ABSTRACTThe ability to perform prec

ABSTRACT
The ability to perform precise genetic engineering such as
gene targeting in rabbits would benefit biomedical research by
enabling, for example, the generation of genetically defined
rabbit models of human diseases. This has so far not been
possible because of the lack of functional rabbit embryonic stem
cells and the high fetal and perinatal mortality associated with
rabbit somatic cell nuclear transfer. We examined cultured
pluripotent and multipotent cells for their ability to support the
production of viable animals. Rabbit putative embryonic stem
(ES) cells were derived and shown capable of in vitro and in vivo
pluripotent differentiation. We report the first live born ESderived
rabbit chimera. Rabbit mesenchymal stem cells (MSCs)
were derived from bone marrow, and multipotent differentiation
was demonstrated in vitro. Nuclear transfer was carried out with
both cell types, and embryo development was assessed in vitro
and in vivo. Rabbit MSCs were markedly more successful than ES
cells as nuclear donors. MSCs were transfected with fluorescent
reporter gene constructs and assessed for nuclear transfer
competence. Transfected MSCs supported development with
similar efficiency as normal MSCs and resulted in the first live
cloned rabbits from genetically manipulated MSCs. Reactivation
of fluorescence reporter gene expression in reconstructed
embryos was investigated as a means of identifying viable
embryos in vitro but was not a reliable predictor. We also
examined serial nuclear transfer as a means of rescuing dead
animals.
embryonic stem cells, mesenchymal stem cells, nuclear transfer,
rabbits
INTRODUCTION
Rabbits are important laboratory animals. The ability to
perform precise genetic engineering such as gene targeting in
rabbits would greatly benefit biomedical research by enabling,
for example, the development of genetically defined rabbit
models of human diseases. This has so far not been possible
because of the lack of functional rabbit embryonic stem (ES)
cells and the inefficiency of rabbit somatic cell nuclear transfer.
Nuclear transfer from cultured somatic cells was developed
in part to circumvent the need for ES cells to generate
transgenic and gene-targeted large animals [1, 2]. However,
this has been technically more difficult than originally hoped.
Now, more than 10 years after our first demonstration, there are
only a few examples of gene targeting in mammals other than
mice: COL1A1 in sheep [2], PRNP in sheep, cattle, and goats
[3–5], GGTA1 in pigs [6, 7], IGH in cattle [4], and CFTR in
pigs [8].
The cell type used is an important factor in nuclear transfer,
particularly when the aim is to generate gene-targeted animals.
Ideally, the cells used should proliferate extensively in culture,
survive genetic manipulation procedures, support homologous
recombination with reasonable efficiency, and undergo efficient
reprogramming after nuclear transfer.
Mouse ES cells are eminently suitable for gene targeting, and
some evidence indicates they are also more successful nuclear
donors than differentiated cell types. Embryos cloned from ES
cells developed to term at greater efficiency [9, 10] than embryos
from adult cells, such as cumulus [11], fibroblasts [12], or Sertoli
cells [13], suggesting that the epigenetic state of ES cells may be
more similar to that of early embryos. This is supported by the
fact that blastocysts derived from ES cells faithfully expressed
Pou5f1 (previously known as Oct4) and related pluripotency
genes whereas only 62% of blastocysts cloned from cumulus
cells reactivated these genes [14], which is probably related to the
rather open, more euchromatic, chromatin conformation observed
in ES cells [15].
The problem is the difficulty in deriving and maintaining
definitive ES cells or equivalent induced pluripotent stem cell
lines from many species. ES-like cells have been described in
rabbit but, as with many other mammals, definitive function by
chimera formation has not been demonstrated [16–19].
Undifferentiated ES-like cells have not yet been used for
rabbit nuclear transfer, although live rabbits have been obtained
using differentiated ES derivatives [16].
Multipotent mesenchymal stem cells (MSCs) are attractive
alternatives to ES cells for generating gene-targeted animals.
MSCs are readily derived from bone marrow or adipose tissue;
they proliferate well in culture and have been used successfully
for nuclear transfer in cattle and pigs [20–23]. MSCs can be
transfected and retain their multipotent identity, and they
support preimplantation development of nuclear transfer
embryos at rates similar to nonmanipulated MSCs [21, 22].
It is now clear that the success of nuclear transfer differs
markedly between various mammals, with rabbits one of the
more difficult species examined. Besides our group, only three
other groups have succeeded in generating cloned rabbits [24–
27], including one green fluorescent protein (EGFP) transgenic
rabbit [28]. Researchers have consistently reported heavy
1Supported in part by DFG grants SCHN 971/1-2 2005–2009 and ZA
425/1-1, and in part by the European Community’s Seventh Framework
Programme (FP7/2007–2011) under grant agreement no. 223485
(Plurisys).
2Correspondence: A. Schnieke, Chair for Livestock
Biotechnology, Center of Life and Food Sciences Weihenstephan,
TU Muenchen, Liesel-Beckmann-Str 1, 85354 Freising, Germany.
FAX: [phone]; e-mail: [e-mail]
3These authors contributed equally to this work.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทคัดย่อความสามารถในการทำพันธุวิศวกรรมโดยละเอียดเช่นยีนเป้าหมายในกระต่ายจะได้ประโยชน์งานวิจัยทางชีวการแพทย์เปิดใช้งาน ตัวอย่าง การสร้างแปลงพันธุกรรมกำหนดกระต่ายโมเดลของโรคในมนุษย์ นี้มากไม่ได้เป็นไปได้เนื่องจากขาดต้นกำเนิดตัวอ่อนกระต่ายที่ทำงานเซลล์และการสูงและทารกในครรภ์ และปริกำเนิดการตายเกี่ยวข้องกับกระต่ายมาติกเซลล์นิวเคลียร์โอน เราตรวจสอบอ่างpluripotent เซลล์ multipotent สำหรับความสามารถในการสนับสนุนและการการผลิตสัตว์ทำงานได้ กระต่ายต้นกำเนิดตัวอ่อน putativeเซลล์ (ES) ขึ้นมา และแสดงความสามารถในการในหลอดทดลอง และในสัตว์ทดลองpluripotent สร้างความแตกต่าง เรารายงาน ESderived เกิดสดครั้งแรกกระต่ายชิเมร่า กระต่าย mesenchymal สเต็มเซลล์ (MSCs)ได้มาจากไขกระดูก และสร้างความแตกต่าง multipotentมีสาธิตการเพาะเลี้ยง โอนนิวเคลียร์ถูกดำเนินการด้วยทั้งเซลล์ชนิด และพัฒนาตัวอ่อนถูกประเมินในและในสัตว์ทดลอง กระต่าย MSCs สำเร็จอย่างเด่นชัดมากขึ้นกว่า ESเซลล์เป็นผู้บริจาคนิวเคลียร์ MSCs ถูก transfected กับฟลูออเรสเซนต์โปรแกรมรายงานยีนสร้าง และประเมินโอนนิวเคลียร์ความสามารถ พัฒนาสนับสนุน MSCs transfected ด้วยประสิทธิภาพคล้ายเป็น MSCs ปกติ และผลในครั้งแรกกระต่ายโคลนจากแปลงพันธุกรรมจัดการ MSCs เปิดใช้งานใหม่ของยีนโปรแกรมรายงาน fluorescence ในเชิดโคลนถูกตรวจสอบว่าได้ระบุในโคลนแต่ไม่ผู้ทายผลเชื่อถือ เรายังตรวจสอบการโอนนิวเคลียร์ประจำว่าช่วยคนตายสัตว์ตัวอ่อนสเต็มเซลล์ สเต็มเซลล์ mesenchymal โอนนิวเคลียร์กระต่ายแนะนำกระต่ายเป็นสัตว์สำคัญปฏิบัติ ความสามารถในการทำละเอียดพันธุวิศวกรรมเช่นยีนเป้าหมายในกระต่ายจะมากได้ประโยชน์งานวิจัยทางชีวการแพทย์ โดยเปิดใช้งานตัวอย่าง การพัฒนาของกระต่ายที่แปลงพันธุกรรมกำหนดแบบจำลองของโรคในมนุษย์ นี้จนไม่ได้เป็นไปได้เนื่องจากขาดตัวอ่อนทำกระต่ายเกิด (ES)inefficiency ของกระต่ายโอนนิวเคลียร์มาติกเซลล์และเซลล์โอนนิวเคลียร์จากอ่างมาติกเซลล์ได้รับการพัฒนาในการหลีกเลี่ยงสำหรับ ES เซลล์สร้างถั่วเหลือง และยีนเป้าหมายใหญ่สัตว์ [1, 2] อย่างไรก็ตามนี้มีเทคนิคเพิ่มเติมยากมากกว่าเดิม หวังตอนนี้ มากกว่า 10 ปีหลังจากการสาธิตของเราแรก มีเพียงไม่กี่ตัวอย่างของยีนเป้าหมายในการเลี้ยงลูกด้วยนมอีกกว่าหนู: COL1A1 ในแกะ [2], PRNP ในแกะ วัว แพะGGTA1 [3-5], ในสุกร [6, 7], ขในวัว [4], และ CFTR ในหมู [8]ชนิดเซลล์ที่ใช้เป็นปัจจัยสำคัญในการถ่ายโอนนิวเคลียร์โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อเป้าหมายคือการ สร้างสัตว์ยีนเป้าหมายดาว เซลล์ที่ใช้ควร proliferate อย่างกว้างขวางในวัฒนธรรมกระบวนการจัดการทางพันธุกรรมความอยู่รอด สนับสนุน homologousrecombination มีประสิทธิภาพเหมาะสม และรับอย่างมีประสิทธิภาพreprogramming หลังโอนนิวเคลียร์เซลล์ ES เมาส์เหมาะคนที่ยีนเป้าหมาย และหลักฐานบางอย่างบ่งชี้ว่า พวกเขาจะประสบความสำเร็จนิวเคลียร์ผู้บริจาคกว่าชนิดเซลล์ต่าง ๆ โคลนโคลนจาก ESเซลล์ที่ได้รับการพัฒนาในระยะที่มากกว่าประสิทธิภาพ [9, 10] กว่าโคลนจากเซลล์สำหรับผู้ใหญ่ เช่นลัส [11], fibroblasts [12], หรือ Sertoliเซลล์ [13], แนะนำว่า รัฐเซลล์ ES epigenetic อาจมากคล้ายกับโคลนต้น นี้สนับสนุนการความจริงที่มาจากเซลล์ ES faithfully blastocysts แสดงPou5f1 (ก่อนหน้านี้เรียกว่า Oct4) และ pluripotency ที่เกี่ยวข้องยีนในขณะที่เพียง 62% ของ blastocysts โคลนจากลัสเซลล์เรียกใช้ยีนเหล่านี้ [14], ซึ่งอาจจะเกี่ยวข้องกับการสังเกต conformation ค่อนข้างเปิด เพิ่ม euchromatic โครมาตินในเซลล์ ES [15]ปัญหาคือ ความยากลำบากในบริษัทฯ และการรักษาทั่วไป ES เซลล์หรือเซลล์ต้นกำเนิด pluripotent อาจเทียบเท่าบรรทัดจากหลายชนิด เหมือน ES เซลล์ได้ถูกอธิบายไว้ในกระต่าย แต่ เช่นเดียวกับหลายอื่น ๆ เลี้ยงลูกด้วยนม ทั่วไปทำงานด้วยผู้แต่งชิเมร่ามีการสาธิต [16-19]Undifferentiated เหมือน ES เซลล์ยังไม่ได้ถูกใช้สำหรับกระต่ายโอนนิวเคลียร์ ถึงแม้ว่ากระต่ายสดได้ถูกรับใช้ตราสารอนุพันธ์ ES ต่าง ๆ [16]Multipotent mesenchymal เซลล์ต้นกำเนิด (MSCs) น่าสนใจเลือกเซลล์ ES สำหรับการสร้างเป้าหมายของยีนสัตว์MSCs พร้อมมาจากไขกระดูกหรือเปลวพวกเขา proliferate ดีในวัฒนธรรม และมีการใช้เรียบร้อยแล้วสำหรับการโอนย้ายที่นิวเคลียร์ในวัวและสุกร [20-23] MSCs สามารถtransfected และรักษาตัว multipotent และพวกเขาสนับสนุนพัฒนา preimplantation โอนนิวเคลียร์โคลนราคาคล้ายกับ MSCs nonmanipulated [21, 22]ขณะนี้ชัดเจนว่า ความสำเร็จของการถ่ายโอนนิวเคลียร์แตกต่างอย่างเด่นชัดระหว่างเลี้ยงลูกด้วยนมต่าง ๆ มีกระต่ายหนึ่งตัวตรวจสอบสายพันธุ์ยาก นอกจากกลุ่มของเรา เพียงสามกลุ่มอื่น ๆ ประสบความสำเร็จในการสร้างโคลนกระต่าย [24-27], รวมหนึ่งสีเขียวเรืองแสงโปรตีน (EGFP) ถั่วเหลืองกระต่าย [28] นักวิจัยได้อย่างต่อเนื่องรายงานหนา1Supported บางส่วน โดย DFG ให้ SCHN 971/1-2 ปี 2005 – 2009 ดีลักซ์รวมและ425/1-1 และส่วนหนึ่งใน สหภาพยุโรปในกรอบเจ็ดโปรแกรม (FP7/2007 – 2011) ภายใต้ข้อตกลงหมายเลข 223485 เงินช่วยเหลือ(Plurisys)2Correspondence: A. Schnieke เก้าอี้สำหรับปศุสัตว์เทคโนโลยีชีวภาพ ศูนย์ชีวิต และอาหารวิทยาศาสตร์ Weihenstephanตู Muenchen, Liesel-Beckmann-Str 1, Freising 85354 เยอรมนีโทรสาร: 49 8161 712108 อีเมล์: [e-mail]ผู้เขียน 3These ส่วนเท่า ๆ กันเพื่องานนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อ
ความสามารถในการดำเนินการทางพันธุวิศวกรรมได้อย่างแม่นยำเช่น
ยีนที่กำหนดเป้าหมายในกระต่ายจะได้รับประโยชน์การวิจัยทางการแพทย์โดย
การเปิดใช้งานตัวอย่างเช่นการสร้างที่กำหนดทางพันธุกรรม
รุ่นกระต่ายของโรคของมนุษย์ นี้ได้เพื่อให้ห่างไกลไม่ได้รับ
เป็นไปได้เพราะขาดการทำงานของกระต่ายต้นกำเนิดตัวอ่อน
และเซลล์ตายของทารกในครรภ์และทารกปริกำเนิดสูงที่เกี่ยวข้องกับ
กระต่ายเซลล์ร่างกายโอนนิวเคลียร์ เราตรวจสอบการเพาะเลี้ยง
pluripotent และเซลล์หลายด้านความสามารถในการสนับสนุน
การผลิตของสัตว์ที่มีศักยภาพ ต้นกำเนิดตัวอ่อนกระต่ายสมมุติ
(ES) เซลล์ที่ได้มาและแสดงให้เห็นความสามารถในการในหลอดทดลองและในร่างกาย
แตกต่าง pluripotent เรารายงานครั้งแรกในชีวิตที่เกิด ESderived
กระต่ายฝัน เซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal กระต่าย (MSCs)
ได้มาจากไขกระดูกและความแตกต่างหลายด้าน
ได้แสดงให้เห็นในหลอดทดลอง โอนนิวเคลียร์ได้รับการดำเนินการกับ
ทั้งสองประเภทของเซลล์และการพัฒนาตัวอ่อนได้รับการประเมินในหลอดทดลอง
และในร่างกาย MSCs กระต่ายมีความโดดเด่นที่ประสบความสำเร็จมากกว่า ES
เซลล์เป็นผู้บริจาคนิวเคลียร์ MSCs ถูก transfected กับเรืองแสง
สร้างยีนนักข่าวและประเมินผลสำหรับการถ่ายโอนนิวเคลียร์
ความสามารถ transfected MSCs สนับสนุนการพัฒนาที่มี
ประสิทธิภาพเช่นเดียวกับ MSCs ปกติและมีผลในครั้งแรกในชีวิต
กระต่ายโคลนจาก MSCs จัดการทางพันธุกรรม การเปิดใช้
การเรืองแสงของการแสดงออกของยีนที่สร้างขึ้นใหม่นักข่าวใน
ตัวอ่อนได้รับการตรวจสอบเป็นวิธีการทำงานได้การระบุ
ตัวอ่อนในหลอดทดลอง แต่ไม่ได้ทำนายที่เชื่อถือได้ นอกจากนี้เรายัง
ตรวจสอบการโอนนิวเคลียร์อนุกรมเป็นวิธีการช่วยตาย
สัตว์.
เซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อนเซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal โอนนิวเคลียร์
กระต่าย
บทนำ
กระต่ายเป็นสัตว์ทดลองที่สำคัญ ความสามารถในการ
ดำเนินการทางพันธุวิศวกรรมได้อย่างแม่นยำเช่นยีนที่กำหนดเป้าหมายใน
กระต่ายจะได้รับประโยชน์การวิจัยทางการแพทย์โดยการเปิดใช้อย่างมาก
ตัวอย่างเช่นการพัฒนาที่กำหนดทางพันธุกรรมกระต่าย
รูปแบบของโรคของมนุษย์ นี้ได้เพื่อให้ห่างไกลไม่ได้รับเป็นไปได้
เพราะขาดการทำงานของกระต่ายต้นกำเนิดตัวอ่อน (ES)
เซลล์และการขาดประสิทธิภาพของเซลล์ร่างกายกระต่ายโอนนิวเคลียร์.
โอนนิวเคลียร์จากการเพาะเลี้ยงเซลล์ร่างกายได้รับการพัฒนา
ในส่วนที่จะหลีกเลี่ยงความจำเป็นสำหรับเซลล์ ES เพื่อสร้าง
ดัดแปรพันธุกรรม และยีนที่กำหนดเป้าหมายสัตว์ขนาดใหญ่ [1, 2] แต่
นี้ได้รับทางเทคนิคที่ยากกว่าเดิมหวังว่า.
ตอนนี้มากขึ้นกว่า 10 ปีหลังจากการสาธิตครั้งแรกของเรามี
เพียงตัวอย่างบางส่วนของยีนที่กำหนดเป้าหมายในการเลี้ยงลูกด้วยนมอื่น ๆ กว่า
หนู: COL1A1 ในแกะ [2], PRNP ในแกะวัว และแพะ
[3-5] GGTA1 ในสุกร [6, 7] IGH ในวัว [4] และ CFTR ใน
หมู [8].
เซลล์ชนิดที่ใช้เป็นปัจจัยสำคัญในการถ่ายโอนนิวเคลียร์
โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อจุดมุ่งหมายคือ ในการสร้างสัตว์ยีนที่กำหนดเป้าหมาย.
จะเป็นการดีที่เซลล์ที่ใช้ควรแพร่หลายอย่างกว้างขวางในวัฒนธรรม
อยู่รอดขั้นตอนการจัดการทางพันธุกรรมคล้ายคลึงกันสนับสนุน
การรวมตัวกันได้อย่างมีประสิทธิภาพที่เหมาะสมและมีประสิทธิภาพได้รับการ
reprogramming หลังจากการถ่ายโอนนิวเคลียร์.
เซลล์เมาส์ ES เป็นอย่างเหมาะสมสำหรับการกำหนดเป้าหมายของยีนและ
บาง หลักฐานที่บ่งชี้ว่าพวกเขายังมีนิวเคลียร์ประสบความสำเร็จมากกว่า
ผู้บริจาคกว่าเซลล์ชนิดที่แตกต่างกัน ตัวอ่อนโคลนจาก ES
เซลล์ที่พัฒนาขึ้นเพื่อระยะที่มีประสิทธิภาพมากขึ้น [9, 10] กว่าตัวอ่อน
จากเซลล์ผู้ใหญ่เช่นคิวมูลัส [11], รบราส์ [12] หรือ Sertoli
เซลล์ [13] บอกว่ารัฐ epigenetic ของเซลล์ ES อาจ จะ
คล้ายกับที่ของตัวอ่อนในช่วงต้น นี้ได้รับการสนับสนุนโดย
ความจริงที่ว่าตัวอ่อนที่ได้มาจากเซลล์ ES แสดงความนับถือ
Pou5f1 (เป็นที่รู้จักกันก่อนหน้านี้ Oct4) และ pluripotency ที่เกี่ยวข้องกับ
ยีนขณะที่มีเพียง 62% ของตัวอ่อนโคลนจากคิวมูลัส
เซลล์เปิดยีนเหล่านี้ [14] ซึ่งอาจจะเกี่ยวข้องกับการ
ที่ค่อนข้างเปิด มากขึ้น euchromatic, โครงสร้างโครมาตั้งข้อสังเกต
ในเซลล์ ES [15].
ปัญหาคือความยากในการที่ได้มาและรักษา
เซลล์ที่ชัดเจน ES หรือเทียบเท่าเหนี่ยวนำเซลล์ต้นกำเนิด pluripotent
บรรทัดจากหลายสายพันธุ์ เซลล์ ES เหมือนได้รับการอธิบายใน
กระต่าย แต่เช่นเดียวกับเลี้ยงลูกด้วยนมอื่น ๆ อีกมากมาย, ฟังก์ชั่นที่ชัดเจนโดย
การสร้างความฝันไม่ได้รับการแสดงให้เห็นถึง [16-19].
ความแตกต่างเซลล์ ES เหมือนยังไม่ได้ถูกนำมาใช้สำหรับ
การถ่ายโอนกระต่ายนิวเคลียร์แม้ว่ากระต่ายสด ได้รับ
. ใช้ตราสารอนุพันธ์ที่มีความแตกต่าง ES [16]
สูงสเซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal (MSCs) มีความน่าสนใจ
ทางเลือกในการ ES เซลล์สำหรับการสร้างสัตว์ยีนที่กำหนดเป้าหมาย.
MSCs จะได้มาอย่างง่ายดายจากไขกระดูกหรือเนื้อเยื่อไขมัน;
พวกเขางอกได้ดีในวัฒนธรรมและการได้รับ ใช้ประสบความสำเร็จ
สำหรับการถ่ายโอนนิวเคลียร์ในวัวและหมู [20-23] MSCs สามารถ
transfected และรักษาเอกลักษณ์หลายด้านของพวกเขาและพวกเขา
สนับสนุนการพัฒนา preimplantation ของการถ่ายโอนนิวเคลียร์
ตัวอ่อนในอัตราที่คล้ายกับ MSCs nonmanipulated [21, 22].
ตอนนี้มันเป็นที่ชัดเจนว่าความสำเร็จของการถ่ายโอนนิวเคลียร์ที่แตกต่าง
อย่างเห็นได้ชัดระหว่างเลี้ยงลูกด้วยนมต่าง ๆ กับกระต่ายหนึ่ง ของ
สปีชีส์ที่ยากมากขึ้นการตรวจสอบ นอกจากนี้กลุ่มของเราเพียงสาม
กลุ่มอื่น ๆ ที่ได้ประสบความสำเร็จในการสร้างกระต่ายโคลน [24
27] รวมทั้งโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (EGFP) จำลองพันธุ์
กระต่าย [28] นักวิจัยได้รายงานอย่างต่อเนื่องหนัก
1Supported ในส่วนของทุน DFG SCHN 971 / 1-2 2005-2009 และ ZA
425 / 1-1, และในส่วนของประชาคมยุโรปเจ็ดขอบข่ายงาน
โครงการ (FP7 / 2007-2011) ภายใต้ข้อตกลงทุนไม่มี 223485
(Plurisys).
2Correspondence: A. Schnieke เก้าอี้สำหรับปศุสัตว์
เทคโนโลยีชีวภาพศูนย์ชีวิตและวิทยาศาสตร์การอาหาร Weihenstephan,
TU Muenchen, Liesel-Beckmann-Str 1, 85354 Freising เยอรมนี.
โทรสาร: 49 8161 712108; E-mail: [e-mail]
เขียน 3These สนับสนุนอย่างเท่าเทียมกันในการทำงานนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นามธรรม
ความสามารถในการวิศวกรรมพันธุกรรมที่แม่นยำเช่น
ยีนเป้าหมายในกระต่ายจะได้รับประโยชน์การวิจัยทางการแพทย์โดย
) ตัวอย่างเช่นรุ่นของพันธุกรรมที่กำหนด
กระต่าย รูปแบบของการเกิดโรคในคน ได้ไม่ได้
เป็นไปได้เนื่องจากการขาดการทำงานของตัวอ่อนกระต่ายต้น
เซลล์และสูงของการตายปริกำเนิดที่เกี่ยวข้องกับ
และกระต่ายโซมาติกเซลล์นิวเคลียร์โอน เราตรวจและเพาะเลี้ยงเซลล์พลูริโพเทนท์
ซึ่งผลกระทบหลายด้านความสามารถในการรองรับ
การผลิตสัตว์วางอนาคต กระต่ายซึ่งตัวอ่อน ( ES ) เซลล์ต้น
ได้มาแสดงความสามารถในหลอดทดลองและในสัตว์ทดลอง
พลูริโพเทนท์ความแตกต่าง . เรารายงานสดครั้งแรกเกิด esderived
กระต่าย ไคเมร่า กระต่ายมีเซนไคมอลสเต็มเซลล์ ( MSCS )
ได้มาจากไขกระดูก และซึ่งผลกระทบหลายด้านความแตกต่าง
) หลอด อัศวยุชก็ออกมาด้วยความ
ทั้งสองประเภทของเซลล์และการพัฒนาของตัวอ่อนในหลอดทดลองและประเมิน
ในสิ่งมีชีวิต งานกระต่ายเป็นเด่นชัดมากขึ้นประสบความสำเร็จกว่า ES
เซลล์เป็นนิวเคลียร์ ผู้บริจาค งาน transfected กับยีนเรืองแสงเป็นนักข่าวสร้างและประเมินความสามารถการถ่ายโอนสำหรับ

นิวเคลียร์transfected งานสนับสนุนการพัฒนาด้วย
คล้ายกันประสิทธิภาพเป็นปกติและมีผลงานครั้งแรกในชีวิต
โคลนกระต่ายจากพันธุกรรมที่ควบคุมงาน . เปิดใช้งานยีนเรืองแสง
ของนักข่าวเกียรติยศ
ตัวอ่อนถูกสอบสวนเป็นวิธีการระบุตัวอ่อนในหลอดทดลองได้
แต่ไม่ทำนายที่เชื่อถือได้
เรายังการตรวจสอบอนุกรมนิวเคลียร์เป็นวิธีการช่วยสัตว์ตาย
.
ตัวอ่อนสเต็มเซลล์มีเซนไคมอลสเต็มเซลล์ , นิวเคลียร์ , โอน


แนะนำกระต่าย กระต่ายเป็นสัตว์ทดลองที่สำคัญ ความสามารถในการทำพันธุวิศวกรรม
แม่นยำเช่นยีนเป้าหมายใน
กระต่ายจะได้รับประโยชน์อย่างมากการวิจัยทางการแพทย์โดยเวอร์
ตัวอย่างเช่น การพัฒนาทางพันธุกรรมที่กำหนด
กระต่ายรูปแบบของการเกิดโรคในคน ได้ไม่ได้เป็นไปได้
เพราะขาดการทำงานกระต่ายต้นกําเนิดตัวอ่อน ( ES )
เซลล์และประสิทธิภาพของกระต่ายโซมาติคเซลล์นิวเคลียร์โอน โอนจากเซลล์เพาะเลี้ยงเซลล์นิวเคลียร์

ในส่วนที่ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อหลีกเลี่ยงความต้องการและเซลล์ในการสร้างยีนและยีนเป้าหมายขนาดใหญ่
สัตว์ [ 1 , 2 ] อย่างไรก็ตาม
นี้ได้ยากในทางเทคนิคมากขึ้นกว่าเดิมหวัง .
ตอนนี้ 10 กว่าปีหลังจากการแสดงครั้งแรกของเรา มี
เพียงไม่กี่ตัวอย่างของยีนเป้าหมายในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมอื่นมากกว่า
หนู : col1a1 ในแกะ [ 2 ] , prnp ในโค กระบือ แพะ แกะ และ 3 )
[ 5 ] , ggta1 ในสุกร [ 6 , 7 ] igh โค [ 4 ] และ cftr ใน
หมู [ 8 ] .
เซลล์ชนิดที่ใช้เป็นปัจจัยสำคัญในการถ่ายโอนนิวเคลียร์
โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อเป้าหมายคือการสร้างยีนเป้าหมายสัตว์
ใจกลาง เซลล์ที่ใช้ควรเผยแพร่อย่างกว้างขวางในวัฒนธรรม
อยู่รอดกระบวนการการจัดการทางพันธุกรรม สนับสนุนการเปรียบเทียบ
ด้วยประสิทธิภาพที่เหมาะสมและผ่านการทดสอบประสิทธิภาพ
reprogramming หลังจากการถ่ายโอนนิวเคลียร์
เมาส์ ES เซลล์จะเด่น เหมาะกับยีนเป้าหมายและ
หลักฐานบ่งชี้ว่าพวกเขาจะประสบความสำเร็จมากขึ้นกว่านิวเคลียร์
ผู้บริจาคแตกต่างชนิดเซลล์ เอ็มบริโอโคลนจากเซลล์ ES
พัฒนาระยะที่มากขึ้นประสิทธิภาพ [ 9 , 10 ] กว่าตัวอ่อน
จากเซลล์ผู้ใหญ่ เช่น สำลี [ 11 ] จาก [ 12 ] หรือเซอโตไล
เซลล์ [ 13 ] , ชี้ให้เห็นว่ารัฐ Epigenetic ของ ES เซลล์อาจ
มากขึ้นคล้ายกับที่ของตัวอ่อนก่อน . นี้ได้รับการสนับสนุนโดย
ความเป็นจริงที่โตมาจาก ES เซลล์อย่างแสดง
pou5f1 ( ที่รู้จักกันก่อนหน้านี้เป็น oct4 ) และที่เกี่ยวข้องเพลอริโพเทนซี
ยีนในขณะที่เพียงร้อยละ 62 ของบลาสโตซีสโคลนจากเซลล์เปิดใช้งานยีนี้ย
[ 14 ] ซึ่งอาจเกี่ยวข้องกับ
ค่อนข้างเปิดมากขึ้น euchromatic โครงสร้างของโครมาตินในเซลล์ )
. [ 15 ]
ปัญหาคือความยากในการใช้ และการรักษา
ที่ชัดเจนและเซลล์หรือเทียบเท่าจากพลูริโพเทนท์สเต็มเซลล์
เส้นจากหลายสายพันธุ์ และเช่นเดียวกับเซลล์ได้ถูกอธิบายไว้ใน
กระต่าย แต่เช่นเดียวกับสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมอื่นๆ สรุปฟังก์ชันโดย
สร้างคิเมร่าไม่ได้แสดง [ 16 – 19 ] .
undifferentiated ES เช่นเซลล์ยังไม่ได้ใช้
กระต่ายนิวเคลียร์โอน แม้ว่ากระต่ายอยู่ได้
การใช้ที่แตกต่างและอนุพันธ์ [ 16 ] .
ซึ่งผลกระทบหลายด้านมีเซนไคมอลสเต็มเซลล์ ( MSCS ) มีเสน่ห์
ทางเลือก ES เซลล์สำหรับสร้างยีนเป้าหมายสัตว์
งานจะพร้อมที่ได้จากเนื้อเยื่อกระดูกหรือไขมัน ;
พวกเขา proliferate ดีในวัฒนธรรม และได้ถูกใช้เรียบร้อยแล้ว
นิวเคลียร์โอนในโคและสุกร [ 20 – 23 ]
งานสามารถtransfected และรักษาเอกลักษณ์ซึ่งผลกระทบหลายด้าน และมีการพัฒนา preimplantation สนับสนุนของเอ็มบริโอถ่ายโอน
นิวเคลียร์ในอัตราที่ใกล้เคียงกับ nonmanipulated MSCS [ 21 , 22 ] .
มันคือตอนนี้ชัดเจนว่า ความสำเร็จของการย้ายนิวเคลียสแตกต่างกันอย่างเด่นชัดระหว่างสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมต่าง ๆ

กับกระต่ายหนึ่งยากกว่าชนิดอื่น นอกจากนี้ กลุ่มของเรามีเพียงสาม
กลุ่มอื่น ๆ ประสบความสำเร็จในการสร้างโคลนกระต่าย [ 24 – 27 ]
รวมทั้งโปรตีนเรืองแสงสีเขียว ( egfp ) ต้น
กระต่าย [ 28 ] นักวิจัยได้รายงานอย่างต่อเนื่องหนัก
1supported บางส่วนโดยจะมอบ schn 971 / 1-2 ปี 2005 – 2009 และซา
425 / 1-1 และในส่วนโปรแกรมกรอบ
7 ประชาคมยุโรป ( fp7 / 2550 – 2554 ) ภายใต้ข้อตกลงไม่ 223485 แกรนท์ ( plurisys

)2correspondence : ก. schnieke เก้าอี้สำหรับเทคโนโลยีชีวภาพปศุสัตว์
, ศูนย์กลางของชีวิตและ weihenstephan วิทยาศาสตร์อาหาร ,
ตู มุนเช่น liesel เบ็คมันน์ , STR 1 , 85354 Freising เยอรมนี .
โทรสาร : 49 การผลิต 712108 ; e-mail : แองเจลลิก้า schnieke @ wzw . ตั้ม เดอ
3these เขียนส่วนเท่า ๆ กัน งานนี้