Samples (approximately 1·5×1·5 cm c

Samples (approximately 1·5×1·5 cm coupons) of stainless steel (SS), polypropylene (PP) and glass (GL) were thoroughly cleaned with antibacterial detergent (1:9 vol/vol, Krezosan®, Tatrachema, Trnava, Slovakia) followed by rinsing in distilled water and 70% ethanol. The stainless steel and glass coupons were sterilized for 2 hours at 160ºC, and the polypropylene coupons were autoclaved for 15 min at 121ºC before inoculation with the bacterial suspension.

A 20-µl aliquot of the suspension (2×106 CFU) was placed in the centre of each coupon to form one droplet, and the coupons were carefully placed in desiccators above the salt slurries of MgCl2 (32% RH at 30ºC) and CoCl2 (64% RH at 30ºC). Subsequently, the desiccators were held aerobically in a dark room at 30ºC. A set of control time zero coupons (t0) were inoculated and immediately processed, as described below, without placement in desiccators, to verify initial concentrations. The relative humidity values of 32 and 64% were chosen for the purpose of the current study as representative of the lower (i.e. < 50% RH) and the higher range (> 50% RH) relative humidities, respectively. In addition, 64% RH is representative of the most common relative humidity level found to occur inside buildings.

The coupons were removed from the humidity chamber at the appropriate sampling time and were transferred to 20 ml of ABM broth and sonicated at 38 kHz for 5 minutes to liberate the attached cells. Subsequently, 100-µl of sample was streaked on the ABM agar plate and the bacterial count (log10 CFU per coupon) was determined after aerobic cultivation at 30ºC for 48 h. Ten-fold dilutions in ABM broth were done if necessary. When no colony forming has been detected, freshly inoculated coupons were removed from the humidity environment at the sampling times and deposited on the surface of ABM agar plate for 5 min. After being aseptically removed, the plates were incubated at 30ºC for 48 h in aerobic condition and the viable cells were observed. This procedure will be further discussed as a "coupon-printing method". When the coupon-printing method failed to detect viable cells of A. butzleri, an enrichment procedure was performed at further sampling times. The freshly inoculated coupons were removed from the humidity chambers and transferred to 20 ml of ABM or 20 ml of Johnson-Murano basal medium (JMBM, antibiotics were not added) (7) at the sampling time. The enrichment media were incubated at 30ºC for 72 h and 168 h after sonication for 5 min. Therefore 100-µl aliquot of enriched sample was plated on ABM agar plate and incubated at 30ºC for 48 h. The ABM medium represents non-specific enrichment medium whereas JMBM is selective medium for isolation of arcobacters. Two coupons per each material, cell suspension and humidity environment were used at each sampling time and the experiment was done in triplicate. For bacterial count determined, one- or two-way analysis of variances (ANOVA) at a level of significance P < 0.05 was used for statistical treatment (QC. Expert 2.7, Trilobite Ltd., Czech Republic).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่าง (ประมาณ 1·5 × 1·5 ซม.คูปอง) ของเหล็กกล้าไร้สนิม (SS), โพรพิลีน (PP) และกระจก (GL) ถูกทำความสะอาด ด้วยยาฆ่าเชื้อโรคผงซักฟอก (1:9 vol/vol, Krezosan ® Tatrachema, Trnava สโลวาเกีย) ตาม ด้วยการล้างในเอทานอ 70% และน้ำกลั่น สแตนเลสและกระจกคูปองถูก sterilized 2 ชั่วโมงที่ 160ºC และคูปอง polypropylene มี autoclaved สำหรับ 15 นาทีที่ 121ºC ก่อน inoculation ด้วยการระงับเชื้อแบคทีเรียส่วนลงตัว 20 µl ของการระงับ (2 × 106 CFU) ถูกวางลงในคูปองเพื่อแบบหยดหนึ่ง และคูปองนี้รอบคอบไว้ใน desiccators เหนือ slurries เกลือของ MgCl2 (32% RH ที่ 30ºC) และ CoCl2 (64% RH ที่ 30ºC) ในเวลาต่อมา desiccators ที่ถือได้ว่าเป็น aerobically ในห้องมืดที่ 30ºC ชุดควบคุมเวลา (t0) คูปองศูนย์ inoculated และทันทีประมวล ผล เก็บตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง ไม่ มีตำแหน่งใน desiccators การตรวจสอบความเข้มข้นเริ่มต้น ค่าความชื้นสัมพัทธ์ของ 32 และ 64% ที่ถูกเลือกเพื่อการศึกษาปัจจุบันเป็นตัวแทนของด้านล่าง (เช่น < 50% RH) และสูงกว่าช่วง (> 50% RH) ญาติ humidities ตามลำดับ นอกจากนี้ 64% RH เป็นตัวแทนของระดับความชื้นสัมพัทธ์มากที่สุดที่พบจะเกิดขึ้นภายในอาคารคูปองที่ออกจากห้องความชื้นเมื่อสุ่มตัวอย่างที่เหมาะสม และถูกโอนย้ายไป 20 ml ของซุปชได้ และ sonicated ที่ 38 kHz 5 นาทีเพื่อปลดปล่อยเซลล์แนบ ต่อมา 100 µl ของตัวอย่างคือลายบนแผ่น agar ชได้ และแบคทีเรีย (log10 CFU ต่อคูปอง) กำหนดหลังจากปลูกแอโรบิกที่ 30ºC สำหรับ 48 h. dilutions Ten-fold ในซุปชได้ทำถ้าจำเป็น เมื่ออาณานิคมขึ้นไม่พบ คูปอง inoculated สดถูกเอาออกจากสภาพแวดล้อมความชื้นเวลาสุ่มตัวอย่าง และฝากบนพื้นผิวของจาน agar ชได้ใน 5 นาที หลังจากถูก aseptically เอา แผ่นถูก incubated ที่ 30ºC สำหรับ h 48 ในสภาพแอโรบิก และสุภัคเซลล์ทำงานได้ ขั้นตอนนี้จะเป็นการกล่าวถึงเพิ่มเติมเป็น "วิธีพิมพ์คูปอง" เมื่อไม่สามารถตรวจพบเซลล์ทำงานได้ของ A. butzleri วิธีพิมพ์คูปอง ที่ดำเนินการขั้นตอนการขอครั้งต่อไปสุ่มตัวอย่าง คูปอง inoculated สดถูกเอาออกจากห้องความชื้น และโอนย้ายไป 20 ml ชได้ หรือ 20 ml ของ Johnson Murano โรคปานกลาง (JMBM ไม่มีเพิ่มยาปฏิชีวนะ) (7) เมื่อสุ่มตัวอย่าง สื่อโดดเด่นถูก incubated ที่ 30ºC 72 h และ 168 h หลัง sonication ใน 5 นาที ดังนั้น ส่วนลงตัว 100 µl ของอุดมอย่างถูกเคลือบบนแผ่น agar ชได้ และ incubated ที่ 30ºC สำหรับ 48 h สื่อชได้แสดงขอเจาะจงสื่อกลางใช้สำหรับแยกของ arcobacters เป็น JMBM ใช้คูปองสองต่อแต่ละวัสดุ เซลล์ระงับความชื้นสภาพแวดล้อมและในแต่ละครั้งสุ่มตัวอย่าง และทดลองทำใน triplicate สำหรับการตรวจนับแบคทีเรียกำหนด ใช้ way หนึ่ง หรือทูวิเคราะห์ผลต่าง (การวิเคราะห์ความแปรปรวน) ที่ระดับนัยสำคัญของ P < 0.05 สำหรับรักษาสถิติ (QC ผู้เชี่ยวชาญ จำกัดไทรโลไบต์ สาธารณรัฐเช็ก 2.7) การ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่าง (ประมาณ 1 · 5 × 1 · 5 ซมคูปอง) สแตนเลส (เอสเอส) โพรพิลีน (PP) และกระจก (GL) ได้รับการทำความสะอาดอย่างละเอียดด้วยผงซักฟอกต้านเชื้อแบคทีเรีย (1: 9 ปริมาตร / ปริมาตร, Krezosan®, Tatrachema, Trnava, สโลวาเกีย) ตามด้วยการล้างในน้ำกลั่นเอทานอล 70% สแตนเลสและคูปองแก้วได้รับการฆ่าเชื้อเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่160ºCและคูปองโพรพิลีนที่ถูกเบาเป็นเวลา 15 นาทีที่121ºCก่อนที่จะฉีดวัคซีนกับการระงับแบคทีเรีย. aliquot 20 ไมโครลิตรของการระงับ (2 × 106 CFU) ถูกวางไว้ใน ศูนย์กลางของคูปองแต่ละรูปแบบหนึ่งหยดและคูปองถูกวางไว้อย่างรอบคอบใน Desiccators ข้างต้น slurries เกลือ MgCl2 (ที่ 32% RH ที่ 30 องศาเซลเซียส) และ COCl2 (64% RH ที่ 30 องศาเซลเซียส) ต่อมา Desiccators ถูกจัดขึ้นออกซิเจนในห้องมืดที่ 30 องศาเซลเซียส ชุดของเวลาที่ควบคุมศูนย์คูปอง (t0) ได้รับเชื้อและประมวลผลทันทีตามที่อธิบายไว้ด้านล่างโดยไม่ต้องจัดวางใน Desiccators เพื่อตรวจสอบความเข้มข้นเริ่มต้น ค่าความชื้นสัมพัทธ์ 32 และ 64% ได้รับการแต่งตั้งเพื่อวัตถุประสงค์ในการการศึกษาในปัจจุบันเป็นตัวแทนของที่ต่ำกว่า (เช่น <50% RH) และช่วงที่สูงขึ้น (> 50% RH) ความชื้นญาติตามลำดับ นอกจากนี้ 64% RH เป็นตัวแทนของระดับความชื้นสัมพัทธ์ที่พบมากที่สุดที่พบจะเกิดขึ้นภายในอาคาร. คูปองที่ถูกถอดออกจากห้องที่มีความชื้นในเวลาการสุ่มตัวอย่างที่เหมาะสมและถูกย้ายไป 20 มล. ของน้ำซุป ABM และ sonicated ที่ 38 เฮิร์ทซ์ 5 นาทีเพื่อปลดปล่อยเซลล์ที่แนบมา ต่อมา 100 ไมโครลิตรของกลุ่มตัวอย่างได้รับลายบนแผ่นวุ้น ABM และนับแบคทีเรีย (log10 CFU ต่อคูปอง) ถูกกำหนดหลังจากปลูกแอโรบิกที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง เจือจางสิบเท่าในน้ำซุป ABM ได้ทำในกรณีที่จำเป็น เมื่ออาณานิคมสร้างไม่ได้รับการตรวจพบเชื้อคูปองสดที่ถูกถอดออกจากสภาพแวดล้อมความชื้นในช่วงเวลาการสุ่มตัวอย่างและการวางลงบนพื้นผิวของแผ่นวุ้น ABM เป็นเวลา 5 นาที หลังจากที่ถูกลบออกปลอดเชื้อ, จานที่ถูกบ่มที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงในสภาพแอโรบิกและเซลล์ทำงานได้ถูกตั้งข้อสังเกต ขั้นตอนนี้จะมีการหารือต่อไปว่าเป็น "วิธีการพิมพ์คูปอง" เมื่อวิธีการพิมพ์คูปองล้มเหลวในการตรวจสอบการทำงานของเซลล์ butzleri A. , ขั้นตอนการตกแต่งที่ได้ดำเนินการในช่วงเวลาที่เก็บตัวอย่างต่อไป คูปองเชื้อสดใหม่ออกจากห้องความชื้นและย้ายไป 20 มิลลิลิตร ABM หรือ 20 มล. ของจอห์นสันมูราโน่กลางพื้นฐาน (JMBM ยาปฏิชีวนะที่ไม่ได้เพิ่ม) (7) ในช่วงเวลาการสุ่มตัวอย่าง สื่อการตกแต่งถูกบ่มที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมงและ 168 ชั่วโมงหลังจาก sonication เป็นเวลา 5 นาที ดังนั้นหาร 100 ไมโครลิตรของกลุ่มตัวอย่างอุดมได้รับการเคลือบบนแผ่นวุ้น ABM และบ่มที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง กลาง ABM แสดงให้เห็นถึงการตกแต่งกลางที่ไม่เฉพาะเจาะจงในขณะที่ JMBM เป็นสื่อเลือกสำหรับการแยก arcobacters สองใบต่อวัสดุแต่ละเซลล์แขวนลอยและสภาพแวดล้อมที่มีความชื้นถูกนำมาใช้ในแต่ละช่วงเวลาการสุ่มตัวอย่างและการทดลองได้ทำในเพิ่มขึ้นสามเท่า สำหรับการนับแบคทีเรียกำหนดหนึ่งหรือการวิเคราะห์แบบสองทางของความแปรปรวน (ANOVA) ที่ระดับนัยสำคัญ P <0.05 ที่ใช้สำหรับการรักษาทางสถิติ (QC. ผู้เชี่ยวชาญ 2.7 Trilobite จำกัด สาธารณรัฐเช็ก)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่าง ( ประมาณ 1 ด้วย 5 × 1 5 ซม ด้วยคูปอง ) สแตนเลส ( SS ) , โพรพิลีน ( PP ) และแก้ว ( GL ) ทําความสะอาดกับแบคทีเรียผงซักฟอก ( 1 : 9 Vol / Vol krezosan ® , tatrachema Trnava , สโลวะเกีย , , ) ตามด้วยการล้างในน้ำกลั่นและแอลกอฮอล์ 70% สแตนเลส กระจก คูปองถูกฆ่าเชื้อเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ที่ 160 º C และโพรพิลีนถูกสังเคราะห์คูปอง 15 นาทีที่ 121 º C ก่อนการระงับแบคทีเรีย20 - µ L ส่วนลงตัวของช่วงล่าง ( 2 × 106 cfu ) ถูกวางไว้ในศูนย์กลางของแต่ละคูปองในรูปแบบหนึ่งหยด และคูปองที่ถูกวางไว้อย่างรอบคอบในโถทำแห้งเหนือเกลือ slurries ไอโซโทป ( 32 เปอร์เซ็นต์ที่ 30 º C ) และ cocl2 ( 64 เปอร์เซ็นต์ 30 º C ) ภายหลัง ยากง่ายถูกจัดขึ้น aerobically ในห้องมืดที่ 30 º C . ชุดควบคุมเวลาศูนย์คูปอง ( t0 ) ปลูกเชื้อและประมวลผลทันทีตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง โดยจัดวางในโถทำแห้งเพื่อตรวจสอบความเข้มข้นเริ่มต้น ความชื้นสัมพัทธ์เท่ากับ 32 และ 64 ถูกเลือกสำหรับวัตถุประสงค์ของการศึกษาในปัจจุบันเป็นตัวแทนของล่าง ( เช่น < 50 เปอร์เซ็นต์ ) และสูงกว่าช่วง ( > 50 % ความชื้นสัมพัทธ์ชื้นสัมพัทธ์ ตามลำดับ นอกจากนี้ 64 เปอร์เซ็นต์คือตัวแทนของที่พบมากที่สุดที่ระดับความชื้นสัมพัทธ์พบเกิดขึ้นภายในอาคารคูปองที่ถูกเอาออกจากความชื้น เครื่องที่เหมาะสม จำนวน เวลา และมีการโอน 20 มล. ของน้ำซุป และ sonicated ABM ที่ 38 kHz สำหรับ 5 นาทีเพื่อปลดปล่อยแนบเซลล์ จำนวน 100 - µ l ตัวอย่างลายบน ABM agar plate และแบคทีเรีย ( CFU LN / ใบ ) คือการพิจารณาหลังจากปลูก 30 ºแอโรบิกเป็นเวลา 48 ชั่วโมง สิบเท่าเจือจางในน้ำซุป ABM ทำถ้าจำเป็น เมื่อไม่มีการสร้างอาณานิคมที่ถูกตรวจพบ เชื้อสดคูปองถูกเอาออกจากความชื้น สภาพแวดล้อมที่ จำนวนครั้งและฝากบนพื้นผิวของ ABM agar plate สำหรับ 5 นาทีหลังจากถูก aseptically ออกแผ่นถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง ºเงื่อนไขแอโรบิกและเซลล์ทำงานได้ลดลง ขั้นตอนนี้จะเพิ่มเติมกล่าวถึงเป็น " วิธีการพิมพ์คูปอง " เมื่อคูปองที่พิมพ์วิธีการล้มเหลวในการตรวจสอบเซลล์วางอนาคตของ butzleri , ขั้นตอนการปฏิบัติในการต่อไป จำนวนครั้ง สดจากคูปองที่ถูกถอดออกจากความชื้นห้องและโอนไปยัง 20 ml ของ ABM หรือ 20 ml ของจอห์นสัน Murano แรกเริ่มขนาดกลาง ( jmbm ยาปฏิชีวนะไม่เพิ่ม ) ( 7 ) และเวลา สื่อเสริมอุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 72 ชั่วโมง และº 168 ชั่วโมงหลังจาก 5 นาที จึง sonication 100 - µ L ส่วนลงตัวของอุดมศึกษา ชุบบน ABM agar plate บ่มที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง º ABM สื่อนำเสนอสื่อเสริมเฉพาะส่วน jmbm ขนาดกลาง ใช้สำหรับการแยก arcobacters . คูปองสองต่อวัสดุแต่ละเซลล์แขวนลอย และความชื้น สภาพแวดล้อมที่ใช้ในแต่ละคน เวลา และ ทำการทดลองทั้งสามใบ สำหรับจุลินทรีย์ที่กำหนดหนึ่งหรือวิธีวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ANOVA ) ที่ระดับ p < 0.05 การใช้วิเคราะห์ ( QC ผู้เชี่ยวชาญ 2.7 ไตรโลไบท์ จำกัด , สาธารณรัฐเช็ก )