับกับของกลางที่เหมือนกันตั้งแต่ใน (ระหว่าง ) - มาตรฐานแห่งชาติของ ISO, DIN และ NMKL เพียงวิธีการเทแผ่นจะมีคำอธิบาย แผ่นถูกบ่มแบบไม่ใช้อากาศ (ระบบ Anoxomat: ขวดล้างด้วย 80% N2, CO2 10% และ 10% ส่วนผสมของก๊าซ H2 บวกตัวเร่งปฏิกิริยา; มาร์ท, Lichtenvoorde, เนเธอร์แลนด์) ที่ 37 JC สำหรับ 18F2 ชั่วโมง วิธีการที่แตกต่างกันเพื่อให้ได้ anaerobiosis ถูกนำมาใช้กับการพิจารณาคดีร่วมกัน [เช่น Anaerocult, Anaerogen (Oxoid) Anoxomat และห้องแบบไม่ใช้ออกซิเจน]. 2.4 วิธี2.4.1 Prestudy สปอร์ได้เปิดใช้งานความร้อน (70 JC, 20 นาที) ใน RSS และเจือจางที่เหมาะสมถูกชุบในเพิ่มขึ้นสามเท่าโดยใช้วิธีการเทแผ่นที่มีการซ้อนทับของกลางเดียวกัน ผลกระทบของเมทริกซ์อาหารในการกู้คืนได้รับการศึกษาโดยการฉีดวัคซีนเนื้อดิน เจือจางแรกทศนิยมถูกเปิดใช้งานความร้อนและหน่วยอาณานิคมขึ้นรูปได้รับการพิจารณาในการเพิ่มขึ้นสามเท่าโดยใช้วิธีการดังกล่าวข้างต้น การทดลองทั้งสองได้รับการดำเนินการเป็นครั้งที่สอง. 2.4.2 การพิจารณาคดีความร่วมมือแคปซูลที่มีส่วนผสมของนมผงปนเปื้อนที่ถูกสร้างขึ้นใน 10 ml ของ RSS (ควบคุม) หรือในตัวอย่างอาหาร 10% ใน RSS (ไม่มีการเปิดใช้งานความร้อน) เจือจางและชุบในที่ซ้ำกันโดยใช้วิธีการเทแผ่นซ้อนทับกับของกลางเดียวกัน . สองแคปซูลของระดับการปนเปื้อนเดียวกันได้มีการทดสอบทั้งใน RSS และในอาหาร ตัวอย่างการควบคุมถูกชุบบนเป็นเพียงในขณะที่แคปซูลละลายในอาหารถูกชุบทั้งสี่สื่อดังกล่าวข้างต้น สิบสามห้องปฏิบัติการมีส่วนร่วมในการพิจารณาคดีระหว่างประเทศร่วมกัน ห้องปฏิบัติการแต่ละการทดสอบทั้งสองใบโหระพาและเนื้อดิน (ยกเว้นห้องปฏิบัติการอย่างใดอย่างหนึ่ง) และสินค้าที่ไม่จำเป็น ผลิตภัณฑ์ของทางเลือกคือน้ำเกรวี่เนื้อย่างทันที pate' ข้าวผัดข้าวกับไข่ธัญพืชนมชีสแกะ, นมผง, ซุปผักโขมซุปเห็ด, ซุปผักและถั่วซุป2.5 สถิติการวิเคราะห์ความเป็นเนื้อเดียวกันของแคปซูลที่ได้รับการตรวจสอบโดยวิธีการทดสอบสองทั้งสองซึ่งจะขึ้นอยู่กับการกระจายตัว Cochran สถิติการทดสอบ (Cochran, 1954;. Mooijman, et al, 1992) การทดสอบครั้งแรกที่เรียกว่าการทดสอบ T1 กำหนดความแตกต่างระหว่างกลุ่มตัวอย่างซ้ำจากแคปซูลสร้างเดียวกันและทดสอบที่สองที่เรียกว่าการทดสอบ T2 กำหนดความแตกต่างระหว่างผลบวกของการนับซ้ำตัวอย่างต่อแคปซูลสร้าง เมื่อความแตกต่างระหว่างการนับสอดคล้องกับการกระจาย Poisson ค่าของ T2 หารด้วย (i_1) เท่ากับหนึ่ง ตั้งแต่ overdispersion ที่คาดหวัง T2 / (i_1) V2.5 ถูกนำมาใช้เป็นเกณฑ์การยอมรับ (Mooijman et al., 1992) ความสม่ำเสมอของแคปซูลถูกกำหนดโดยใช้ผลการ 20 แคปซูลซึ่งจำนวนหน่วยอาณานิคมขึ้นรูปได้รับการพิจารณาบนเป็นเพียงหลังจาก encapsulation. การวิเคราะห์ความแปรปรวนถูกใช้ในการตรวจสอบความสม่ำเสมอของห้องปฏิบัติการ (ห้องปฏิบัติการและแคปซูลเป็นปัจจัยคงที่ ; = 0.05) และเปรียบเทียบสื่อวุ้นทดสอบ (prestudy: สายพันธุ์เป็นปัจจัยสุ่มกลางและขนาดย่อมเป็นปัจจัยคงที่การพิจารณาคดีความร่วมมือ: ห้องปฏิบัติการเป็นปัจจัยสุ่มและขนาดกลางและอาหารเป็นปัจจัยคงที่ = 0.05) ข้อมูลจากตัวอย่างควบคุมถูกนำมาใช้เพื่อตรวจสอบความสม่ำเสมอของห้องปฏิบัติการ เปรียบเทียบของสื่อวุ้นได้ดำเนินการทั้งระดับของการปนเปื้อน ข้อมูลจากการทดลองการทำงานร่วมกันที่ได้มาวิเคราะห์โดยใช้วิธีการที่นำเสนอมาตรฐาน ISO (องค์การระหว่างประเทศเพื่อขอรับ, 2002)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การเตรียมและนมผงที่ปนเปื้อนสปอร์
ดันแคนและแข็งแรงปานกลาง ( DS ) ( ดันแคนและแข็งแรง , 1968 ) ถูกใช้เพื่อขอรับสปอร์จากสายพันธุ์ ATCC 13124 D10 82049 82100 , , , , wu99118 และ wu01150 ใช้ 10 % เชื้อชั่วข้ามคืนจากไทโอไกลโคเลตของไหล ( ftg ) วัฒนธรรม จากสายพันธุ์ wu00128 wu00129 wu00130 wu00131 , , , wu00132 wu00134 และ wu00135 , , ,สปอร์ที่ได้มาใช้ DS ขนาดกลางกับ 20% ค้างคืนเชื้อจาก ftg วัฒนธรรม และเปปโตน–––แป้งน้ำดีในกลาง ( ushijima et al . , 1987 ) ถูกใช้เพื่อสร้างสปอร์จากสายพันธุ์ wu90103 wu88105 wu90111 , , , และ wu01147 ( 5% ftg เชื้อชั่วข้ามคืน ) สปอร์มีความเข้มข้น และล้างโดยการเหวี่ยงแยก ( 12000_g ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 JC ในน้ำกลั่น
เพื่อร่วมกันพิจารณา สปอร์ของเชื้อ D10 มีความเข้มข้นโดยการเหวี่ยงแยก ( 12000_g ) ที่แขวนลอยในพาสเจอร์ไรส์ Skim milk , บด , และต่อมาสเปรย์แห้งในโรงงานนำร่องนกกระสาเครื่องอบแห้งแบบพ่นฝอยที่อุณหภูมิ 150 JC และอุณหภูมิ 85 JC ทำให้ปนเปื้อนสูงนม ( HCM ) ผงที่เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 5 JCข้อมูลนี้ถูกผสมในลักษณะแบบในครกมีปริมาณเท่ากับ ( wt / wt ; เวลด์ et al . , 1999 ) g-irradiated ผลิตภัณฑ์นม 17 ( เนสท์เล่ใหม่ , อัมสเตอร์ดัม , เนเธอร์แลนด์ ) ที่จะได้รับสองระดับล่างของนมผงปนเปื้อน ( LCM ) ที่มีประมาณ 4_105 cfu / g ( lcm1 ) และ 4_103 ฟยู / g ( lcm2 ) ตามลำดับ หรือ มีการกระจายทั้งในแคปซูล สีขาว / สีขาวขนาด qualicaps เจลาติน ( อีแลนโค ,fegersheim , ฝรั่งเศส ) โดยใช้อลูมิเนียมบรรจุเครื่องมือในการไหลของอากาศตู้ ; 15.6 กรัมของ LCM กระจายไป 60 แคปซูล ( 0.26 กรัมของ LCM ต่อแคปซูล ) แคปซูลที่ถูกเก็บไว้ใน _20 JC ด้วยสารดูดความชื้น ( ซิลิกาเจล และส่งที่อุณหภูมิห้อง เพื่อลดความคลาดเคลื่อนเนื่องจากสภาพกระเป๋าทุกห้องปฏิบัติการดำเนินการพิจารณาคดีในเวลาเดียวกัน




2.3 สื่อ
สื่อ ได้แก่( เมอร์คดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) , TSC ( Merck ) SFP ( Merck ) , SCA opsp ( oxoid Basingstoke , สหราชอาณาจักร , อังกฤษ ) , และ DCA ( Merck ) SCA ใน prestudy เตรียมเพิ่มกลูโคส และโซเดียมไซด์เพื่อ perfringens วุ้นฐาน ( oxoid ) SCA ในความร่วมมือการทดลองที่เตรียมจากส่วนผสมแต่ละตัวของ ทั้งสื่อที่แตกต่างกันในสเปกตรัมของการเลือกสาร :SCA จาก prestudy ประกอบด้วย 1 g / l แอมโมเนียมซิเตรตเหล็ก ( III ) และ 1 กรัมต่อลิตร na2s2o5 และสเปกตรัมจากการทดลองประกอบด้วยแบบ 0.5 กรัมต่อลิตร ทั้งสาร วิธีการทำลดน้ำเกลือ ( RSS ) ที่มีเกลือโซเดียมคลอไรด์ ( 8 กรัม / ลิตร ) และซีสเตอีน ( HCl ( 0.5 กรัม / ลิตร )
สื่อทั้งหมดถูกทดสอบในจานราดด้วยวิธีซ้อนทับของตัวกลางเดียวกันตั้งแต่ ( อินเตอร์ ) - รับรองมาตรฐาน ISO , DIN ,และ nmkl เพียงเทแผ่นเป็นวิธีการอธิบาย จานถูกบ่มพ ( anoxomat ระบบ : เหยือกกลั้วกับ 80% CO2 และ N2 , 10% , 10% ราคาแก๊สผสมบวกตัวเร่งปฏิกิริยา ; มาร์ท , ลิกเทนวอร์ด , เนเธอร์แลนด์ ) ที่ 37 JC สำหรับ 18f2 . วิธีการที่จะได้รับ anaerobiosis ใช้กับร่วมกันทดลอง [ เช่น anaerocult anaerogen ( oxoid ) anoxomat , และระหว่างห้อง ]
.
2.4 .วิธี
เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . prestudy
สปอร์ถูกเปิดใช้งานความร้อน ( 70 JC , 20 นาที ) ใน RSS และเจือจางที่เหมาะสมถูกชุบทั้งสามใบใช้ใส่จานด้วยวิธีซ้อนทับของสื่อเดียวกัน ผลของเมทริกซ์อาหารในการกู้คืน ทำการศึกษาโดยการฉีดวัคซีนเนื้อดินการใช้ทศนิยมแรกถูกความร้อนและสร้างอาณานิคมหน่วยวิเคราะห์ทั้งสามใบใช้วิธีดังกล่าวข้างต้น ทั้งการทดลองสองครั้ง .
2.4.2 . ร่วมกันทดลอง
แคปซูลที่มีปนเปื้อนนมผงถูกสร้างใน 10 ml ของ RSS ( ควบคุม ) หรือใน 10% อาหารตัวอย่าง RSS ( โดยไม่ต้องใช้ความร้อน ) , จางหายไปชุบซ้ำและใช้วิธีราดจานที่มีการทับซ้อนของสื่อเดียวกัน สองแคปซูลของระดับการปนเปื้อนอยู่ในระดับเดียวกัน ทดสอบทั้งใน RSS และในอาหาร ตัวอย่างควบคุม ชุบบนเท่านั้น ส่วนแคปซูลสามารถบริโภคได้ชุบทั้งสี่ดังกล่าว สื่อ สิบสามห้องปฏิบัติการเข้าร่วมการทดลองร่วมกันระหว่างประเทศแต่ละห้องปฏิบัติการทดสอบทั้งกะเพราเนื้อดิน ( ยกเว้นปฏิบัติการ ) และตัวเลือกผลิตภัณฑ์ ผลิตภัณฑ์ของทางเลือก : ย่างเนื้อซอสเกรวี่สำเร็จรูป , PA ˆ te ใหม่ , ข้าว , ข้าวผัด , ข้าวกับไข่ นม ธัญพืช แกะ ชีส แป้ง นม ซุป แกงจืด ซุป ผัก เห็ด ผักโขม และซุปถั่ว

2.5 สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์
ความเป็นเนื้อเดียวกันของแคปซูลก็ถูกตรวจสอบโดยวิธีการทั้งสองการทดสอบซึ่งทั้งสองจะขึ้นอยู่กับการกระจายตัวของ Cochran สถิติทดสอบ ( Cochran 2497 ; mooijman et al . , 1992 ) การทดสอบครั้งแรกที่เรียกว่าการทดสอบ T1 , กำหนดรูปแบบระหว่างเลียนแบบตัวอย่างจากแคปซูลสามารถเดียวกันและทดสอบที่สองเรียกว่าการทดสอบ T2 , กําหนดรูปแบบระหว่างผลรวมของเลียนแบบตัวอย่างนับต่อสร้างแคปซูลเมื่อการเปลี่ยนแปลงระหว่างนับสอดคล้องกับการแจกแจงปัวซง , ค่าของ T2 แบ่ง ( i_1 ) มีค่าเท่ากับหนึ่ง ตั้งแต่ overdispersion ถูกคาด T2 / ( i_1 ) v2.5 ถูกใช้เป็นเกณฑ์การยอมรับ ( mooijman et al . , 1992 ) ความเป็นเนื้อเดียวกันของแคปซูลใช้วิเคราะห์ผล 20 แคปซูล ซึ่ง
จำนวนหน่วยที่จัดตั้งอาณานิคมถูกพิจารณาเป็นเพียงหลังจากการ .
การวิเคราะห์ความแปรปรวนใช้ตรวจสอบความสม่ำเสมอของห้องปฏิบัติการ ( ห้องปฏิบัติการและแคปซูลเป็นปัจจัยคงที่ ; = 0.05 ) และเปรียบเทียบการใช้สื่อทดสอบ ( prestudy : สายพันธุ์เป็นปัจจัยสุ่มขนาดกลางและเป็นปัจจัยคงที่ ; การทดลองร่วมกัน :ห้องปฏิบัติการเป็นปัจจัยสุ่มขนาดกลางและอาหารเป็นปัจจัยคงที่ ; = 0.05 ) ข้อมูลจากตัวอย่างควบคุมที่ใช้เพื่อตรวจสอบความสม่ำเสมอของห้องปฏิบัติการ การเปรียบเทียบการใช้สื่อพบว่าทั้งระดับของการปนเปื้อน ข้อมูลที่ได้จากการทดลองมาวิเคราะห์ร่วมกันเสนอวิธีการใช้ ISO ( องค์การระหว่างประเทศเพื่อการมาตรฐาน
, 2002 )